憂慮康液對(duì)腎陰虛抑郁模型大鼠血漿促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)醇及下

1、憂慮康液對(duì)腎陰虛抑郁模型大鼠血漿促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)醇及下【摘要】目的討論憂慮康液對(duì)抑郁腎陰虛模型大鼠血漿促腎上腺皮質(zhì)激素(ATH)、皮質(zhì)醇(RT)含量及下丘腦細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響。方法采用慢性不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激并灌胃甲狀腺素加孤養(yǎng)法復(fù)制抑郁腎陰虛大鼠模型，以放射免疫方法測(cè)定血漿ATH、RT程度，HE染色光鏡下觀察各組大鼠下丘腦形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果與正常組比擬，抑郁腎陰虛模型大鼠血漿ATH、RT含量顯著上升(P0.01)，下丘腦形態(tài)學(xué)表現(xiàn)室旁核界限不清、神經(jīng)元胞體增大、局部出現(xiàn)空泡樣變性。與模型組比擬，憂慮康液各劑量組及氟西汀組下調(diào)血漿ATH、RT濃度具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01，P0.05);憂濾康液中

2、、高劑量組可恢復(fù)抑郁大鼠下丘腦神經(jīng)元數(shù)目，改善細(xì)胞形態(tài)，減少細(xì)胞空泡樣變化，增大核/質(zhì)比例。結(jié)論慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激并灌胃甲狀腺素加孤養(yǎng)法，可使大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌發(fā)生異常改變，引起抑郁狀態(tài);憂慮康液可能通過(guò)降低血漿ATH、RT濃度及保護(hù)下丘腦構(gòu)造而拮抗抑郁?！娟P(guān)鍵詞】慢性應(yīng)激;形態(tài)學(xué);憂慮康液;大鼠;實(shí)驗(yàn)研究【Keyrds】hrnistress;rphlgy;Yulkang;Rat;Experientalstudy1材料與方法1.2藥物憂慮康復(fù)方之飲片購(gòu)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥劑科。第一次8倍體積飲用水冷浸30in，再提取40in，紗布過(guò)濾,第二次4倍量水提取30in，過(guò)濾，合并2次濾液，

3、減壓濃縮成相應(yīng)濃度(浸膏)，4保存?zhèn)溆?。六味地黃丸(湖南省長(zhǎng)沙九芝堂股份消費(fèi)，產(chǎn)品批號(hào)：20220219;鹽酸氟西汀膠囊(優(yōu)克)(常州華生制藥，產(chǎn)品批號(hào)：80706001);甲狀腺素片(濟(jì)南維爾康生化制藥，產(chǎn)品批號(hào)：0505505)。1.3試劑與儀器促腎上腺皮質(zhì)激素(ATH)、皮質(zhì)醇(RT)放免分析試劑盒，北京市福瑞生物工程公司提供，批號(hào)：061120。放射免疫計(jì)數(shù)器(中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè));電子天平(湘儀天平儀器);低溫大容量高速離心機(jī)(中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)科技實(shí)業(yè));恒溫烘箱;光學(xué)顯微鏡等。敞箱(自制)：由不透明材料制成，底面為100100的正方形，被等分為25個(gè)等邊方格，高50。1.4實(shí)

4、驗(yàn)方法1.4.1動(dòng)物分組將SD大鼠適應(yīng)環(huán)境后,進(jìn)展敞箱試驗(yàn)和液體消耗試驗(yàn)。根據(jù)敞箱試驗(yàn)和液體消耗試驗(yàn)結(jié)果，將挑選出的56只大鼠，按體質(zhì)量隨機(jī)區(qū)組分為7組：正常對(duì)照(正常)組、模型對(duì)照(模型)組、鹽酸氟西汀(氟西汀)組、六味地黃丸(地黃丸)組、憂慮康低劑量(低劑量)組、憂慮康中劑量(中劑量)組、憂慮康高劑量(高劑量)組。每組8只。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中動(dòng)物自由攝食和飲水(禁食禁水應(yīng)激除外)，室溫(223)(熱、冷應(yīng)激除外)，自然晝夜節(jié)律光照，相對(duì)濕度60%70%，背景噪音(4010)db。1.4.2造模及給藥除正常組外,其余各組均連續(xù)承受各種不同的應(yīng)激及灌胃甲狀腺素并孤養(yǎng)，以制備腎陰虛型抑郁癥病證復(fù)合模

