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文檔簡介

1、HIV感染的實驗診斷白立石北京市疾病預防控制中心艾滋病確認中心2008年5月HIV感染的實驗診斷白立石 一、HIV感染后的免疫和病毒學 一、HIV感染后的免疫和病毒學HIV的基因組結構和蛋白基質 衣殼 核衣殼 表面糖蛋白 跨膜糖蛋白蛋白酶 反轉錄酶 整合酶HIV結構基因,有3個env(核苷酸5781-8360)編碼包膜蛋白p160、120、41等。 gag(核苷酸310-1860)編碼病毒核心/衣殼蛋白p55、24、15、17;pol(核苷酸1629-4673)編碼逆轉錄酶(RT)、p66、51、32、11等;HIV調節(jié)基因,有6個tat:上調mRNA,促病毒復制-啟動rev:調節(jié)病毒mRNA

2、-開關vif:增強出芽,釋放新病毒顆粒-感染因子nef:下調mRNA,抑病毒復制-制動vpu:僅見于HIV-1,功能不詳;vpx:僅見于HIV-2,功能不詳。HIV的基因組結構和蛋白基質 衣殼 核衣殼 HIV感染的實驗診斷課件5days5腦部:巨嗜細胞和膠質細胞淋巴系統(tǒng):胸腺淋巴結脾臟腸道:嗜鉻細胞前列腺精液陰道黏液骨髓肺胞巨嗜細胞血液細胞積存:CD4+T 淋巴細胞巨嗜細胞膠質細胞嗜鉻細胞 Image from: Kahn and Walker, M.D. NEJM 1998, Volume 339:33-39 July 2 腦部:巨嗜細胞和膠質細胞淋巴系統(tǒng):腸道:嗜鉻細胞前列腺精液骨感染HI

3、V后的血清學變化HIV RNA濃度p24AgP24 AgAnti-gp41,120,160Anti-p24,55感染1周 2周 6周 12周 810 年急性期潛伏期艾滋病期檢出線感染HIV后的血清學變化HIV RNA濃度p24AgP24 HIV-1早期感染病毒標志物的動態(tài)觀察HIV RNAHIV p24 antigenHIV antibodies窗口期血漿RNAP24前病毒 DNAHIV抗體:ELISAHIV抗體:WBHIV-1早期感染病毒標志物的動態(tài)觀察HIV RNAHIV HIV感染者的三種臨床轉歸VirusCD4CD8 aHIVCD4CD4CD8CD8 aHIVVirusVirus典型

4、810 y快速 : 4-5 y : (2%)緩慢/長期不進展 : 10 y : (2%)HIV感染者的三種臨床轉歸VirusCD4CD8 aHIVC二、HIV酶聯(lián)篩查檢測方法和試劑感染急性期 , 窗口期 檢測試劑以ELISA為主,還有PA,斑點免疫膠體金和免疫層析。ELISA試劑為HIV1/2型,包括M和O組,N組不包括但很少。 三四五代酶聯(lián)試劑的差異和使用策略: 三代成熟質量穩(wěn)定,窗口期20d;四代提前49d,質量不穩(wěn)定,用于血站急性感染的檢測。 篩查試驗和確認試驗的差異: 酶聯(lián)試驗敏感性高于確認試驗,四代試劑敏感性更高,確認陰性的不一定是真陰性。 二、HIV酶聯(lián)篩查檢測方法和試劑感染急性期

5、 , 窗口期 (一)HIV抗體ELISA檢測試劑(血液)第三代:雙抗原夾心法,可檢測所有類型抗體,由于能檢出IgM抗體,縮短了窗口期,有報道說較第二代產品平均可提前5天作出診斷。第四代:雙抗原(抗體)夾心法,將HIV P24抗體和HIV抗原同時包被,再加入待檢血清,最后加入酶標記的HIV抗原和HIV P24單克隆抗體,同時檢測血清中的HIV P24抗原和HIV抗體。第五代:HIV抗體和P24抗原實現(xiàn)分別檢測,真正實現(xiàn)早期診斷。(一)HIV抗體ELISA檢測試劑(血液)第三代:雙抗原夾心FourthGenerationThirdGenerationSecondGenerationIgMIgGIg

