實(shí)驗(yàn)一：常用玻璃器皿的清洗及包扎

1、一.目的與要求試驗(yàn)一常用玻璃器皿的清洗及包扎一 生疏微生物試驗(yàn)所需各種常用器皿的名稱和規(guī)格。二 學(xué)會(huì)正確的清洗玻璃器皿的方法和包扎方法二.原理吸管等進(jìn)展妥當(dāng)包扎，試管和三角瓶要做棉塞。清洗方法依據(jù)試驗(yàn)?zāi)康?、器皿的種類 放的物品、洗凈劑的類別和沾污程度等的不同而有所不同，不同的器皿包扎方法也不同。 三.材料與儀器一常用的各種玻璃器皿。二洗滌工具和去污粉、肥皂、洗滌液。四.操作步驟一清洗玻璃器皿的清洗購(gòu)置的玻璃器皿均含有游離堿，故應(yīng)先將其浸于洗液或 2%的鹽酸溶液中數(shù)小時(shí)，再用自來水沖洗干凈。用過的玻璃器皿的清洗試管、培育皿、三角燒瓶、燒杯 可用瓶刷或海綿沾上肥皂、洗衣粉或去污粉等洗滌 垢完全洗凈

2、，假設(shè)掛有水珠，則需用洗滌液或洗液浸泡數(shù)小時(shí)，再用自來水充分沖洗，洗滌干凈的器皿倒置與鐵絲框內(nèi)或有空心格子木架上，室內(nèi)晾干。玻璃吸管、滴管一般用完后應(yīng)馬上用清水和蒸餾水浸泡或沖洗，免得枯燥后以沖洗干凈，如附有污物可用洗液浸泡。載玻片與蓋玻片帶有油污的應(yīng)擦去有無后用熱乙醇、丙酮、二甲苯等溶液浸泡1015min，溶液油垢然后用水沖洗，再用洗滌液浸泡、沖洗，干后置于 95%乙醇中保存?zhèn)溆谩６Ａ髅蟮陌嘤蟪Ｓ门f報(bào)紙或牛皮紙包緊，一般以510 套培育皿作一包。包好后進(jìn)展干熱或濕熱滅菌，如將培育皿放入金屬不銹鋼筒內(nèi)進(jìn)展熱滅，則不必用紙包。試管和三角瓶試管管口和三角瓶都需要塞以棉花塞或泡膜塑料塞縫隙

3、，不能過緊也不能過松，長(zhǎng)度不少于管口直徑的二倍，約2/3 塞進(jìn)管口。假設(shè)干支試管用繩扎在一起，在棉塞部格外包裹牛皮紙或2 層舊報(bào)紙，再扎好。三角瓶每個(gè)單獨(dú)用牛皮紙或舊報(bào)紙包扎棉塞。吸管洗凈烘干后的吸管，在口吸的一端月0.5cm 處，用尖頭鑷子或針塞入少許脫脂棉，以免使用時(shí)將雜菌吹入其中或不慎將微生物吸出管外棉花要塞得松緊恰當(dāng)然后分別將 每支吸管尖端斜放在舊報(bào)紙的近左端，以45 度左右的角度螺旋形卷起來，右端多余的報(bào)紙大一小結(jié)，不使散開。五、試驗(yàn)報(bào)告一結(jié)果檢查試驗(yàn)效果二思考題能否用橡皮塞、木塞來代替棉塞，為什么？玻璃器皿清洗時(shí)應(yīng)留意什么？試驗(yàn)二 一般光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和使用一、目的與要求一 學(xué)習(xí)一

4、般光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、局部功能及使用方法。二 學(xué)習(xí)并把握油鏡的原理的使用方法。二、原理一般光學(xué)顯微鏡由機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)2 大局部構(gòu)成。在光學(xué)系統(tǒng)中物鏡的性能最為關(guān)鍵， 高區(qū)分率。三、材料與儀器一菌種金黃色葡萄球菌及枯草桿菌染色玻片標(biāo)本，啤酒酵母水浸片。二其他香柏油、二甲苯、顯微鏡、擦鏡紙。四、操作步驟一34cm，鏡檢時(shí)姿勢(shì)要端正。二光鏡采集自然光或燈光作為照明光源時(shí)或平面反光鏡并調(diào)整其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮度適宜。三低倍鏡觀看將標(biāo)本玻片置于載物臺(tái)上用 標(biāo)本夾夾住移動(dòng)推動(dòng)器使觀看對(duì)象處 在物鏡的正下方，下降10物鏡，使其接近標(biāo)本，用粗調(diào)整器粗調(diào)螺旋漸漸升起鏡筒， 消滅圖像后再用細(xì)調(diào)整細(xì)調(diào)螺

