肝病病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會課件

1、肝病病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會肝病病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會肝病病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會肝穿刺標本檢查和處理原則. 肉眼觀察 肝穿刺標本呈完整園柱狀，長度 典型的慢性肝炎肝纖維化標本呈竹節(jié)狀外觀肝硬化的穿刺標本，呈不規(guī)則碎塊2書籍能培養(yǎng)我們的道德情操，給我們巨大的精神力量，鼓舞我們前進肝病病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會肝病病理形態(tài)特點及免疫組化肝穿刺標本檢查和處理原則. 肉眼觀察 肝穿刺標本呈完整園柱狀，長度 典型的慢性肝炎肝纖維化標本呈竹節(jié)狀外觀肝硬化的穿刺標本，呈不規(guī)則碎塊2肝穿刺標本檢查和處理原則. 肉眼觀察 2.石蠟切片 每張玻片上應放置超過個連續(xù)組織切片，有助于肝纖維化

2、的病理診斷。3.石蠟切片 3. 染色 除常規(guī)染色供病理診斷用之外，根據(jù)條件和需要作以下特殊染色：網(wǎng)狀纖維染色，三色染色，膠原纖維染色( 或免疫組化 ) 4. 染色 除常規(guī)染色供病理診斷用之外，根據(jù)條件4 5 5各種病因引起肝纖維的病理學特點與分期. 慢性肝炎肝纖維化 ( 方案）6各種病因引起肝纖維的病理學特點與分期6活動性纖維間隔靜止性纖維間隔7活動性纖維間隔靜止性纖維間隔7脂肪性肝病肝纖維化 穿刺肝組織呈淡黃色，標本懸浮于固定液小葉中央?yún)^(qū)纖維化竇周纖維化8脂肪性肝病肝纖維化 小葉中央?yún)^(qū)纖維化. 肝糖原累積病肝纖維 9. 肝糖原累積病肝纖維 9. 病 紅氨酸( )染色,銅被染成深綠色10. 病

3、 紅氨酸( )染色,銅被染成深綠色10. 血色病 穿刺肝組織因含有大量含鐵血黃素沉著呈火焰紅色肝細胞普魯氏藍染色陽性11. 血色病 肝細胞普魯氏藍染色陽性11. 自身免疫性肝炎肝纖維化（） 門管區(qū)肝細胞呈花環(huán)狀排列 ，表現(xiàn)為數(shù)個水樣變性的肝細胞被炎癥細胞和塌陷的網(wǎng)狀支架包繞成花環(huán)狀結(jié)構。12. 自身免疫性肝炎肝纖維化（）12. 原發(fā)性膽汁性肝硬化（） 期（間隔期）出現(xiàn)自身抗體()， ， 纖維間隔形成，肝細胞羽毛狀變性期（肝硬化） 靜止 纖維間隔內(nèi)無炎癥或輕度炎癥 活動 . 13. 原發(fā)性膽汁性肝硬化（） 13. 血吸蟲性肝纖維化 14. 血吸蟲性肝纖維化 14肝癌( ) 15肝癌( )15肝癌

4、病理診斷常用免疫組化和特染 線粒體相關抗原，與無關對胎兒和成人肝細胞高度特異 (:陽性率）16肝癌病理診斷常用免疫組化和特染 16陽性率：1717: 型染色長條分枝，管壁纖細，管腔狹窄，分布均勻彌漫.而非癌肝組織內(nèi)極少見.18:18 : , 上皮性腫瘤標志物19 :19 : 膽管型: 肝細胞 膽管上皮，： 最好的標志物20 :20： :毛細膽管，轉(zhuǎn)移性肝癌： : 毛細膽管特異標志物之一21：21 : 胃腸道腺癌的主要標志物轉(zhuǎn)移性腺癌： 22 :22: 抗人上皮相關抗原轉(zhuǎn)移性腺癌： : : 胃癌肝轉(zhuǎn)移23: 抗人上皮相關抗原23: : 胞質(zhì)型，胞核型陽性胞質(zhì)型，核周型陽性24:胞質(zhì)型，胞核型陽性

5、胞質(zhì)型，核周型陽性24黏液染色： 酸性黏多糖：蘭色（膽管腺瘤腔內(nèi)黏液）中性黏多糖,糖原：紅色（假腺管型)25黏液染色：25免疫組織化學染色的幾點體會一、組織和細胞標本制備目的：()最大限度地保存組織結(jié)構。()最大限度地保存抗原性。注意事項：在選擇組織處理方法前，先根據(jù)實驗目的，參考抗體說明，確定組織處理方式(冰凍?石蠟?)。26免疫組織化學染色的幾點體會一、組織和細胞標本制備26.取材（）原則：盡可能新鮮，動物標本可選 用動脈灌注固定。（）取材部位：盡量包括病灶和正常組 織交界處，避免選擇壞死組織。（）避免擠壓：受擠壓組織不但影響 切片的觀察，還造成非特異性 免疫組化組織著色。27.取材（）原