6、MIgG各種HIV檢測方法平均窗口期 方法平均天數(shù)第2代EIA45第3代EIA22P24抗原16HIV RNA11各種HIV檢測方法平均窗口期 方法平均天數(shù)(二)、檢測試劑的質量指標靈敏度診斷試驗的靈敏度有兩個不同意義:1代表一個試驗能檢測最少量被分析物(如抗體)的能力。通常可對陽性血清進行稀釋以確認哪個試驗更敏感。2指某試驗檢出陽性的能力(無假陰性)。一個試驗有可能檢出很少量的某抗體,但也可因試驗中缺少適當?shù)目乖┑粢恍╆栃詷悠?。(二)、檢測試劑的質量指標2特異性指某試驗正確鑒定所有陰性的能力(無假陽性)。大部分HIV篩查試驗不是100%特異,可用公式計算 真陰性 特異度= 100% 真陰

7、性+假陽性注:公式中真陰性指試驗中所能檢測的真陰性數(shù)。如100份血清,5份真陽性,95份真陰性,與參考試驗比較,某試驗檢出6份陽性(一份假陽性),則 特異性=94/(94+1)100%=98.9%2特異性3試驗效率指某試驗正確鑒定所有陽性和陰性的總體能力(無假陽性或假陰性),是靈敏度和特異性的綜合指標,反映了該試驗的總的效率。 真陽性+真陰性試驗效率= 100% 真陽性+假陽性+真陰性+假陰性注: 公式中真陽性和真陰性指試驗數(shù)目。在以上例子中,檢測100份血清,5份真陽性,95份真陰性,1份假陽性,1份假陰性,因此 4+94 試驗效率= 100%=98% 4+1+94+13試驗效率4預測值預測

8、值與以上的參數(shù)不同,它描述的是考慮了被檢人群中感染的流行因素后的試驗評價。陽性預測值(PPV):定義為在所有陽性結果人群中感染 個體所占比例。陰性預測值(NPV):定義為在所有陰性結果人群中未感 染個體所占比例。 真陽性陽性預測值= 100% 真陽性+假陽性 真陰性陰性預測值= 100% 真陰性+假陰性注:公式中真陽性和真陰性指試驗數(shù)目。4預測值在感染流行率較高(5%)的人群中1000人受檢:50份真陽性(已感染),950份真陰性(未感染),5份假陽性(試驗結果),5份假陰性(試驗結果),計算 PPV=45/(45+5)100%=90% NPV =945/(945+5)100%=99.5% 在

9、另一人群有相同的結果(即相同數(shù)量的假陽性和假陰性) 在感染流行率較低的人群(0.7%)中 1000人受檢:7份真陽性(已感染),993份真陰性(未感染), 5份假陽性(試驗結果),5份假陰性(試驗結果),計算 PPV=2 /2+5=28.6% NPV =988/988+5=99.5% 在感染流行率較高(5%)的人群中 在感染流行率較低5艾滋病病原診斷中的幾個問題明確不同實驗方法的意義和適應范圍: HIV血清學檢測方法可分初篩和確證兩類。HIV初篩試驗特異性不夠強,有時會造成一些假陽性結果,故在初篩試驗出現(xiàn)陽性結果時,應再重復試驗,若仍為陽性再用確證試驗(West Blot)去證實。 但一些非感

10、染者的血液也會對某些抗原顯示反應(出現(xiàn)的條 帶不夠判為陽性的標準),在正常的非感染者人群中發(fā)生比例15%,所以如果用WB來測ELISA陰性者的血清,有些標本被視為不確定。出現(xiàn)不確定結果時,可能是HIV早期感染或是非特異反應,應在1-6個月后復查,并結合個體的臨床表現(xiàn)、感染因素、WB帶型等綜合分析后做出結論。5艾滋病病原診斷中的幾個問題針對HIV感染不同時期選用不同的檢測手段:HIV感染后兩周內,無法查到抗體。兩周后出現(xiàn)病毒血癥,可用P24抗原檢測方法或測逆轉錄酶活性。6-8周后抗體產生時,進行抗體檢測。 診斷HIV感染在早期可檢測抗原,而在感染后的大多數(shù)時間,可用血清學方法診斷。針對HIV感染

