組織病理切片

1、PAGE PAGE 4組織病理切片病理切片取一定大小的病變組織，用病理組織學(xué)方法制成病理切片通常將病變組織包埋在石蠟塊里，用切片機(jī)切成薄片，再用蘇木精伊紅(HE)染色，用顯微鏡進(jìn)一步檢查病變。病變的發(fā)生發(fā)展過程，最后作出病理診斷。制作時(shí)將部分有病變的組織或臟器經(jīng)過各種化學(xué)品和埋藏法的處理，使之固定硬化，在切片機(jī)上切成薄片，粘附在玻片上，染以各種顏色，供在顯微鏡下檢查，以觀察病理變化，作出病理診斷，為臨床診斷和治療提供幫助。1取材組織取材的方法是制作切片的一個(gè)重要程序，根據(jù)教學(xué)、科研及外檢的具體要求取自人體（外科手術(shù)切除標(biāo)本、活檢標(biāo)本、尸檢標(biāo)本）或動(dòng)物，并確定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖

2、學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)的基本理論知識，還要掌握實(shí)際操作技術(shù)，每個(gè)組織器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取組織作為制片材料，不然，無法達(dá)到教學(xué)、科研和臨床診斷的目的，具體要求如下：(1)材料新鮮：取材組織愈新鮮愈好，人體組織一般在離體后，動(dòng)物組織在處死后迅速固定，以保證原有的形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)。(2)組織塊的大?。核〗M織塊較理想的體積為2.0cm2.0cm0.3cm，以使固定液能迅速而均勻地滲入組織內(nèi)部，但根據(jù)制片材料和目的不同，組織塊的較理想體積也不同，如制作病理外檢、科研切片，其組織塊可以薄取0.10.2cm即可，這樣可以縮短固定脫水透明的時(shí)間，若制作教學(xué)切片厚取0.3 0.5cm，這樣可以同

3、一蠟塊制作出較多的教學(xué)切片。(3)勿擠壓組織塊: 切取組織塊用的刀剪要鋒利，切割時(shí)不可來回銼動(dòng)。夾取組織時(shí)切勿過緊，以免因擠壓而使組織、細(xì)胞變形。(4)規(guī)范取材部位: 要準(zhǔn)確地按解剖部位取材，病理標(biāo)本取材按照各病變部位、性質(zhì)的不同，根據(jù)要求規(guī)范化取材。(5)選好組織塊的切面:根據(jù)各器官的組織結(jié)構(gòu)，決定其切面的走向。縱切或橫切往往是顯示組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵，如長管狀器官以橫切為好。(6)保持材料的清潔:組織塊上如有血液、污物、粘液、食物、糞便等，可用水沖洗干凈后再放入固定液中。(7)保持組織的原有形態(tài):新鮮組織固定后，或多或少會產(chǎn)生收縮現(xiàn)象，有時(shí)甚至完全變形。為此可將組織展平，以盡可能維持原形。2

4、固定(1)小塊組織固定法：這是最常用的方法，從人體或動(dòng)物體取下的小塊組織，須立即置入液態(tài)固定劑中進(jìn)行固定，通常，標(biāo)本與固定液的比例為1:420，但組織塊不宜過大過厚，否則固定液不能迅速滲透。故取組織塊的大小一般為2.0cm2.0cm0.3cm。(2)注射、灌注固定法：某些組織塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部，或需要對整個(gè)臟器或整個(gè)動(dòng)物體進(jìn)行固定。這時(shí)宜采用注射固定或灌注固定法。將固定液注入血管，經(jīng)血管分支到達(dá)整個(gè)組織和全身，從而得到充分的固定。(3)蒸汽固定法：比較小而厚的標(biāo)本，可采用鋨酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，則應(yīng)在血片未干燥前采用鋨酸或甲醛蒸汽接觸固定。最常用的固定液有10%甲醛固

5、定液和95%乙醇固定液。3脫水透明標(biāo)本經(jīng)過固定和沖洗后，組織中含有較多的水分，必須將組織塊內(nèi)的水分置換出來，這一過程叫做脫水。無論是用石蠟切片，還是用火棉膠切片，都必須除去組織中所含水分，因含水組織與石蠟、火棉膠等包埋材料不相容，常用的脫水劑為一系列不同濃度的乙醇。脫水的步驟是：80%、90%、95%、100%各種濃度乙醇2小時(shí)，此過程可用脫水機(jī)自控完成。丙酮也是一種脫水能力很強(qiáng)的脫水劑，但因其脫水能力很強(qiáng)，對組織有劇烈收縮作用，在制作科研、教學(xué)切片時(shí)一般不用該試劑。因乙醇、丙酮等不溶于石蠟，還要經(jīng)過一個(gè)能溶于石蠟的溶劑替代過程稱為透明。常用的透明劑有二甲苯、三氯甲烷、水楊酸甲酯等。4浸蠟、包

