生物采樣方法、檢驗(yàn)技術(shù)與注意事項(xiàng)課件

1、醫(yī)院環(huán)境微生物采樣方法、檢驗(yàn)技術(shù)與注意事項(xiàng)復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院高曉東 第三十一條 環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測：包括對空氣、物體表面和醫(yī)護(hù)人員手的監(jiān)測。 醫(yī)院應(yīng)每月對手術(shù)室、重癥監(jiān)護(hù)病房室（ICU）、產(chǎn)房、母嬰室、新生兒病房、骨髓移植病房、血液病房、血液透析室、供應(yīng)室無菌區(qū)、治療室、換藥室等重點(diǎn)部門進(jìn)行環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測。當(dāng)有醫(yī)院感染流行，懷疑與醫(yī)院環(huán)境衛(wèi)生學(xué)因素有關(guān)時，應(yīng)及時進(jìn)行監(jiān)測。 第三十六條 出現(xiàn)醫(yī)院感染流行或暴發(fā)趨勢時，應(yīng)采取下列控制措施： 一、臨床科主必須及時查找原回，協(xié)助調(diào)查和執(zhí)行控制措施。 二、醫(yī)院感染管理科必須及時進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查處理，基本步驟為；1、證實(shí)流行或暴發(fā)2、查找感染源：對感染病人、

2、接觸者、可疑傳染 源、環(huán)境、物品、醫(yī)務(wù)人員及陪 護(hù)人員等進(jìn)行病原學(xué)檢查。3、查找引起感染的因素4、制定和組織落實(shí)有效的控制措施5、分析調(diào)查資料6、寫出調(diào)查報告?？諝馕⑸锊蓸蛹皺z驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑與無菌器械保存液 醫(yī)療器械微生物采樣及檢驗(yàn)方法水中微生物的采樣及檢驗(yàn)方法空氣微生物監(jiān)測空氣污染的監(jiān)測得到足夠重視空氣微生物研究的范圍在不斷擴(kuò)大空氣微生物的診斷在不斷提高控制空氣微生物的方法不斷更新對空氣微生物采樣方法認(rèn)識不斷提高沉降法重力沉降靜電沉降熱沉降沉降平皿法 室內(nèi)面積不超過30m2，在對角線上設(shè)里、中、外三點(diǎn)，里、外點(diǎn)位置距墻1m；室內(nèi)面

3、積超過30m2，設(shè)東、西、南、北、中5點(diǎn)，周圍4點(diǎn)距墻1m。采樣時，將含營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平板（直徑9cm）置采樣點(diǎn)（約桌面高度），打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5min。 。 結(jié)果計(jì)算 100cm2瓊脂面積上，5分鐘所降落的菌落數(shù)，相當(dāng)于10L空氣所含細(xì)菌數(shù)，計(jì)算結(jié)果如下：t平皿暴露于空氣中的時間（分鐘）N培養(yǎng)后，平皿上的菌落總數(shù)A所用平皿的面積（cm2）假如100cm2的平皿在空氣中暴露5min即相當(dāng)于10 L空氣中的細(xì)菌數(shù)結(jié)果判定類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)10cfu/m3，未檢出致病菌為消毒合格；類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)200cfu/m3，未檢出致病菌為消毒合格；類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)500cfu/m3，未檢出致

4、病菌為消毒合格。 缺點(diǎn)1、平板沉降法屬重心沉降，此法只能采集10m左右的粒子，而且不能作精確定量。因?yàn)榫蛦蝹€細(xì)菌而言，最大只有幾個m，小到1 m以下，所以它只能采集到附著于各種塵埃和氣溶膠表面的細(xì)菌，難以采集到懸浮的細(xì)菌，而經(jīng)空氣感染更多的是由于懸浮于空氣中的細(xì)菌所致。浮游菌測定法撞擊式空氣微生物采樣法離心式空氣微生物采樣法洗刷空氣微生物采樣法過濾空氣微生物采樣法溫差空氣微生物采樣法靜電或沖擊空氣微生物采樣法撞擊式空氣微生物采樣法 采樣器分別置于室內(nèi)對角和中央共3個點(diǎn)。設(shè)置采樣時間為每點(diǎn)2min，空氣流量為25lmin，細(xì)菌培養(yǎng)方法同沉降法。撞擊式空氣采樣儀FA-1型多級撞擊式空氣微生物采樣器