5、旋調(diào)整圖像至清楚通過標(biāo)本夾推動(dòng)器漸漸移動(dòng)玻片， 認(rèn)真觀看標(biāo)本各部位，找到適宜目的物，認(rèn)真觀看。四高倍鏡觀看 在低倍鏡下找到適宜的觀看目標(biāo)并將其移至視野中心后，轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)清楚，利用推動(dòng)器移動(dòng)標(biāo)本認(rèn)真觀看并記錄。五2cm12 足光圈，用粗調(diào)整器將鏡筒緩緩上升，直至視野中消滅物象并用細(xì)調(diào)整器使其清楚為止。六顯微鏡用后處理上升鏡筒，取下載玻片。用擦鏡紙擦去鏡頭上的香柏油，然后擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上的殘留的油跡，然后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。用擦鏡紙清潔其他物鏡和目鏡，用綢布清潔顯微鏡的金屬部件。將各局部復(fù)原，反光鏡垂于鏡座，將物鏡轉(zhuǎn)成“八字形“再向下旋，同時(shí)把聚光鏡降下， 以免物鏡與聚光

6、鏡發(fā)生碰撞危急。五、試驗(yàn)報(bào)告一結(jié)果分別繪出在不同物鏡下觀看到的不同菌種的形態(tài)，同時(shí)注明放大倍數(shù)。二思考題油鏡與一般物鏡在使用方法上有何不同？應(yīng)特別留意什么？顯微鏡中調(diào)整光線強(qiáng)弱的裝置有哪些？試驗(yàn)三酵母菌形態(tài)觀看一、目的與要求觀看酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式。二、原理染成藍(lán)色的為死細(xì)胞，無色的為活細(xì)胞、三、材料與儀器一 啤酒酵母，假絲酵母，漢遜酵母。二 顯微鏡，載玻片，蓋玻片，接種針，酒精燈。三 呂氏美藍(lán)染液。四、操作步驟一 在干凈載玻片中心加一滴呂氏美藍(lán)染色液于美藍(lán)液中，混合均勻。二取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后漸漸將蓋玻片放下以免產(chǎn)生氣泡使其蓋在菌液上，將多余菌液用吸水紙吸干。三依據(jù)顏

7、色來區(qū)分死活細(xì)胞。四 染色約0.5h 后再進(jìn)展觀看，留意四細(xì)胞數(shù)量是否增加。五、試驗(yàn)報(bào)告(一) 結(jié)果 繪圖說明你所觀看到的酵母形態(tài)特征。(二) 思考題在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)分于一般細(xì)菌？酵母水浸片制作室應(yīng)留意什么？試驗(yàn)十三培育基的制備一、 目的與要求(一) 學(xué)習(xí)制備培育基的根本技術(shù)。 (二) 制備牛肉膏蛋白瓊脂培育基。二、 原理牛肉膏蛋白培育基時(shí)一種應(yīng)用最廣泛和最一般的細(xì)菌培育基這種培育基中含有一般細(xì)菌生長(zhǎng)生殖所需要的最根本的養(yǎng)分物質(zhì)，可供生殖之用。制作固體培育基時(shí)須加2%瓊脂，培育細(xì)菌時(shí)，應(yīng)用烯酸或稀堿將PH 調(diào)至中性或微堿性。牛肉膏蛋白培育基的配方：牛肉膏0.%5 蛋白胨1%