11、不同時期選用不同的檢測手段:HIV感染后兩周 HIV抗體測定的預測值:試劑的敏感性和特異性可衡量優(yōu)劣,但不能完全決定一個測定結果正確與否的可能性大小,與預測值關系更大。 預測值除與試劑好壞有關外,還取決于測定對象本身患病率的高低。由表1可以看出:在用ELISA法對高危人群檢測時,其陽性預測值為99.98%,而在非高危人群中,陽性預測值僅為18.94%(即查出陽性結果是真陽性的機率只有18.94%),反之陰性結果的機率為99.997%。 表1 ELISA法HIV1抗體測定的預示值 人群 預示值 (%) 陽性 陰性 舊金山同性戀人群 99.98 80.06 美國非高危人群 18.94 99.997

12、表1 ELISA法HIV1抗體測定的預示值 HIV抗體檢測反應強度與HIV感染的概率:ELISA法可根據(jù)光密度(OD)值的強度直接確定。反應越強的血清,含有HIV抗體的可能性就越大。表2中正常獻血員(感染率30/10萬),中等強度反應時,HIV抗體陽性概率僅為1%,高強度反應時,則為86.1%。見表2。不僅要看陰陽結果,還要看反應強度或S/CO比值。表2 HIV感染機率與ELISA反應強度的關系 人群HIV感染率(/10萬) ELISA反應強度(%)低度 中度 高度 非高危獻血員 300.00071.1386.1高危獻血員 950.00223.4895.2軍人 1500.00365.3996.

13、9吸毒者 450001.9196.699.9表2 HIV感染機率與ELISA反應強度的關系HIV感注:1、數(shù)字表示相應強度反應的血清中含有HIV抗體的概率2、低度為S/CO1,中度為1S/CO6。注:三、確認試驗WB為主,還有:線性免疫試驗(LIA),放射免疫沉淀試驗(RIPA)和免疫熒光試驗(IFA)。WB存有培養(yǎng)病毒的宿主細胞成分,容易出現(xiàn)非特異性反應造成不確定結果,LIA使用重組蛋白(多肽),非特異性大大減少,試劑盒有INNO-LIA,Pepti-Lav等。IFA很少使用。三、確認試驗WB為主,還有:線性免疫試驗(LIA),放射免疫(一)、HIV抗體強度與抗體帶型的關系抗體帶型 15全帶

14、型8條帶型6條帶型5條帶型4條帶型3條帶型2條帶型1條帶型11151642 106721224612 合計121812049(一)、HIV抗體強度與抗體帶型的關系抗體帶型 105全帶型8條帶型6條帶型5條帶型4條帶型3條帶型2條帶型1條帶型4118171412166331211183322合計69797818(二)、HIV病毒載量與抗體帶型的關系 載量510(三)、造成WB假陽性或不確定的原因1.實驗室操作中,陰性樣本被污染或洗滌不徹底。2.HIV感染急性期,窗口期附近,僅顯示gp160或120,或P24,P31,P55帶;此時ELISA往往已顯示陽性反應 3.晚期AIDS病人,部分抗體如P2

15、4,P31丟失4.其他病毒感染的交叉反應,如風疹,麻疹,腮腺炎等5.自身免疫病,高丙種球蛋白血癥(全身性紅斑狼瘡)6.腎衰竭和血透析 7.遺傳性胰腺囊腫 8.多次懷孕或輸血 9. 肝病 10.乙肝、狂犬等疫苗注射,使用胸腺肽。11.線粒體核酸和T細胞白細胞抗原引起的抗體(三)、造成WB假陽性或不確定的原因1.實驗室操作中,陰性樣在無高危行為的獻血和孕婦人群中, WB不確定率10-15%,甚至高達32. Gag蛋白抗體條帶最常見。ELISA篩查陽性結果中,WB不確定占4-20%,俄羅斯報告占12.7%。我國,125份確認為HIV-1抗體陽性;條帶出現(xiàn)百分率為:gp160、p24為100%, gp

16、120、gp41、p66、p51和p31在96%以上, p17、p55分別為86.4%和85.6%. 上海,36例WB試驗 gp120和 p24雙陽性者的跟蹤隨訪和核酸輔助診斷發(fā)現(xiàn),至少24例可判定為HIV-1感染。5例樣本的核酸測定結果與血清學隨訪檢測結果的符合率達到100%。25例隨訪到的對象中,18例樣本平均17 天后條帶有明顯進展,可以判定為HIV抗體陽轉 。 (四)WB不確定結果的有關數(shù)據(jù)(四)WB不確定結果的有關數(shù)據(jù)(五)假陰性結果指EIA+WB的假陰性原因急性感染后的抗體遲反應不同HIV毒株型發(fā)病晚期抗體消失窗口期:幾周到6個月,與當?shù)豀IV流行率有關HIV亞型,M/N/O組間差