5、 FA-2型撞擊式空氣微生物采樣器 FA-1型多級撞擊式空氣微生物采樣器整個儀器是由采樣器以及抽氣泵、流量計(jì)、玻璃平皿所組成。 采樣器是6層有微小孔眼的鋁合金圓盤。圓盤下放瓊脂平皿，每圓盤間有密封膠圈，在通過三個彈簧卡子把圓盤牢固地聯(lián)在一起。每個圓盤上有400個成環(huán)行排列、逐層減小、尺寸精確的小孔，標(biāo)準(zhǔn)采樣流量為1立方呎（28.3L/min）。FA-2型撞擊式空氣微生物采樣器 該采樣器是依據(jù)安德森采樣器而設(shè)計(jì)制造的，它模擬人體呼吸道的解剖結(jié)構(gòu)及其空氣動力學(xué)特征，采用慣性撞擊原理，將懸浮在空氣中的微生物粒子，按大小等級分別收集在采樣介質(zhì)表面上，然后供培養(yǎng)及做進(jìn)一步的微生物分析，求出空氣微生物粒子

6、數(shù)量及其大小分布的特征。離心式空氣微生物采樣法 當(dāng)采樣器通電后，借助采樣器內(nèi)葉輪的高速旋轉(zhuǎn)，把距離40cm范圍內(nèi)的空氣吸進(jìn)采樣器，由于離心力的作用，空氣中的粒子沖擊到含有瓊脂培養(yǎng)基的塑料條上，而空氣呈螺旋狀離開采樣器渦殼流出。 菌落計(jì)算菌落形成單位CFU/m3=瓊脂培養(yǎng)基條上的菌落數(shù)40采樣時間（min）瓊脂培養(yǎng)基的表面積為341cm2。 浮游菌測定法撞擊式空氣微生物采樣法離心式空氣微生物采樣法洗刷空氣微生物采樣法過濾空氣微生物采樣法溫差空氣微生物采樣法靜電或沖擊空氣微生物采樣沖擊法（AGI）根據(jù)沖擊原理當(dāng)氣流以足夠的線速度沖擊采樣器中液體及附近表面時氣溶膠粒子可捕獲在液體中。所測定的細(xì)菌濃度

7、較為準(zhǔn)確。第一次國際空氣生物學(xué)會議上AGI采樣器被推薦為標(biāo)準(zhǔn)采樣器。AGI沖擊法捕獲率約為撞擊法4倍，平皿沉降法的3倍大容量空氣微生物采樣法大容量采樣器的采樣流量為7001000升/分，主要是為了采集空氣中含量較少的病原體微生物（如某些病毒等），以及潔凈環(huán)境（如制藥車間、病房等）微生物氣溶膠粒子，這些環(huán)境中氣溶膠粒子濃度很低，甚至在幾立方米的空氣中才有幾個粒子。提高采樣的流量，增大對低濃度病原微生物氣溶膠粒子，特別是一些病毒粒子的捕獲機(jī)會，以追蹤空氣傳播的來源。空氣中懸浮微生物測定方法機(jī)理測定方法主要測定目的主要設(shè)備沉降菌落法一般微生物和特殊微生物的污染平板瓊脂培養(yǎng)基撞擊狹縫法針孔法多孔板法離

8、心法懸浮微生物一般污染懸浮微生物一般污染狹縫采樣器針孔采樣器篩式采樣器設(shè)備本身撞擊洗刷撞擊式薄膜過濾器法懸浮微生物一般污染撞擊式采樣器微孔濾膜過濾器過濾玻璃纖維玻璃纖維過濾器溫差溫差法熱敏電阻靜電或沖擊大容量法設(shè)備本身浮游菌測定法優(yōu)點(diǎn)1、能夠采集浮游在空氣中的微生物粒子，這種粒子可隨人們呼吸運(yùn)動進(jìn)入呼吸道內(nèi)，因而具有衛(wèi)生學(xué)意義。2、采樣效率高，采樣量準(zhǔn)確，采樣時不受粒經(jīng)大小、沉降速度和氣流影響，能準(zhǔn)確的表示出空氣中細(xì)菌的實(shí)際含量。理想的采樣法應(yīng)具備的條件能快速測定微生物粒子濃度直接判定懸浮物的種類測量氣溶膠的粒譜靈敏度高，使用方便空氣微生物采樣方法空氣微生物消毒方法空氣微生物消毒方法空氣消毒物

9、理消毒化學(xué)消毒紫外線燈照射靜電吸附空氣過濾 消毒劑熏蒸如過氧乙酸熏蒸噴霧如用含氯消毒劑、過氧乙酸進(jìn)行超低容量噴霧消毒，用一些消毒器械即時產(chǎn)生的化學(xué)因子進(jìn)行消毒，如可以用臭氧進(jìn)行空氣消毒。 空氣消毒可采用最簡便易行的開窗通風(fēng)換氣方法，每次開窗10到30分鐘，使空氣流通，讓病菌排出室外。物理除菌紫外線燈無毒、經(jīng)濟(jì)、有效、方便照射30min至1h基本能使室內(nèi)空氣達(dá)類環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)。2h達(dá)類環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)，照射后3h內(nèi)空氣仍達(dá)類標(biāo)準(zhǔn)。而罩式、車式及固定貼墻式均因其罩背面空氣阻擋了2040的紫外線照射，而降低了殺菌效果和維持時間。要強(qiáng)調(diào)最佳安裝方式、合理安排消毒間隔時間，照射時保持室內(nèi)清潔干燥、燈管無塵，溫度60時