8、 NaCL0.5%pH7.47.6.三、材料與儀器一試劑牛肉膏，蛋白胨，Nacl1mol/L;NaoH1 mol/L HCL二其他試管，三角燒杯，燒杯，量筒，漏斗，乳膠管，彈簧夾，紗布，棉花，牛皮紙，線繩，pH 試紙，電爐，臺(tái)秤。四、操作步驟(一) 中稱量，用熱水熔化后倒入燒杯，蛋白胨易吸濕，稱量時(shí)要快速。(二) 溶解在燒杯中參加少于所需要的水量，加熱，逐一參加各成分，使其溶解，瓊脂 在溶液煮沸后參加，溶化過程需要不斷攪拌。加熱時(shí)應(yīng)留意火力，勿使培育基燒焦或溢出。溶好后，缺乏所需水分。(三) 調(diào) PH 1 mol/L NaoH pH 調(diào)至所需范圍。(四) 過濾趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利于某

9、些試驗(yàn)結(jié)果的觀看，如無特別要求時(shí)可省去此步驟。(五) 分裝按試驗(yàn)要求，可將配置的培育基分裝入試管內(nèi)或三角瓶?jī)?nèi)，分裝裝置照試驗(yàn)圖-8 所示：分裝時(shí)留意，勿使培育基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。1液體分裝分裝高度以試管高度的1/4 左右為宜，分裝三角瓶的量則依據(jù)需要而定，一般以不超過三角瓶容積的1/2 為宜。固體分裝分裝試管，其裝量不超過量筒的 1/5，滅菌后制成斜面，斜面長(zhǎng)度不超過管長(zhǎng)的1/2。分裝三角瓶，以不超過容積的1/2 為宜。半固體分裝 裝置以試管高度的 1/3 為宜，滅菌后垂直待凝六加棉塞分裝完畢后，在試管或三角瓶口塞上棉或泡沫塑料塞及試管帽等，阻擋外界微生物進(jìn)入培育基而造成污

10、染，并保證有良好的通氣性能。七包扎 棉塞頭上包一層牛皮紙，扎緊，即可進(jìn)展滅菌。八保存滅菌后的培育基放入37培育箱中培育24h，以檢驗(yàn)滅菌的效果無污染方可使用。五、試驗(yàn)報(bào)告一結(jié)果說明你配置培育基過程中的狀況。思考題培育基配置時(shí)應(yīng)留意什么問題？為什么？分裝培育基時(shí)為什么要使用彈簧夾？培育基配好后，為什么要馬上滅菌？試驗(yàn)四干熱滅菌及高壓蒸汽滅菌一、目的與要求二、原理干熱滅菌時(shí)利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白凝固變形而到達(dá)滅菌的目的 ，時(shí)間長(zhǎng)12h.高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放入一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱， 閥，連續(xù)溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變形而到達(dá)滅菌的目的。0.1MPa(15Ib/In1.05

11、kg/cm)121.5。1530min 可到達(dá)徹底滅菌，滅菌的溫度及維持的時(shí)間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體狀況而有所轉(zhuǎn)變。三、材料與儀器吸管，培育皿，試管，電熱枯燥箱，手提式高壓滅菌蒸汽滅菌鍋，牛肉膏蛋白胨培育基、蒸餾水。四、操作步驟一 干熱滅菌法，適用于空的、枯燥的玻璃器皿的滅菌。培育基不適用。將包好的待滅菌物品培育皿、試管、吸管等放入電熱枯燥箱留意留肯定間隙管好箱門。接通電源，翻開排氣孔，使箱內(nèi)濕空氣能逸出，旋動(dòng)恒溫調(diào)整器，保持加熱升溫狀態(tài)， 100時(shí)關(guān)閉排氣孔。當(dāng)溫度升到 160170時(shí)，借恒溫調(diào)整器的自動(dòng)把握，保持此溫度2h。切斷電源，冷卻至 70時(shí)，翻開箱門，取出滅菌物品70以前，切

12、勿翻開箱門，否則溫度驟降導(dǎo)致玻璃器皿炸裂、二 高壓蒸汽滅菌首先將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)參加適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌物品內(nèi)裝培育基或小的三角瓶，不要裝的太擠，以免阻礙塞。加蓋，旋緊。121 20-30 分鐘。停頓加熱，待壓力表的壓力至零位時(shí)，翻開排氣閥，旋松螺栓，翻開蓋子，取出滅菌物品。留意，當(dāng)壓力不為零時(shí)，不能開蓋取物，否則由于壓力突然下降，容器內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染而發(fā)生污染，甚至灼傷操作者。高壓滅菌鍋上的安全閥，是保障安全使用的重要機(jī)構(gòu)，不得任憑調(diào)整。五、試驗(yàn)報(bào)告一 結(jié)果 檢查滅菌是否徹底。二 思考題干熱滅菌操作過程中應(yīng)留意哪