6、埋(1)使石蠟浸入組織中，取代組織中含有的透明劑。(2)包埋：將浸蠟后的組織置于融化的固體石蠟中，石蠟?zāi)毯螅M織即被包在其中，稱蠟塊，此過程稱為包埋。5切片和貼片(1)修整蠟塊：可視其組織的大小，在組織邊緣約0.10.2cm處，切去余蠟部分，否則易造成組織皺縮不平。(2)準(zhǔn)備好切片用具：切片刀、毛筆、眼科鑷子（彎）、漂烘溫控儀(3)安裝蠟塊：將修好的蠟塊安裝在金屬或木制持蠟器上。(4)安裝切片刀：將切片刀安裝在切片機(jī)的刀臺上，把刀臺上的緊固螺絲旋緊，使切片時(shí)不產(chǎn)生振動(dòng)，能保持一定的切片厚度。(5)切片的厚度：切片機(jī)的厚度調(diào)節(jié)器上刻有050m或025m，可任意選擇其厚度，石蠟切片的厚度一般在4

7、6m。(6)切片(7)鋪片：用眼科鑷子鑷起蠟帶輕輕平鋪在4045(8)貼片、烘片：待切片在恒溫水面上充分展平后，將蠟片撈到載玻片的中段處傾去載玻片上的余水，置入60656染色和封片常用的染色方法是蘇木素-伊紅（Hematoxylin-Eosin）染色法，簡稱H.E染色法。這種方法對任何固定液固定的組織和應(yīng)用各種包埋法的切片均可使用。蘇木素是一種堿性染料,可使組織中的嗜堿性物質(zhì)染成藍(lán)色，如細(xì)胞核中的染色質(zhì)等；伊紅是一種酸性染料，可使組織中的嗜酸性物質(zhì)染成紅色，如多數(shù)細(xì)胞的胞質(zhì)、核仁等在H.E染色的切片中均呈紅色。H.E染色程序如下:脫蠟、脫苯、復(fù)水、染色、脫水、透明、封固常規(guī)蘇木素染色中的對比染

8、色是用伊紅,近年來在英、美國家的一些實(shí)驗(yàn)室則采用焰紅（phloxine）,此外也有用桔黃G（OrangeG）、比布里希猩紅(Biebrich scarlet)、波爾多紅(Bordeaux red)等作為對比染色。伊紅為染胞質(zhì)、膠原纖維、肌纖維、嗜酸性顆粒等常用的染料。7. 組織的脫水透明和浸蠟工作中注意事項(xiàng) = 1 * GB3 標(biāo)本未經(jīng)充分固定，不得進(jìn)入脫水處理的程序。 = 2 * GB3 在處理全過程中，每l標(biāo)本均應(yīng)附有編號。隨時(shí)注意防止標(biāo)本間相互混雜。細(xì)小標(biāo)本應(yīng)用拭鏡紙包裹進(jìn)行脫水，以免遺失。 = 3 * GB3 標(biāo)本多的單位，可根據(jù)標(biāo)本的性45的水面上，借水的張力和水的溫度，將略皺的蠟帶

9、自然展平。 = 4 * GB3 一般以乙醇為組織脫水劑，自低濃度向高濃度漸進(jìn)并多次更換，組織所含水分才能充分去除，透明、浸蠟才能順利進(jìn)行，對保證切片質(zhì)量甚為重要。 = 5 * GB3 組織塊在二甲苯中的時(shí)間不宜過長，使組織透明即可。若較長時(shí)間后透明度仍不好，應(yīng)檢查原因，如因脫水不充分，應(yīng)重行脫水。 = 6 * GB3 經(jīng)常注意所用試劑質(zhì)量減退情況，根據(jù)需要及時(shí)更換新液，更換時(shí)乙醇可降級重復(fù)使用。試劑應(yīng)經(jīng)常過濾，以保持清潔，避免混雜。 = 7 * GB3 常規(guī)制片所用石蠟的熔點(diǎn)，以56左右為宜。在溫?zé)岬牡貐^(qū)或夏季，應(yīng)用熔點(diǎn)較高的石蠟，在寒冷地區(qū)或冬季，則以熔點(diǎn)較低的石蠟為好。 = 8 * GB3 硬脂酸-蠟可作為乙醇和石蠟間的中介劑，且可使組織硬度適中便于切片。 = 9 * GB3 乙醇、二