5、型1。采取單籠飼養(yǎng)，并按以下程序從實(shí)驗(yàn)第1天起給予應(yīng)激刺激，即晝夜顛倒，禁食禁水，潮濕墊料、鼠籠傾斜，40高溫環(huán)境，夾尾，4冰水游泳，生疏異常物品，電擊足底，共8種應(yīng)激因子，隨機(jī)安排每日1種,連續(xù)21d;并每日灌胃甲狀腺素2.5gkg-1d-1。造模同時(shí)氟西汀組給予鹽酸氟西汀3.6g/kg，地黃丸組給予六味地黃1.6g(生藥)/kg，憂慮康低、中、高劑量分別給予憂慮康液7.2、14.4及28.8g(生藥)/kg，各組治療藥物灌胃容量為10l/kg;正常組與模型組均灌胃等容量蒸餾水，給藥1次/d。1.4.3觀察模型動(dòng)物一般狀態(tài)及體重實(shí)驗(yàn)過(guò)程中觀察大鼠外表、性情、活動(dòng)情況、飲水量、大便情況，每周測(cè)

6、1次體重。1.4.4液體消耗試驗(yàn)、敞箱試驗(yàn)同期研究已有詳細(xì)操作方法1。1.4.5ATH、RT測(cè)定實(shí)驗(yàn)第22天，所有動(dòng)物斷頭采血，取血12l進(jìn)展檢測(cè)，測(cè)定方法均嚴(yán)格按照ATH、RT試劑盒說(shuō)明書(shū)。1.4.6腦組織形態(tài)學(xué)觀察大鼠處死后，取腦組織并切塊，固定48h，石蠟包埋，冠狀切片，各級(jí)濃度脫水，HE染色，光鏡下觀察腦組織形態(tài)學(xué)。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法運(yùn)用SPSS11.5軟件。所有數(shù)據(jù)均先經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)，方差齊用F檢驗(yàn)，方差不齊用秩和檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以xs表示。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1各組大鼠一般狀態(tài)比擬正常組在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中24h飲水量變化不大;與正常組比擬，實(shí)驗(yàn)第7天，各造模大鼠24h飲水量均

7、有下降趨勢(shì)，說(shuō)明大鼠出現(xiàn)抑郁而不愿多飲水。實(shí)驗(yàn)第14天，模型組飲水量陡增，說(shuō)明在抑郁根底上又出現(xiàn)了陰虛狀況;用藥各組飲水量有上升，但與模型組比擬，六味地黃丸組和憂慮康中、高劑量組差異具顯著性。直至實(shí)驗(yàn)第21天，模型組飲水量仍然持續(xù)升高不降;中藥各治療組飲水量根本恢復(fù)正常并保持平穩(wěn)。與正常組比擬，各造模大鼠出現(xiàn)活動(dòng)減少但捉拿時(shí)易激怒、毛無(wú)光澤、大便枯燥等表現(xiàn)，與前期實(shí)驗(yàn)中腎陰虛抑郁模型反映出的現(xiàn)象相一致。實(shí)驗(yàn)第7天，各造模大鼠體重增長(zhǎng)均較緩慢;實(shí)驗(yàn)第14天，與模型組比擬，各用藥大鼠攻擊性明顯減輕、糞便變軟，體重增長(zhǎng)較快;實(shí)驗(yàn)第21天，各用藥大鼠體重增長(zhǎng)均具有顯著性意義(P0.05)。2.2行為學(xué)

8、指標(biāo)的比擬在敞箱試驗(yàn)中，與正常組比擬，實(shí)驗(yàn)第7天，各造模組程度得分、垂直得分、清潔次數(shù)指標(biāo)值均下降，中央格停留時(shí)間延長(zhǎng);實(shí)驗(yàn)第21天，模型組各項(xiàng)指標(biāo)均顯著改變(P0.01)。與模型組比擬，實(shí)驗(yàn)第21天，氟西汀組各項(xiàng)指標(biāo)值差異顯著(P0.05)，憂慮康高劑量組程度得分、中劑量組清潔次數(shù)增加以及低、中、高劑量組中央格停留時(shí)間顯著減少(P0.01)。在糖試驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)第7天，各組糖水消耗以及糖水偏愛(ài)均低于正常組(P0.05，P0.01)。實(shí)驗(yàn)第21天，與模型組比擬，氟西汀組糖水消耗、糖水偏愛(ài)升高顯著(P0.01)，說(shuō)明氟西汀改善快感缺失效果較好;憂慮康3個(gè)劑量組效果與之接近，并隨給藥時(shí)間延長(zhǎng)而穩(wěn)定，見(jiàn)