13、些問題，為什么？為什么干熱滅菌所需溫度要比濕熱滅菌高?高壓蒸汽滅菌時(shí)，為什么要排盡鍋內(nèi)的冷空氣？試驗(yàn)十七微生物的平板菌落基數(shù)法一，目的與要求把握用平板菌落計(jì)數(shù)法來測(cè)定肯定數(shù)量樣品中微生物細(xì)胞數(shù)目。二， 原理平板菌落計(jì)數(shù)法是通過將樣品制成一系列不同的稀釋液目，一般認(rèn)為每一個(gè)菌落是由一個(gè)細(xì)胞增殖后形成，所以可計(jì)算出樣品的含菌量。三， 材料與儀器一 樣品，無菌水。二 培育基 一般養(yǎng)分瓊脂培育基。三 培育皿，恒溫培育箱等。四，試驗(yàn)步驟一 樣品處理1，在無菌的條件下，準(zhǔn)確稱取10g 固體樣品或量取10mL液體樣品。2 10g 固體樣品快速倒入已滅菌的裝有玻璃珠和90mL 1530min,10 倍的菌懸液

14、，10ml 10 倍。31 1mL 10 9ml 無菌水的試管中，搖勻后得稀釋 100 10、1010、10 倍，稀釋程度以樣品中可能含有的活菌數(shù)多少而定。制平板混合平板培育計(jì)數(shù)法上述樣品稀釋好后，用吸管取適當(dāng)稀釋倍數(shù)的樣品稀釋液1mL,放入已滅菌的培育皿中再快速倒入約15mL 溶化而冷卻至50左右的瓊脂培育基將培育皿按順、反時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)搖動(dòng)，使樣品稀釋液和培育基混勻，放平，冷卻凝固后倒轉(zhuǎn)放置，在被測(cè)微生物最適溫度下培育每一個(gè)稀釋樣品各做三個(gè)培育皿，當(dāng)消滅菌落后，用計(jì)數(shù)器進(jìn)展計(jì)數(shù)。涂抹平板培育計(jì)數(shù)法 先將溶化并冷卻至50左右的15ML瓊脂培育基注入已滅菌的培育0.2mL 。五、試驗(yàn)報(bào)告一結(jié)果計(jì)

15、算混合平板培育計(jì)算公式：每克樣品菌數(shù)=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)X 稀釋倍數(shù)涂抹平板培育計(jì)算公式：每克樣品菌數(shù)=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)X X5思考題平板技術(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？AYUI;09RA qweLO 6EZSGD3A5RTG試驗(yàn)五 酵母菌形態(tài)觀看一、目的與要求觀看酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式。二、原理胞的鑒別染成藍(lán)色的為死細(xì)胞，無色的為活細(xì)胞、三、材料與儀器一 啤酒酵母，假絲酵母，漢遜酵母。二 顯微鏡，載玻片，蓋玻片，接種針，酒精燈。三 呂氏美藍(lán)染液。四、操作步驟一 在干凈載玻片中心加一滴呂氏美藍(lán)染色液，以無菌操作接種環(huán)挑取少量酵母菌體放于美藍(lán)液中，混合均勻。二以免產(chǎn)生氣泡使其

16、蓋在菌液上，將多余菌液用吸水紙吸干。三并依據(jù)顏色來區(qū)分死活細(xì)胞。四 染色約0.5h 后再進(jìn)展觀看，留意四細(xì)胞數(shù)量是否增加。五、試驗(yàn)報(bào)告(一結(jié)果 繪圖說明你所觀看到的酵母形態(tài)特征。(二思考題在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)分于一般細(xì)菌？酵母水浸片制作室應(yīng)留意什么？試驗(yàn)十三培育基的制備一、目的與要求(一) 學(xué)習(xí)制備培育基的根本技術(shù)。 (二) 制備牛肉膏蛋白瓊脂培育基。二、原理牛肉膏蛋白培育基時(shí)一種應(yīng)用最廣泛和最一般的細(xì)菌培育基這種培育基中含有一般細(xì) 菌生長(zhǎng)生殖所需要的最根本的養(yǎng)分物質(zhì)，可供生殖之用。制作固體培育基時(shí)須加2%瓊 脂培育細(xì)菌時(shí)應(yīng)用烯酸或稀堿將 PH 調(diào)至中性或微堿性牛肉膏蛋白培育基

