體外診斷試劑分析性能評估線性范圍培訓課件

1、體外診斷試劑分析性能評估線性范圍體外診斷試劑分析性能評估線性范圍本指南的目的旨在提供一種定量測量程序線性評價的統(tǒng)計學方法。確定一種方法的非線性濃度范圍，及在每個濃度水平上非線性的程度。23體外診斷試劑分析性能評估線性范圍本指南的目的旨在提供一種定量測量程序線性評價的統(tǒng)計學方法。確體外診斷試劑產品性能評估過程0102030405060701020304050607確定線性范圍數(shù)據(jù)修正基本原則樣本要求數(shù)據(jù)收集數(shù)據(jù)檢查數(shù)據(jù)分析24體外診斷試劑分析性能評估線性范圍體外診斷試劑產品性能評估過程0102030405060701（1）實驗操作人員應熟悉方法原理與操作，能對樣本進行正確處理，確保儀器工作狀態(tài)正

2、常，采用適當?shù)男势穼x器進行校準。 （2）儀器的各項性能指標（如精密度）合格，不存在明顯的攜帶污染等。（3）應使用同批號試劑及校準品。線性范圍評估的基本原則25體外診斷試劑分析性能評估線性范圍（1）實驗操作人員應熟悉方法原理與操作，能對樣本進行正確處理確定樣本類型：為避免基質效應對結果的影響，進行線性評價時所選用的樣本應與臨床實驗樣本相似，但不可采用含有對測定方法具有明確干擾作用的樣本，如溶血、脂血、黃疸或含有某些特定藥物的樣本。理想樣本為分析物濃度接近預期測定上限的病人混合血清，可用其他病人樣本將其稀釋為預定濃度。EP6-A中建議應盡可能按以下順序進行樣本種類的選擇：病人混合血清；用適當稀

3、釋液稀釋的病人血清；添加分析物的病人樣本；用處理過的低濃度物質或處理過的血清物質稀釋的病人血清；商業(yè)質控品/校準品/線性物質；使用生理鹽水稀釋的樣本；稀釋不足或過度稀釋的商業(yè)質控品；水溶液；其他溶劑的溶液。實驗樣本的基本要求和制備方法：26體外診斷試劑分析性能評估線性范圍確定樣本類型：為避免基質效應對結果的影響，進行線性評價時所選建立線性范圍：建議9至11個濃度，每個濃度下重復2至4次；驗證內部方法或修正方法：建議7至9個點，每個濃度重復2至3次；驗證線性范圍在實驗室有效：建議5至7個濃度，每個濃度重復2次；注意：當建立方法的線性范圍時，應有20%到30%的樣本的濃度范圍超出預期的測量范圍，但

4、在可接受的線性響應范圍內。樣本數(shù)量的要求：27體外診斷試劑分析性能評估線性范圍建立線性范圍：建議9至11個濃度，每個濃度下重復2至樣本數(shù)量不同濃度水平樣本制備表：28體外診斷試劑分析性能評估線性范圍不同濃度水平樣本制備表：28體外診斷試劑分析性能評估線性范圍實驗過程：所有樣本應在一次運行中或幾次間隔很短的運行中隨機測定，最好在一天之內完成。29體外診斷試劑分析性能評估線性范圍實驗過程：29體外診斷試劑分析性能評估線性范圍數(shù)據(jù)分析方法：確定自己所要求的測量誤差、偏倚、隨機誤差（不精密度）、非特異性（干擾）的大小。初步數(shù)據(jù)檢查：檢查數(shù)據(jù)是否有極端明顯的差異（或錯誤）？無？有？目視每組數(shù)據(jù)點內有無離

5、群點？無？有？一個？一個以上？如果需要，將每一組的檢測數(shù)據(jù)按檢測時間次序排列，檢查是否有漂移或趨勢性變化。觀察每個濃度水平的響應值之間的差異。目視檢查XY散點圖對于后續(xù)的線性評估是非常重要的，它可以很容易的發(fā)現(xiàn)非線性， 或測量范圍是否太窄或太寬，也可以為后續(xù)的統(tǒng)計分析選擇更合適的統(tǒng)計分析方法。設定偏差標準：30體外診斷試劑分析性能評估線性范圍數(shù)據(jù)分析方法：確定自己所要求的測量誤差、偏倚、隨機誤差（不精確定線性范圍：多項式線性評價：對實驗數(shù)據(jù)進行一次、二次、三次多項式回歸分析。具體的評價方法包括兩部分：第一部分：檢驗非線性多項式是否較線性多項式與數(shù)據(jù)更 為相符。第二部分：當非線性多項式擬合數(shù)據(jù)點