9、表1。表1各組大鼠第7天、第21天敞箱、糖水試驗(yàn)結(jié)果比正常組比擬：1)P0.01，2)P0.05;與模型組比擬：3)P0.01，4)P0.05;下表同2.3憂慮康液對(duì)模型大鼠血漿ATH、RT濃度的影響與正常組比擬，模型組血漿ATH、RT含量增高顯著(P0.01);各用藥組均可顯著降低血漿RT、ATH含量(P0.01)，尤以氟西汀組和滋腎益腦方各劑量組明顯。見(jiàn)表2。2.4憂慮康液對(duì)模型大鼠下丘腦形態(tài)學(xué)的影響正常組細(xì)胞大小一致，形態(tài)規(guī)那么，界限清楚，胞漿較少，核/質(zhì)比例大，與正常組比擬，模型組下丘腦室旁核邊界不清，神經(jīng)元數(shù)目減少，細(xì)胞大小形態(tài)不一，局部胞體明顯增大，細(xì)胞呈圓、亮的特性，細(xì)胞核濃染，

10、胞漿增多，染色變淺，甚至有空泡樣變化。氟西汀組和憂慮康中、高劑量組均根本恢復(fù)抑郁大鼠下丘腦神經(jīng)元數(shù)目，改善細(xì)胞形態(tài)，減少細(xì)胞空泡樣變化，增大核/質(zhì)比例，低劑量組細(xì)胞數(shù)目較模型組的增加，細(xì)胞形態(tài)無(wú)明顯變化;六味地黃丸組與模型組相比變化不明顯，見(jiàn)圖1。表2各組大鼠血漿ATH、RT結(jié)果比擬3討論抑郁癥是一種常見(jiàn)的情感障礙性精神疾病，抑郁癥患者有很高的自殺或自殘傾向。在將來(lái)10年內(nèi)伴隨著抑郁的流行有增長(zhǎng)趨勢(shì)，其嚴(yán)重危害性迫切要求我們加緊對(duì)抑郁的認(rèn)識(shí)和治療。目前，神經(jīng)內(nèi)分泌研究成了除單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)外又一個(gè)研究的焦點(diǎn)。敞箱試驗(yàn)得分、糖水消耗量等是經(jīng)典的反響動(dòng)物抑郁行為學(xué)指標(biāo)，也是最常用的觀察方法。本研究結(jié)

11、果顯示，與正常組比擬，模型組大鼠出現(xiàn)飲水量持續(xù)升高不降、捉拿時(shí)易激怒、毛無(wú)光澤、大便枯燥、體重增長(zhǎng)緩慢等陰虛病癥，敞箱試驗(yàn)、液體消耗試驗(yàn)的各項(xiàng)指標(biāo)差異均具有顯著性，結(jié)合檢測(cè)其血漿ATH和RT濃度明顯升高及腦組織形態(tài)學(xué)改變等說(shuō)明模型復(fù)制成功。腎虛是一種綜合的功能態(tài)，是多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)的功能紊亂;腎虛證有其功能網(wǎng)絡(luò)和調(diào)控中心，與神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)關(guān)系親密;故對(duì)腎虛證的研究不能一味追求單一的特異性指標(biāo)8，應(yīng)當(dāng)要綜合起來(lái)分析。憂慮康液是筆者長(zhǎng)期用于治療抑郁癥的經(jīng)歷方，方中熟地黃、何首烏、石斛滋陰益精填髓，當(dāng)歸、丹參合用補(bǔ)血活血，郁金、丹參合用涼血安神?，F(xiàn)代藥理研究證明熟地、郁金、石斛、丹參，或進(jìn)步抗氧化酶活力以減少過(guò)氧化物，或降血糖、抗衰老、增強(qiáng)免疫力;熟地多糖能抑制HPA軸的功能亢進(jìn)，恢復(fù)HPA軸機(jī)能平衡，熟地多糖、何首烏水煎液可改善癡呆小鼠的學(xué)習(xí)記憶障礙;溫郁金提取液抑制血小板聚集，丹參活性成分?jǐn)U張血管、改善微循環(huán)而對(duì)多種物質(zhì)引起的肝腎功能損傷有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)從神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)互相交織作用的角度討論憂慮康液滋腎抗抑郁