17、的配方：牛肉膏0.%5蛋白胨1%NaCL0.5%pH7.47.6.三、材料與儀器一 試劑 牛肉膏，蛋白胨，Nacl1mol/L;NaoH1 mol/L HCL二 其他試管，三角燒杯，燒杯，量筒，漏斗，乳膠管，彈簧夾，紗布，棉花， 牛皮紙，線繩，pH 試紙，電爐，臺(tái)秤。四、操作步驟(一稱量 依據(jù)用量按比例依次稱取各種成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小燒杯或外表皿中稱量，用熱水熔化后倒入燒杯，蛋白胨易吸濕，稱量時(shí)要快速。(二)溶解在燒杯中參加少于所需要的水量，加熱，逐一參加各成分，使其溶解， 瓊脂在溶液煮沸后參加，溶化過程需要不斷攪拌。加熱時(shí)應(yīng)留意火力，勿使培育基燒焦或溢出。溶好后，缺乏所需水分。(

18、三)調(diào) PH 用1mol/LNaoH 把pH 調(diào)至所需范圍。(四)過濾趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利于某些試驗(yàn)結(jié)果的觀看，如無特別要求時(shí)可省去此步驟。(五)分裝按試驗(yàn)要求，可將配置的培育基分裝入試管內(nèi)或三角瓶?jī)?nèi)，分裝裝置照實(shí) 驗(yàn)圖-8 所示：分裝時(shí)留意，勿使培育基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。液體分裝分裝高度以試管高度的1/4 左右為宜分裝三角瓶的量則依據(jù)需要而定，一般以不超過三角瓶容積的1/2 為宜。固體分裝分裝試管，其裝量不超過量筒的 1/5，滅菌后制成斜面，斜面長(zhǎng)度不超過管長(zhǎng)的1/2。分裝三角瓶，以不超過容積的1/2 為宜。半固體分裝 裝置以試管高度的 1/3 為宜，滅菌后垂直待

19、凝六加棉塞分裝完畢后，在試管或三角瓶口塞上棉塞或泡沫塑料塞及試管帽等以阻擋外界微生物進(jìn)入培育基而造成污染，并保證有良好的通氣性能。七包扎 棉塞頭上包一層牛皮紙，扎緊，即可進(jìn)展滅菌。八保存滅菌后的培育基放入37培育箱中培育24h，以檢驗(yàn)滅菌的效果無污染方可使用。五、試驗(yàn)報(bào)告一結(jié)果說明你配置培育基過程中的狀況。思考題培育基配置時(shí)應(yīng)留意什么問題？為什么？分裝培育基時(shí)為什么要使用彈簧夾？培育基配好后，為什么要馬上滅菌？試驗(yàn)十三干熱滅菌及高壓蒸汽滅菌一、 目的與要求二、 原理干熱滅菌時(shí)利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白凝固變形而到達(dá)滅菌的目的 蛋白質(zhì)凝固越塊，反之含水量越小，則凝固越慢。因此，與濕熱滅菌相比，

20、干熱滅菌所需溫度高，時(shí)間長(zhǎng)高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放入一 而到達(dá)滅菌的目的。0.1MPa(15Ib/In1.05kg/cm)121.5。1530min 可到達(dá)徹底滅菌，滅菌的溫度及維持的時(shí)間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體狀況而有所轉(zhuǎn)變。三、 材料與儀器吸管，培育皿，試管，電熱枯燥箱，手提式高壓滅菌蒸汽滅菌鍋，牛肉膏蛋白胨培育基、蒸餾水。四、 操作步驟一 干熱滅菌法，適用于空的、枯燥的玻璃器皿的滅菌。培育基不適用。將包好的待滅菌物品培育皿、試管、吸管等放入電熱枯燥箱留意留肯定間隙，管好箱門。100時(shí)關(guān)閉排氣孔。當(dāng)溫度升到 160170時(shí)，借恒溫調(diào)整器的自動(dòng)把握，保持此溫度2h。切斷電源，冷卻至