6、則：盡可能新鮮，動物標本可選27.固定根據(jù)不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新鮮越好。組織塊厚薄大小要合適。容器要大,固定液要寬余.固定時間既要考慮充分固定,又不能太長(依組織塊厚薄大小從至天,太長可溶性抗原會滲漏,陽性會減弱甚至轉(zhuǎn)陰.選擇最合適的固定劑,如用福爾馬林,必須用緩沖福爾馬林28.固定根據(jù)不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新鮮.制備蠟塊沖水、脫水、透明、包埋。盡可能采用低溫石蠟包埋,如無低溫石蠟,可將組織塊盡可能修薄,以縮短脫水、透明、包埋時間,盡可能保存組織內(nèi)抗原穩(wěn)定。29.制備蠟塊沖水、脫水、透明、包埋。盡可能采用低溫石蠟包埋,如.制備冰凍切片冷凍包埋能

7、較好保存抗原,新鮮與已固定材料均適合于冷凍包埋、切片。 防止冰結(jié)晶!預處理:目的是減少組織中的水分以減少冰結(jié)晶的產(chǎn)生,方法是將已固定、沖洗的組織塊放入蔗糖緩沖液內(nèi)冰箱過夜,再將組織塊埋于包埋劑速凍:目的是使溫度很快下降迅速通過冰點,防止冰結(jié)晶產(chǎn)生。30.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮與已固定材料均適合速凍方法液氮法:將包埋的組織塊投入液氮數(shù)秒,等組織塊凍結(jié)后,立即移入低溫冰箱(裝入封口塑料袋內(nèi)密封)或放入恒冷切片機恒冷箱內(nèi)以備切片;干冰丙酮法:將丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內(nèi),逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達;將裝有異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰丙酮飽和液中;然后將包埋的組織塊

8、投入異戊烷內(nèi)速凍半分至一分鐘。31速凍方法液氮法:將包埋的組織塊投入液氮數(shù)秒,等組織塊凍結(jié)后,免疫組化染色后的襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細胞核。但如果陽性信號在細胞核,切勿襯染細胞核!細胞質(zhì)襯染亮綠,但退色較快,可改用堅固綠( )染,則保存時間較長32免疫組化染色后的襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細胞核。但如果陽性封固和保存絕大多數(shù)免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用以外的底物應注意有色沉淀物如為脂溶性，應改用水溶性封固物如明膠、甘油緩沖液等。酶免疫染色切片可保存數(shù)周甚至數(shù)月。免疫熒光染色后應盡快觀察、拍照。33封固和保存絕大多數(shù)免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用以外的底一.常用免疫組織化學方法免疫

9、熒光: 用于培養(yǎng)細胞效果較好, 石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強,用時要注意 (異硫氰酸熒光素) 用 光激發(fā) 濾片觀察, 呈翠綠色 (四乙基羅達明) 用光激發(fā), 濾片觀察,呈橘紅色 (四甲基異硫氰酸羅達明) 用 光激發(fā)濾片觀察,呈紅色 用光激發(fā), 濾片觀察,呈紅色 直接免疫熒光法: 間接免疫熒光法 雙重熒光染色34一.常用免疫組織化學方法34.免疫組織化學常用方法: 或 (二步法)35.免疫組織化學常用方法:35世紀年（） ()3636世紀年代（） 許世民 （親和免疫組化） 37世紀年代（） 許世民 （親和免疫組化）37年代中期： () ( , )簡稱二步法 含 38年代中期： ()38如

10、何做好免疫組化染色?什么才是高質(zhì)量的免疫組化染色?陽性信號突出無背景染色切片平整無破裂碎,無污穢39如何做好免疫組化染色?什么才是高質(zhì)量的免疫組化染色?39做好免疫組化染色幾點體會.組織細胞處理: 固定劑 固定時間 速凍防冰結(jié)晶 白片質(zhì)量好:平整,無破裂碎,無污穢 防脫片 : 玻片絕對干凈 涂粘合劑: 白膠 多聚賴氨酸 鉻明礬明膠液 甲醛明膠液 貼片后冷風吹干或 烘干 40做好免疫組化染色幾點體會.組織細胞處理:40.抗體:特異性,高效價,親合力,適度稀釋度.石蠟切片 抗原修復 ()蛋白酶消化: 胰蛋白酶 胰糜蛋白酶 鏈霉蛋白酶 蛋白酶 胃蛋白酶 消化不足 修復失敗,假陰性或信號弱 消化過度 結(jié)構破環(huán),脫片 ()熱修復: 微波照射 高壓加熱 水浴加熱 ()微波蛋白酶消化 注意點: 固定時間長,消化時間或熱修復時間適當延長 酶生產(chǎn)廠家不一,或批號不一,消化時間可能也不一 熱修復的介質(zhì)要選合適,必須要加鈣螯合劑 預實驗摸最佳方案 41.抗體:特異性,高效價,親