17、異(五)假陰性結果指EIA+WB的假陰性(六)、確認試驗不確定標本的常規(guī)處理按照全國艾滋病檢測技術規(guī)范(2004年版)的要求,只能作“3個月后復檢”的處理,三個月后復檢1次,連續(xù)2次,共6個月。其轉歸有兩種可能:仍呈現(xiàn)不確定或陰性,則診斷為HIV抗體陰性;帶型發(fā)生進展,符合HIV抗體陽性判斷標準,則診斷為HIV抗體陽性。后者是真正的窗口期感染者(一般為2-3個月,最長6個月) ,只占很小的比例;大多數(shù)為非感染者,但由于WB反應的敏感性而出現(xiàn)條帶。如有必要,可用輔助診斷方法對不確定樣本進行實驗診斷。(六)、確認試驗不確定標本的常規(guī)處理按照全國艾滋病檢測技術確認結果不確定標本的輔助診斷1、病毒載量

18、:RT-PCR,NASBA,b-DNA,高拷貝的結果提示感染。小于18個月嬰兒在10000拷貝/毫升應做HIV感染處理。注意不同方法間結果的差異,陰性不排除感染。2、免疫標志物:CD4/CD8, CTL,微球蛋白和Neopterin等。CD4計數(shù)常用,CD4/CD8小于1提示感染。3、核酸定性:DNAPCR或 RT-PCR,陽性不能單獨用于感染的診斷,陰性不排除感染。4、P24抗原檢測:陽性結果需經中和實驗確認,才提示HIV感染。陰性不排除感染,因敏感性低:3080。5、病毒分離:特異性好,但敏感性不高,潛伏期難分離6、流行病學調查和臨床癥狀:近期是否有HIV高危行為,是否有急性期的相關癥狀。

19、確認結果不確定標本的輔助診斷1、病毒載量:RT-PCR,NA四、HIV感染的早期(窗口期)診斷 1、 早期診斷的意義 通常窗口期急性感染時出現(xiàn)病毒血癥,此期間病毒載量,P24抗原均很高,是HIV快速復制階段,具有高感染力;以下情況下,非常有必要盡快開展HIV感染早期診斷: (1)安全用血-窗口期血液篩查; (2)個體需求-暴露后診斷,包括通過輸血、靜脈吸毒、針刺等的血液暴露,以及同性戀、異性戀等性途徑暴露; (3)各種職業(yè)暴露后的風險評估,醫(yī)生警察。 四、HIV感染的早期(窗口期)診斷 1、 早期診斷的意2、早期感染的診斷方法抗原檢測 P24抗原EIA試劑試劑盒在血清抗體陽轉前2-18天即可以

20、檢測到。第四代HIV ELISA試劑敏感性和特異性均有了很大提高,可以作為血源篩查; 病毒RNA定性與定量檢測 第一次病毒血癥高峰時間大約在感染后4-11天,可以用核酸檢測進行輔助診斷。應用輔助診斷時方法時,應綜合考慮流行病史、核酸檢測值、臨床表現(xiàn)、其他檢測(病毒分離,CD4細胞,抗原)等。 2、早期感染的診斷方法抗原檢測 P24抗原EIA試劑試歷史岳麓版第13課交通與通訊的變化資料精品課件歡迎使用歷史岳麓版第13課交通與通訊的變化資料精品課件歡迎使用HIV感染的實驗診斷課件HIV感染的實驗診斷課件HIV感染的實驗診斷課件自讀教材填要點 一、鐵路,更多的鐵路 1地位 鐵路是 建設的重點,便于國