21、 70未將至70以前，切勿翻開箱門，否則溫度驟降導(dǎo)致玻璃器皿炸裂、二為宜。放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌物品內(nèi)裝培育基或小的三角瓶太擠，以免阻礙蒸汽流通過影響滅菌效果，三角瓶口部要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)，再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊全都，勿使漏氣。 待冷空氣排盡后，關(guān)上排氣閥讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而漸漸上升， 當(dāng)鍋內(nèi)到達(dá)所需壓力時(shí)，把握熱源，維持壓力至所需時(shí)間。 取出滅菌物品。留意，當(dāng)壓力不為零時(shí)，不能開蓋取物，否則由于壓力 突然下降，容器內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染 而發(fā)生污染，甚至

22、灼傷操作者。高壓滅菌鍋上的安全閥，是保障安全使用的重要機(jī)構(gòu)，不得任憑調(diào)整。五、 試驗(yàn)報(bào)告一 結(jié)果 檢查滅菌是否徹底。二干熱滅菌操作過程中應(yīng)留意哪些問題，為什么？為什么干熱滅菌所需溫度要比濕熱滅菌高?高壓蒸汽滅菌時(shí)，為什么要排盡鍋內(nèi)的冷空氣？試驗(yàn)十七微生物的平板菌落基數(shù)法一，目的與要求把握用平板菌落計(jì)數(shù)法來測(cè)定肯定數(shù)量樣品中微生物細(xì)胞數(shù)目。二，原理平板菌落計(jì)數(shù)法是通過將樣品制成一系列不同的稀釋液落數(shù)目，一般認(rèn)為每一個(gè)菌落是由一個(gè)細(xì)胞增殖后形成，所以可計(jì)算出樣品的含菌量。三， 材料與儀器一 樣品，無菌水。二 培育基 一般養(yǎng)分瓊脂培育基。三 培育皿，恒溫培育箱等。四，試驗(yàn)步驟一 樣品處理1，在無菌的

23、條件下，準(zhǔn)確稱取10g 固體樣品或量取10mL液體樣品。2 10g 固體樣品快速倒入已滅菌的裝有玻璃珠和90mL 無菌水的三角瓶中，充分振蕩1530min,10 倍的菌懸液，10ml 10 倍。31 1mL 10 9ml 無菌水的試管中，搖勻后得稀釋 100 10、1010、10 倍，稀釋程度以樣品中可能含有的活菌數(shù)多少而定。制平板混合平板培育計(jì)數(shù)法上述樣品稀釋好后，用吸管取適當(dāng)稀釋倍數(shù)的樣品稀釋液1mL,15mL 50置，在被測(cè)微生物最適溫度下培育每一個(gè)稀釋樣品各做三個(gè)培育皿，當(dāng)消滅菌落后，用計(jì)數(shù)器進(jìn)展計(jì)數(shù)。涂抹平板培育計(jì)數(shù)法 先將溶化并冷卻至50左右的15ML 瓊脂培育基注入已滅菌的0.2

24、mL 進(jìn)展計(jì)數(shù)。五、試驗(yàn)報(bào)告一結(jié)果2.計(jì)算混合平板培育計(jì)算公式：每克樣品菌數(shù)=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)X 稀釋倍數(shù)涂抹平板培育計(jì)算公式：每克樣品菌數(shù)=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)X X5思考題平板技術(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？試驗(yàn)二 一般光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和使用一、目的與要求一 學(xué)習(xí)一般光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、局部功能及使用方法。二 學(xué)習(xí)并把握油鏡的原理的使用方法。二、原理一般光學(xué)顯微鏡由機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)2 大局部構(gòu)成。在光學(xué)系統(tǒng)中物鏡的性能最為關(guān)鍵， 高區(qū)分率。三、材料與儀器一菌種金黃色葡萄球菌及枯草桿菌染色玻片標(biāo)本，啤酒酵母水浸片。二其他香柏油、二甲苯、顯微鏡、擦鏡紙。四、操作步驟一34cm，鏡

