環(huán)境微生物實(shí)驗(yàn)自主

1、 自主實(shí)驗(yàn)：不同洗手液殺菌效果的比較報告人：程戰(zhàn)文學(xué)號：33120122201392實(shí)驗(yàn)人：呂雷、徐啟明、李越、姜博文、閆燁時間：12月17日一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解和鞏固牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備方法及倒平板的方法；2.通過不同市面常見的幾種洗手液的殺菌效果的比較，了解生活中常見洗手液殺菌能力，為以后的購買提供科學(xué)的依據(jù)。3.了解徒步平板法及涂布棒的用途。二.實(shí)驗(yàn)原理洗手液主要的功能是起到清潔護(hù)膚的作用，有些特定的成分可以起到消毒、殺菌的作用，比如大腸桿菌等，不過假冒產(chǎn)品洗了反而對手部皮膚損傷較大，因此對于日化用品類商品必須認(rèn)準(zhǔn)品牌，關(guān)注質(zhì)量，抵制假冒。目前市場上的洗手產(chǎn)品越來越多，并且大部分產(chǎn)品

2、都宣稱其具有除菌功能，但現(xiàn)有的消毒技術(shù)規(guī)范中除菌方法尚未建立，故無法統(tǒng)一對現(xiàn)有的除菌產(chǎn)品的除菌效果進(jìn)行有效的評價。而通過本次試驗(yàn)，比較市場上一些常見的具有殺菌、抑菌作用的洗手液的殺菌效果，看看其是否真正具有殺菌功能，也可幫助消費(fèi)者做一個初步的判斷。常見洗手液通常分為三類：一類是普通洗手液，一類屬消毒產(chǎn)品，另外特殊一類屬于重油污洗手液。前者起到清潔去污的作用，后者才含有抗菌、抑菌或殺菌的有效成分。重油污洗手液則多用于工業(yè)類油污（例如機(jī)油、汽油、黃油、柴油等）和頑固污漬的清洗。不同洗手液在外包裝上有分別，普通洗手液一般為“準(zhǔn)字號”，消毒洗手液則多為“消字號”。洗手液一般無磷、鋁、堿、烷基苯磺酸鈉等

3、成分，采用溫和去污的原理，容易被皮膚接受。一般洗手液中含有少量酒精，這是洗手液殺菌的最常見原理?，F(xiàn)在最常用的對氯間二甲苯酚、o-苯基苯酚、月桂純醚硫酸鈉、卡松檸檬酸的混合殺菌，其含量應(yīng)該達(dá)到0.1%0.4%之間，而如果是對氨基苯甲酸及異丙醇等成分，則要求更高，必須達(dá)到60%95%才具殺菌消毒作用。因此，建議消費(fèi)者在購買洗手液時，要先看其有效成分是什么，是否達(dá)到了以上的數(shù)量值。三.實(shí)驗(yàn)器材菌種：大腸桿菌、金黃色葡萄糖球菌培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（54個）器材：培養(yǎng)皿54；錐形瓶6（配培養(yǎng)基用）；500 L移液槍3（槍頭需要滅菌）；9 mL無菌水6；試管12（無菌水，用于配置3個品牌4個梯度的洗

4、手液）250 mL錐形瓶1（含大腸桿菌的生理鹽水和金黃色葡萄球菌的生理鹽水）；溶液：NaCl（配制生理鹽水用）；舒膚佳洗手液：健康抑菌洗手液，主要成分為0.1%0.3%對氯間二甲苯，抑制化膿性球菌，腸道致病菌，致病性真菌。開米洗手液：無磷環(huán)保抑菌洗手液，主要成分為0.180.3%三氯羥基二苯醚，對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌有較強(qiáng)抑菌作用。藍(lán)月亮：主要成分為含量0.16%-0.20% O-苯基苯酚四.實(shí)驗(yàn)過程（一）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制備1.稱量 按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏6.5g、蛋白胨15g、NaCl 7.5g放人燒杯中，牛肉膏直接放在稱量紙上，稱量后直接放人水中，稍微加熱，牛肉膏便會

5、與稱量紙分離，然后立即取出紙片。注意：蛋白胨很易吸濕，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后，洗凈，擦干，再稱取另一藥品。瓶蓋也不要蓋錯。2.溶化 在上述燒杯中先加人少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后在電磁爐上加熱使其溶解后，補(bǔ)充水到所需的總體積，注意加熱過程要不斷攪拌混勻。3.調(diào)pH 在未調(diào)pH前，先用楂密pH試紙測量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加 人1 mol/L NaOH邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙測其pH，直至pH達(dá)7.6。反之，用l mol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié).4.分裝分裝高度以試管髙度的1/4左右為宜，不超過三角

6、瓶容積的一半。 5.加塞 培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)人培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能。6.包扎 加塞后，將全部錐形瓶用皮筋捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期7.滅菌 將上述培養(yǎng)基以0.103 MPa，121，60 min高壓蒸氣滅菌。（二）殺菌效果比較1.配制0.9% 生理鹽水，并將生理鹽水、培養(yǎng)皿、試管（無菌水）、移液槍頭等進(jìn)行滅菌。2.配置4個濃度梯度的洗手液：10-1、10-2、10-3、10-4，和 1500 mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基一起高壓蒸汽滅菌。3.培養(yǎng)基滅菌完成后，將其溶化并冷卻至45左右時，