21、計民生,成為國民經濟發(fā)展的動脈。 2出現(xiàn) 1881年,中國自建的第一條鐵路唐山 至胥各莊鐵路建成通車。 1888年,宮廷專用鐵路落成。交通運輸開平自讀教材填要點 一、鐵路,更多的鐵路交通運輸開平 3發(fā)展 (1)原因: 甲午戰(zhàn)爭以后列強激烈爭奪在華鐵路的 。 修路成為中國人 的強烈愿望。 (2)成果:1909年 建成通車;民國以后,各條商路修筑權收歸國有。 4制約因素 政潮迭起,軍閥混戰(zhàn),社會經濟凋敝,鐵路建設始終未入正軌。修筑權救亡圖存京張鐵路 3發(fā)展修筑權救亡圖存京張鐵路 二、水運與航空 1水運 (1)1872年, 正式成立,標志著中國新式航運業(yè)的誕生。 (2)1900年前后,民間興辦的各種

22、輪船航運公司近百家,幾乎都是在列強排擠中艱難求生。 2航空 (1)起步:1918年,附設在福建馬尾造船廠的海軍飛機工程處開始研制 。 (2)發(fā)展:1918年,北洋政府在交通部下設“ ”;此后十年間,航空事業(yè)獲得較快發(fā)展。輪船招商局水上飛機籌辦航空事宜處 二、水運與航空輪船招商局水上飛機籌辦航空事宜處 三、從驛傳到郵政 1郵政 (1)初辦郵政: 1896年成立“大清郵政局”,此后又設 ,郵傳正式脫離海關。 (2)進一步發(fā)展:1913年,北洋政府宣布裁撤全部驛站;1920年,中國首次參加 。郵傳部萬國郵聯(lián)大會 三、從驛傳到郵政郵傳部萬國郵聯(lián)大會 2電訊 (1)開端:1877年,福建巡撫在 架設第一

23、條電報線,成為中國自辦電報的開端。 (2)特點:進程曲折,發(fā)展緩慢,直到20世紀30年代情況才發(fā)生變化。 3交通通訊變化的影響 (1)新式交通促進了經濟發(fā)展,改變了人們的通訊手段和 , 轉變了人們的思想觀念。 (2)交通近代化使中國同世界的聯(lián)系大大增強,使異地傳輸更為便捷。 (3)促進了中國的經濟與社會發(fā)展,也使人們的生活 。臺灣出行方式多姿多彩 2電訊臺灣出行方式多姿多彩合作探究提認知 電視劇闖關東講述了濟南章丘朱家峪人朱開山一家,從清末到九一八事變爆發(fā)闖關東的前塵往事。下圖是朱開山一家從山東輾轉逃亡到東北途中可能用到的四種交通工具。合作探究提認知 電視劇闖關東講述了濟南章丘 依據(jù)材料概括晚

24、清中國交通方式的特點,并分析其成因。 提示:特點:新舊交通工具并存(或:傳統(tǒng)的帆船、獨輪車, 近代的小火輪、火車同時使用)。 原因:近代西方列強的侵略加劇了中國的貧困,阻礙社會發(fā)展;西方工業(yè)文明的沖擊與示范;中國民族工業(yè)的興起與發(fā)展;政府及各階層人士的提倡與推動。 依據(jù)材料概括晚清中國交通方式的特點,并分析其成因。串點成面握全局串點成面握全局HIV感染的實驗診斷課件 一、近代交通業(yè)發(fā)展的原因、特點及影響 1原因 (1)先進的中國人為救國救民,積極興辦近代交通業(yè),促進中國社會發(fā)展。 (2)列強侵華的需要。為擴大在華利益,加強控制、鎮(zhèn)壓中國人民的反抗,控制和操縱中國交通建設。 (3)工業(yè)革命的成果

25、傳入中國,為近代交通業(yè)的發(fā)展提供了物質條件。 一、近代交通業(yè)發(fā)展的原因、特點及影響 2特點 (1)近代中國交通業(yè)逐漸開始近代化的進程,鐵路、水運和航空都獲得了一定程度的發(fā)展。 (2)近代中國交通業(yè)受到西方列強的控制和操縱。 (3)地域之間的發(fā)展不平衡。 3影響 (1)積極影響:促進了經濟發(fā)展,改變了人們的出行方式,一定程度上轉變了人們的思想觀念;加強了中國與世界各地的聯(lián)系,豐富了人們的生活。 (2)消極影響:有利于西方列強的政治侵略和經濟掠奪。 2特點1李鴻章1872年在上海創(chuàng)辦輪船招商局,“前10年盈和,成為長江上重要商局,招商局和英商太古、怡和三家呈鼎立之勢”。這說明該企業(yè)的創(chuàng)辦()A打破