25、檢時(shí)姿勢(shì)要端正。二光鏡采集自然光或燈光作為照明光源時(shí)或平面反光鏡并調(diào)整其角度，使視野內(nèi)的光線均勻，亮度適宜。三低倍鏡觀看將標(biāo)本玻片置于載物臺(tái)上用 標(biāo)本夾夾住移動(dòng)推動(dòng)器使觀看對(duì)象處 在物鏡的正下方，下降10物鏡，使其接近標(biāo)本，用粗調(diào)整器粗調(diào)螺旋漸漸升起鏡筒， 消滅圖像后再用細(xì)調(diào)整細(xì)調(diào)螺旋調(diào)整圖像至清楚通過標(biāo)本夾推動(dòng)器漸漸移動(dòng)玻片， 認(rèn)真觀看標(biāo)本各部位，找到適宜目的物，認(rèn)真觀看。四高倍鏡觀看 在低倍鏡下找到適宜的觀看目標(biāo)并將其移至視野中心后，轉(zhuǎn)動(dòng)物鏡轉(zhuǎn)清楚，利用推動(dòng)器移動(dòng)標(biāo)本認(rèn)真觀看并記錄。五2cm12 足光圈，用粗調(diào)整器將鏡筒緩緩上升，直至視野中消滅物象并用細(xì)調(diào)整器使其清楚為止。六顯微鏡用后處理

26、上升鏡筒，取下載玻片。用擦鏡紙擦去鏡頭上的香柏油，然后擦鏡紙蘸少許二甲苯擦去鏡頭上的殘留的油跡，然后再用干凈的擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。用擦鏡紙清潔其他物鏡和目鏡，用綢布清潔顯微鏡的金屬部件。將各局部復(fù)原，反光鏡垂于鏡座，將物鏡轉(zhuǎn)成“八字形“再向下旋，同時(shí)把聚光鏡降下， 以免物鏡與聚光鏡發(fā)生碰撞危急。五、試驗(yàn)報(bào)告一結(jié)果分別繪出在不同物鏡下觀看到的不同菌種的形態(tài)，同時(shí)注明放大倍數(shù)。二思考題油鏡與一般物鏡在使用方法上有何不同？應(yīng)特別留意什么？顯微鏡中調(diào)整光線強(qiáng)弱的裝置有哪些？試驗(yàn)五 酵母菌形態(tài)觀看一、目的與要求觀看酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式。二、原理染成藍(lán)色的為死細(xì)胞，無色的為活細(xì)胞、三、材料與儀器

27、一 啤酒酵母，假絲酵母，漢遜酵母。二 顯微鏡，載玻片，蓋玻片，接種針，酒精燈。三 呂氏美藍(lán)染液。四、操作步驟一 在干凈載玻片中心加一滴呂氏美藍(lán)染色液于美藍(lán)液中，混合均勻。二取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后漸漸將蓋玻片放下以免產(chǎn)生氣泡使其蓋在菌液上，將多余菌液用吸水紙吸干。三依據(jù)顏色來區(qū)分死活細(xì)胞。四 染色約0.5h 后再進(jìn)展觀看，留意四細(xì)胞數(shù)量是否增加。五、試驗(yàn)報(bào)告(一) 結(jié)果 繪圖說明你所觀看到的酵母形態(tài)特征。(二) 思考題在顯微鏡下，酵母菌有哪些突出的特征區(qū)分于一般細(xì)菌？酵母水浸片制作室應(yīng)留意什么？試驗(yàn)十三培育基的制備一、 目的與要求(一) 學(xué)習(xí)制備培育基的根本技術(shù)。 (二) 制備牛

28、肉膏蛋白瓊脂培育基。二、 原理牛肉膏蛋白培育基時(shí)一種應(yīng)用最廣泛和最一般的細(xì)菌培育基長(zhǎng)生殖所需要的最根本的養(yǎng)分物質(zhì)，可供生殖之用。制作固體培育基時(shí)須加2%瓊脂，培育細(xì)菌時(shí)，應(yīng)用烯酸或稀堿將PH 調(diào)至中性或微堿性。牛肉膏蛋白培育基的配方：牛肉膏0.%5蛋白胨1%NaCL0.5%pH7.47.6.三、材料與儀器一試劑牛肉膏，蛋白胨，Nacl1mol/L;NaoH1 mol/L HCL二其他試管，三角燒杯，燒杯，量筒，漏斗，乳膠管，彈簧夾，紗布，棉花，牛皮紙，線繩，pH 試紙，電爐，臺(tái)秤。四、操作步驟(一) 中稱量，用熱水熔化后倒入燒杯，蛋白胨易吸濕，稱量時(shí)要快速。(二) 溶解在燒杯中參加少于所需要的