6、比線性好時，判斷 最適非線性模型與線性擬合之間的差值是否小 于預先設定的該方法的允許偏差。31體外診斷試劑分析性能評估線性范圍確定線性范圍：多項式線性評價：對實驗數(shù)據(jù)進行一次、二次、三次樣品重復檢測的隨機誤差評估：R：為重復測定的次數(shù)（j=1,2,3R）L：樣本數(shù)ri：樣本i處的平均值。L：樣本數(shù)ri：樣本i處的平均值。32體外診斷試劑分析性能評估線性范圍樣品重復檢測的隨機誤差評估：R：為重復測定的次數(shù)（j=1,2體外診斷試劑分析性能評估線性范圍培訓課件非線性系數(shù)b2，b3的t檢驗：t=bi/SEi自由度計算公式：df=LR-Rdf，L：不同濃度樣本數(shù)，R：重復檢測次數(shù)，Rdf：回歸自由度例：

7、三次多項式回歸時，L=5，R=2，Rdf=4，df=5*2-4=6。查t值表（附錄B)（雙側=0.05）。如非線性系數(shù)b2、b3與0比較，經t檢驗（p0.05），存在線性關系，不精密度滿足條件時，則分析完成。如二次多項式模型的非線性系數(shù)b2，或三次多項式模型的b2或b3中任一個與0比較，有顯著差異（p2.365，DF=7），三次多項式模型的b2和b3無顯著意義。標準差的大小也顯示二次多項式模型較一次多項式和三次多項式模型更適合該組數(shù)據(jù)。一次多項式和二次多項式模型的差值都沒有超過實驗室設定的0.2mg/dl，所以該方法在該范（4.6515.4mg/mL）內呈線性。線性偏倚分析：40體外診斷試劑分

8、析性能評估線性范圍測量均值預測值1st預測值2nd2nd-1st% 差值4.6圖C1：Ca線性實驗1-6稀釋圖C2：Ca線性評價差值點圖1-6稀釋圖C3：Ca線性實驗1-5稀釋圖C4：Ca線性評價差值點圖1-5稀釋41體外診斷試劑分析性能評估線性范圍圖C1：Ca線性實驗1-6稀釋圖C2：Ca線性評價差值點圖舉例標本號測量結果#1測量結果#2均 值126.526.226.352139138138.53269273271.04337343340.05409404406.5在實驗室內準備五個等距濃度的標本測定IgM，每標本重復測定兩次。假定實驗室設定的重復性和線性的允許誤差范圍分別為2%和5%。隨機

9、順序測試結果如下：標本號均值差值DiffDiff 2/2% Diff%Diff 2/2126.350.3.0451.140.6482138.51.00.50.720.2613271.04.08.01.481.0894341.06.018.01.761.5485406.55.012.51.230.756 從表中數(shù)據(jù)可以看出，沒有明顯的離群值，但在低水平濃度處重復性較好，而在高濃度水平處兩次測量結果差異較大。重復性差異檢測如下：42體外診斷試劑分析性能評估線性范圍舉例標本號測量結果#1測量結果#2均 值126.526.2階別回歸系數(shù)結果系數(shù)（SEi）t檢驗自由度回歸標準誤(Sy,x)一次b0-52

10、.0716.923.1一次b196.185.1018.8822.8二次b0-129.4715.628.3二次b1162.5211.9113.6二次b2-11.061.955.7 (*)710.3三次b0-97.4835.88-2.7三次b1117.5846.912.5三次b26.0817.410.3三次b3-1.901.92-1.0610.3表：回歸分析的結果從表中可知，二次多項式模型比一次多項式線性要好，有統(tǒng)計意義的顯著性系數(shù)（t=5.7，超過查表的2.365），該組數(shù)據(jù)存在非線性。43體外診斷試劑分析性能評估線性范圍階別回歸系數(shù)結果系數(shù)（SEi）t檢驗自由度回歸標準誤(Sy,線性偏倚分析：

11、實測均值預測值（1st）預測值（2nd）差值（2nd -1st）% 差值26.444.122.0-22.1-50.2138.5140.3151.311.07.8271.0236.5258.622.19.3340.0332.7343.711.03.3406.5428.8406.7-22.1-5.2從一次多項式和二次多項式模型的對比分析結果來看，在低和中濃度處有較大的差別，而在高濃度水平處有較好的一致性。高中低濃度水平處差值的百分數(shù)大小超過了實驗室設定的誤差范圍，因而認為本方法不具有線性。44體外診斷試劑分析性能評估線性范圍線性偏倚分析：實測均值預測值（1st）預測值（2nd）差值（樣本測量時要按什么順序？分析順序應是隨機的，但如果存在明顯攜帶污染或漂移，則可妥協(xié)。重復測量的次數(shù)有具體要求嗎？為了得到可靠的檢測結果，對于某些分析物，或在某個濃度水平，需重復測量3-5次。用戶要能準確地判斷重復測量的次數(shù)，本指南不反對在不同的濃度水平重復不同的次數(shù)。評價線性范圍時，最好要包含幾個重要的濃度： a. 最低分析濃度或線性范圍的下限； b. 不同的醫(yī)學決定