組織學(xué)與胚胎學(xué) 緒論

1、 組織學(xué)與胚胎學(xué) ( histology and embryology ) 緒 論一、組織學(xué)與胚胎學(xué)的定義及研究?jī)?nèi)容組織學(xué)（histology）：研究正常人體的微細(xì)結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能的學(xué)科 組織學(xué)研究?jī)?nèi)容：細(xì)胞細(xì)胞間質(zhì)組織上皮組織結(jié)締組織肌肉組織神經(jīng)組織器官和系統(tǒng)人體胚胎學(xué)（embryology）：研究人體發(fā)生、生長(zhǎng)及其發(fā)育機(jī)制的一門學(xué)科胚胎學(xué)研究?jī)?nèi)容：受精卵胚胎新生兒（28周）（938周） 問(wèn)題 解決方法 觀察對(duì)象太小 放大 顯微鏡 觀察對(duì)象無(wú)色，無(wú)反差 染色（HE染色） 觀察對(duì)象生化成分不同 細(xì)胞化學(xué)、免疫組織化學(xué) 觀察對(duì)象是活體 細(xì)胞培養(yǎng)二、組織胚胎學(xué)研究技術(shù)（一）顯微鏡光學(xué)顯微鏡（LM）

2、：R0.2m電子顯微鏡（EM）：R0.2nm分辨率(Resolution，R)是指能夠分辨相鄰兩點(diǎn)之間的最小距離（二）一般光學(xué)顯微鏡技術(shù)光學(xué)顯微鏡分辨率：0.2m放大倍數(shù)：幾百 一千余倍HE染色、封固后的切片（石蠟切片法）標(biāo)簽載玻片蓋玻片組織標(biāo)本石蠟切片法a. 固定(Fixation): 新鮮標(biāo)本取材后，為保存新鮮組織的微觀結(jié)構(gòu)，盡快將組織浸入到固定劑中。b. 石蠟包埋(Paraffin embedding):* 脫水(Dehydration): 用濃度逐漸升高的酒精 (70100%)將組織中的水完全置換出來(lái)。* 透明(Clearing): 用二甲苯完全置換出酒精。* 浸蠟(Infiltrat

3、ion): 在58-60時(shí)，用液態(tài)石蠟完全置換出二甲苯。室溫時(shí)石蠟?zāi)坛晒虘B(tài)，內(nèi)含待切組織。（適用：柔軟的組織）c. 切片: 用切片機(jī)將組織切成120m厚的蠟片，然后將其放到溫水上，待其完全展開(kāi)后，裱到有粘附劑的載玻片上。d. 染色(Staining): 染料可以將微觀結(jié)構(gòu)顯示不同的顏色以便觀察鑒別。在染色前，需要脫蠟入水，因?yàn)槿玖鲜撬苄缘?。e .封片：在染色后，重新進(jìn)入酒精和二甲苯，最后用中性樹(shù)膠封片，以便長(zhǎng)期保存。 蘇木精（H）：細(xì)胞核紫藍(lán)色，嗜堿性伊紅（E）：細(xì)胞質(zhì)粉紅色，嗜酸性HE染色HE染色切片HE染色切片不同的染色方法，其結(jié)果不同。HE染色的中等動(dòng)脈醛復(fù)紅染色的中等動(dòng)脈除切片外，

4、還有其他處理組織的方法：* 鋪片(Whole mount): 用于很薄的組織，如腸系膜。* 磨片(Ground section): 用于很堅(jiān)硬的組織，如骨和牙。* 涂片(Smear): 用于液態(tài)組織，如血液，精液和唾液。涂片（三）電子顯微鏡（electron microscope, EM）技術(shù) 分辨率：0.2nm原理和LM相似，但用電子束代替光線，磁場(chǎng)代替玻璃透鏡。所有原始的電鏡圖片都是黑白的。電鏡分類：透射電鏡（transmission electron microscope）： 觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)掃描電鏡（scanning electron microscope)： 觀察組織或細(xì)胞表面的立體

5、結(jié)構(gòu)透射電鏡圖片掃描電鏡圖片（四）一般組織化學(xué)法標(biāo)本某些結(jié)構(gòu)化學(xué)試劑有色沉淀 如：過(guò)碘酸-Schiff反應(yīng)(periodic acid Schiff reaction)：簡(jiǎn)稱 PAS反應(yīng)，是確定組織或細(xì)胞中有無(wú)多糖存在的一種方法。 原理：多糖PA氧化醛Schiff試劑紫紅色沉淀PAS反應(yīng)，小腸上皮杯狀細(xì)胞的粘原顆粒（五）免疫組織化學(xué)術(shù)（ immunohistochemistry） 根據(jù)抗原、抗體特異性結(jié)合原理，檢測(cè)組織切片中的肽和蛋白質(zhì) 用標(biāo)記的抗體與組織中的抗原結(jié)合，標(biāo)記物可于顯微鏡下觀察。標(biāo)記物有熒光素（熒光顯微鏡觀察）、辣根過(guò)氧化物酶（光鏡或電鏡觀察）、膠體金（多用于電鏡觀察）免疫組織化

6、學(xué)（辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記）胰島B細(xì)胞呈胰島素陽(yáng)性（六）原位雜交術(shù)（in situ hybridization） 即核酸分子雜交組織化學(xué)術(shù)，檢測(cè)基因（DNA片段）的有無(wú)、基因的表達(dá)活性（mRNA）原位雜交 臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞呈心房鈉尿肽陽(yáng)性（七）圖像分析術(shù)（image analysis） 又稱形態(tài)計(jì)量術(shù)（morphometry）：應(yīng)用數(shù)學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)原理對(duì)組織切片提供的平面圖像進(jìn)行分析，從而獲得立體的組織細(xì)胞內(nèi)有形成分的數(shù)量、體積、表面積等參數(shù)，從量的角度顯示結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系（八）細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)（cell culture） 把從機(jī)體取得的細(xì)胞在體外模擬體內(nèi)的條件下進(jìn)行培養(yǎng)；培養(yǎng)組織塊或器官則稱組織培養(yǎng)術(shù)或器官培養(yǎng)術(shù)用于研究細(xì)胞、組織的代謝、增殖、分化、形態(tài)和功能變化，各種理化因子對(duì)活細(xì)胞的影響培養(yǎng)條件：營(yíng)養(yǎng)、生長(zhǎng)因子、pH值、滲透壓、O2和CO2濃度、溫度，控制污染用相差顯微鏡觀察體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞（左）HeLa細(xì)胞（右） 倒置顯微鏡圖（九）組織工程（tissue engineering）用細(xì)胞培養(yǎng)術(shù)在體外模擬構(gòu)建機(jī)體組織或器官的技術(shù)正在構(gòu)建的有皮膚、軟骨、骨、肌腱、骨骼肌、血管、角膜等；其中以組織