29、水量，加熱，逐一參加各成分，使其溶解，瓊脂 在溶液煮沸后參加，溶化過程需要不斷攪拌。加熱時(shí)應(yīng)留意火力，勿使培育基燒焦或溢出。溶好后，缺乏所需水分。(三) 調(diào) PH 用1mol/LNaoH 把pH 調(diào)至所需范圍。(四) 過濾趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利于某些試驗(yàn)結(jié)果的觀看，如無特別要求時(shí)可省去此步驟。(五) 分裝按試驗(yàn)要求，可將配置的培育基分裝入試管內(nèi)或三角瓶?jī)?nèi)，分裝裝置照試驗(yàn)圖-8 所示：分裝時(shí)留意，勿使培育基沾染在容器口上，以免沾污棉塞引起污染。1液體分裝分裝高度以試管高度的1/4 左右為宜，分裝三角瓶的量則依據(jù)需要而定，一般以不超過三角瓶容積的1/2 為宜。固體分裝分裝試管，其裝量不超過

30、量筒的 1/5，滅菌后制成斜面，斜面長(zhǎng)度不超過管長(zhǎng)的1/2。分裝三角瓶，以不超過容積的1/2 為宜。半固體分裝 裝置以試管高度的 1/3 為宜，滅菌后垂直待凝六加棉塞分裝完畢后，在試管或三角瓶口塞上棉或泡沫塑料塞及試管帽等，阻擋外界微生物進(jìn)入培育基而造成污染，并保證有良好的通氣性能。七包扎 棉塞頭上包一層牛皮紙，扎緊，即可進(jìn)展滅菌。八保存滅菌后的培育基放入37培育箱中培育24h，以檢驗(yàn)滅菌的效果無污染方可使用。五、試驗(yàn)報(bào)告一結(jié)果說明你配置培育基過程中的狀況。思考題培育基配置時(shí)應(yīng)留意什么問題？為什么？分裝培育基時(shí)為什么要使用彈簧夾？培育基配好后，為什么要馬上滅菌？試驗(yàn)十三干熱滅菌及高壓蒸汽滅菌一

31、、目的與要求二、原理干熱滅菌時(shí)利用高溫使微生物細(xì)胞內(nèi)的蛋白凝固變形而到達(dá)滅菌的目的 ，時(shí)間長(zhǎng)12h.高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放入一個(gè)密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱， 閥，連續(xù)溫度，導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變形而到達(dá)滅菌的目的。0.1MPa(15Ib/In1.05kg/cm)121.5。1530min 可到達(dá)徹底滅菌，滅菌的溫度及維持的時(shí)間隨滅菌物品的性質(zhì)和容量等具體狀況而有所轉(zhuǎn)變。三、材料與儀器吸管，培育皿，試管，電熱枯燥箱，手提式高壓滅菌蒸汽滅菌鍋，牛肉膏蛋白胨培育基、蒸餾水。四、操作步驟一 干熱滅菌法，適用于空的、枯燥的玻璃器皿的滅菌。培育基不適用。將包好的待滅菌物品培育皿、試管、吸管等放入電熱枯燥箱留意留肯定間隙管好箱門。接通電源，翻開排氣孔，使箱內(nèi)濕空氣能逸出，旋動(dòng)恒溫調(diào)整器，保持加熱升溫狀態(tài)， 100時(shí)關(guān)閉排氣孔。當(dāng)溫度升到 160170時(shí)，借恒溫調(diào)整器的自動(dòng)把握，保持此溫度2h。切斷電源，冷卻至 70時(shí)，翻開箱門，取出滅菌物品70以前，切勿翻開箱門，否則溫度驟降導(dǎo)致玻璃器皿炸裂、二 高壓蒸汽滅菌首