26、了外商對中國航運業(yè)的壟斷B阻止了外國對中國的經濟侵略C標志著中國近代化的起步D使李鴻章轉變?yōu)槊褡遒Y本家1李鴻章1872年在上海創(chuàng)辦輪船招商局,“前10年盈和,成解析:李鴻章是地主階級的代表,并未轉化為民族資本家;洋務運動標志著中國近代化的開端,但不是具體以某個企業(yè)的創(chuàng)辦為標志;洋務運動中民用企業(yè)的創(chuàng)辦在一定程度上抵制了列強的經濟侵略,但是并未能阻止其侵略。故B、C、D三項表述都有錯誤。答案:A解析:李鴻章是地主階級的代表,并未轉化為民族資本家;洋務運動 二、近代以來交通、通訊工具的進步對人們社會生活的影響 (1)交通工具和交通事業(yè)的發(fā)展,不僅推動各地經濟文化交流和發(fā)展,而且也促進信息的傳播,開

27、闊人們的視野,加快生活的節(jié)奏,對人們的社會生活產生了深刻影響。 (2)通訊工具的變遷和電訊事業(yè)的發(fā)展,使信息的傳遞變得快捷簡便,深刻地改變著人們的思想觀念,影響著人們的社會生活。 二、近代以來交通、通訊工具的進步對人們社會生活的影響2清朝黃遵憲曾作詩曰:“鐘聲一及時,頃刻不少留。雖有萬鈞柁,動如繞指柔?!边@是在描寫 ()A電話 B汽車C電報 D火車解析:從“萬鈞柁”“動如繞指柔”可推斷為火車。答案:D2清朝黃遵憲曾作詩曰:“鐘聲一及時,頃刻不少留。雖HIV感染的實驗診斷課件典題例析 例1上海世博會曾吸引了大批海內外人士利用各種交通工具前往參觀。然而在19世紀七十年代,江蘇沿江居民到上海,最有可

28、能乘坐的交通工具是 () A江南制造總局的汽車 B洋人發(fā)明的火車 C輪船招商局的輪船 D福州船政局的軍艦典題例析 例1上海世博會曾吸引了大批海內外人 解析由材料信息“19世紀七十年代,由江蘇沿江居民到上?!笨膳袛嘧钣锌赡苁禽喆猩叹值妮喆?。 答案C 解析由材料信息“19世紀七十年代,由江蘇沿江居題組沖關1中國近代史上首次打破列強壟斷局面的交通行業(yè)是 ()A公路運輸 B鐵路運輸C輪船運輸 D航空運輸解析:根據(jù)所學1872年李鴻章創(chuàng)辦輪船招商局,這是洋務運動中由軍工企業(yè)轉向兼辦民用企業(yè)、由官辦轉向官督商辦的第一個企業(yè)。具有打破外輪壟斷中國航運業(yè)的積極意義,這在一定程度上保護了中國的權利。據(jù)此本題選

29、C項。答案:C題組沖關1中國近代史上首次打破列強壟斷局面的交通行業(yè)是2. 右圖是1909年民呼日報上登載的一幅漫畫,其要表達的主題是( )A帝國主義掠奪中國鐵路權益B西方國家學習中國文化C西方列強掀起瓜分中國狂潮D西方八國組成聯(lián)軍侵略中國2. 右圖是1909年民呼日報上登載的解析:從圖片中可以了解到各國舉的燈籠是火車形狀,20世紀初的這一幅漫畫正反映了帝國主義掠奪中國鐵路權益。B項說法錯誤,C項不能反映漫畫的主題,D項時間上不一致。答案:A解析:從圖片中可以了解到各國舉的燈籠是火車形狀,20世紀初的HIV感染的實驗診斷課件典題例析 例2(2010福建高考)上海是近代中國茶葉的一個外銷中心。1884年,福建茶葉市場出現(xiàn)了茶葉收購價格與上海出口價格同步變動的現(xiàn)象。與這一現(xiàn)象直接相關的近代事業(yè)是 () A電報業(yè) B大眾報業(yè) C鐵路交通業(yè) D輪船航運業(yè) 解析材料主要反映了信息交流的快捷,故選A。 答案A典題例析 例2(2010福建高考)上海是近題組沖關3假如某愛

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