7、將其傾注于添加過菌液的培養(yǎng)皿中，再立即用移液槍（槍頭已滅菌）分別移取500 L的原濃度、稀釋10倍的和稀釋100倍及1000倍的洗手液于培養(yǎng)皿中，移取500 L的無菌水到空白中，旋轉(zhuǎn)搖動，充分混勻。4.用涂布平板法接種大腸桿菌于于滅過菌的培養(yǎng)皿中，切記每次接種完要用酒精浸泡并灼燒滅菌。5.待培養(yǎng)基凝固后，倒置于恒溫37培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2 d。用類似水中細(xì)菌總數(shù)測定的平板菌落計數(shù)方法對空白和各濃度洗手液的培養(yǎng)基進(jìn)行計數(shù)。6.用同樣的方法做金黃色葡萄球菌的殺菌效果對比實(shí)驗(yàn)。（三）個人負(fù)責(zé)部分簡述在本實(shí)驗(yàn)中，我和我的搭檔負(fù)責(zé)前期洗手液的獲取，培養(yǎng)皿、試管、錐形瓶的清洗和滅菌工作，平板的傾倒以及開米試劑殺

8、菌效果部分實(shí)驗(yàn)。在該部分中，第一次使用了涂布平板法進(jìn)行接種，第一次操作涂布棒涂布棒的殺菌滅菌操作，自我覺得還不錯，使個人的實(shí)驗(yàn)技能操作得到了訓(xùn)練，通過平板的傾倒加強(qiáng)了倒平板的操作。五.實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄及分析 表1 菌落計數(shù)藍(lán)月亮舒膚佳開米平行1平行2平行1平行2平行1平行210%大腸桿菌17762124249401524金黃色葡萄球菌10446004175202632071%大腸桿菌/1082073282/金黃色葡萄球菌41105790/387060014400.10%大腸桿菌/金黃色葡萄球菌/0.01%大腸桿菌/金黃色葡萄球菌/注：“ / ”表示：多到不可計數(shù)。1.通過表格的結(jié)果分析可看出，隨著

9、洗手液濃度的增加，培養(yǎng)皿中微生物濃度在不斷降低，即殺菌效果不斷下降。基本上當(dāng)濃度為1%的時候，培養(yǎng)皿中微生物開始連成片，導(dǎo)致微生物不可數(shù)，即可認(rèn)為此時對微生物無抑制作用，2.縱向比較可知，三種洗手液中，在濃度較高時，舒膚佳的抑菌效果最好，開米其次，藍(lán)月亮最差；當(dāng)濃度較低時，基本都無抑菌作用。3.對于藍(lán)月亮洗手液及開米洗手液而言，其對金黃色葡萄球菌比對大腸桿菌的滅菌效果更強(qiáng)，當(dāng)濃度為1%時藍(lán)月亮洗手液對大腸桿菌基本無抑菌效果；而舒膚佳對大腸桿菌的抑菌效果對金黃色葡萄球菌強(qiáng)。建議：由表格我們可以看出，洗手液的抑菌效果在濃度較高的時候效果較為明顯，當(dāng)濃度較低的時候可認(rèn)為基本無殺菌效果。建議再洗手時，

10、可以現(xiàn)用水將手打濕，然后將洗手液涂抹在手上混合搓勻幾十秒，然后在放在水龍頭地沖洗。另外三種洗手液中舒膚佳的抑菌效果最好，推測可能與其主要抑菌物質(zhì)對氯間二甲苯有關(guān)，建議以后在挑選洗手液的時候可以盡量挑選含有對氯間二甲苯的洗手液。六.個人總結(jié)和反思1.在本實(shí)驗(yàn)中我們出現(xiàn)一點(diǎn)小小的失誤，在配置培養(yǎng)基的過程中，可以發(fā)現(xiàn)上述過程我們沒有加入瓊脂，導(dǎo)致培養(yǎng)基無法凝固。對于這個失誤，我們及時進(jìn)行了彌補(bǔ)，首先的話我們及時在未凝固的培養(yǎng)基中加入瓊脂，加熱后冷卻促使溶解凝固；另一方面我們組又重新進(jìn)行了培養(yǎng)基的配置，重新進(jìn)行了滅菌的處理，耗費(fèi)了大量的時間。最后，我們還是采用了重新配置的培養(yǎng)基進(jìn)行接種，完成了實(shí)驗(yàn)。總的來說實(shí)驗(yàn)效果還是不錯的，這個失誤過程讓我體會到實(shí)驗(yàn)過程中的每一步都要自習(xí)謹(jǐn)慎的完成，否則一個小小的失誤可能都會導(dǎo)致我們前期的準(zhǔn)備或者整個實(shí)驗(yàn)造成不可挽回的影響。2.在實(shí)驗(yàn)中我們使用到了大腸桿菌還有金黃色葡萄球菌菌種，但是遺憾的是這兩個菌種的濃度是未知的，所以我們猜測，實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象中對于濃度過低的洗手液，殺菌效果不明顯，菌種都連成了片，可能和菌液濃度過高有關(guān)。為了更好的模擬現(xiàn)實(shí)中的殺菌效果，應(yīng)該先查閱生活中微生物的數(shù)量和濃度，然后在稀釋涂板。3.實(shí)驗(yàn)中所獲得的開米的洗手液來自環(huán)生樓環(huán)境監(jiān)測實(shí)驗(yàn)室，但是根據(jù)數(shù)據(jù)可以看出其殺菌效果并不是很明顯。下課后詢問老師得知，這種洗手液在加入之前就已經(jīng)被加水稀