10、適當(dāng)延長照射時間是保證消毒效果所必須的。物理消毒物理消毒靜電吸附靜電吸附式空氣消毒機(jī)消毒：此類消毒機(jī)采用靜電吸附原理，加以過濾系統(tǒng)，不僅可過濾和吸附空氣中帶菌的塵埃，也可吸附微生物。使用一臺大型靜電式空氣消毒器，消毒30分鐘后，可使一個2030m2的房間達(dá)到國家有關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。物理消毒靜電吸附靜電滅菌空氣凈化機(jī)最大的優(yōu)點(diǎn)是在動態(tài)、靜態(tài)環(huán)境中均有較好的滅菌效果，因?yàn)樵谧贤鉄糸_著消毒時，人是不能在室內(nèi)工作的，而無菌室的工作人員流動較大，進(jìn)出較頻繁，因此要靠紫外燈滅菌是不理想的，而靜電滅菌空氣凈化機(jī)在動態(tài)時也能不斷凈化空氣。 物理消毒物理消毒靜電滅菌空氣凈化機(jī)(l)高效滅菌，滅菌率達(dá)到9998，菌落數(shù)

11、小于3個皿小時；(2)高效除塵，潔凈度可達(dá)一萬級以上；(3)去除有毒、有害氣體及致癌物質(zhì)；(4)產(chǎn)生輕負(fù)離子，改善空氣品質(zhì)；(5)采用模糊控制、人體感應(yīng)、定時遙控。 物理消毒臭氧消毒臭氧對室內(nèi)空氣微生物有較好的消毒作用，還可祛除氣味，使用簡便。在相對濕度70%條件下，臭氧濃度應(yīng)20mg/m3，消毒時間應(yīng)30min。臭氧對人有一定毒性，對金屬和橡膠有腐蝕作用。 化學(xué)消毒其它化學(xué)消毒劑（1）過氧乙酸熏蒸，1 g/m3過氧乙酸熏蒸，作用60分鐘，對室內(nèi)表面和空氣中的細(xì)菌、脊髓灰質(zhì)炎病毒均有很好的殺滅作用。氣溶膠噴霧消毒，0.10.2過氧乙酸（噴液量20 ml/min）作用3060分鐘。0.2%過氧乙

12、酸溶液按1000 ml/m2用量拖地，關(guān)閉門窗熏蒸30min。均有很好的殺菌效果。過氧乙酸有較強(qiáng)的刺激性和對物品腐蝕性。（2）過氧化氫氣溶膠噴霧，1.53過氧化氫噴霧，20 ml/m3 作用3060分鐘，對室內(nèi)物體表面和空氣均有較好消毒效果。且過氧化氫刺激性較小、無毒。（3）乳酸熏蒸，10乳酸于緊閉門窗情況下，加熱熏蒸2030分鐘，也有一定的殺菌效果。 化學(xué)消毒空氣消毒方法的選擇1、自然通風(fēng)是最經(jīng)濟(jì)、簡便和有效的保持室內(nèi)空氣新鮮、減少細(xì)菌濃度的方法。在有人或無人在情況下均可使用。對防止非典的傳播有很重要的意義。2、在出現(xiàn)呼吸道傳染病人后，單一的使用空氣消毒方法，即使空氣中的微生物全部被殺滅，但

13、由于污染表面的微生物沒有被殺滅，很快又可污染空氣。這種情況較合理的方法應(yīng)物體表面消毒和空氣消毒同時進(jìn)行，可選用過氧乙酸或過氧化氫等消毒劑進(jìn)行噴霧或熏蒸。 3、人在時的空氣消毒方法，可選用循環(huán)風(fēng)消毒機(jī)或靜電等空氣消毒器進(jìn)行連續(xù)動態(tài)消毒處理。使用這種空氣消毒方法時，應(yīng)結(jié)合室內(nèi)表面的衛(wèi)生清潔處理或先用消毒劑對污染表面進(jìn)行消毒，以保證空氣消毒效果。 空氣消毒方法的選擇空氣消毒注意事項(xiàng)1、對物品的腐蝕，過氧乙酸、臭氧等消毒劑對物品有不同程度的損壞，使用時濃度不宜過高、噴量不宜過大，必要時，消毒后應(yīng)及時用清水擦洗。 2、用消毒劑進(jìn)行空氣消毒時需關(guān)閉門窗，人員應(yīng)離開消毒場所，消毒完成后應(yīng)先打開門窗通風(fēng)，待消

14、毒劑驅(qū)除后方可進(jìn)入?？諝庀咀⒁馐马?xiàng)3、紫外線照射時，不能直接照射暴露皮膚，眼睛不能直視紫外線燈。以免對皮膚、眼睛造成傷害。 4、個人防護(hù)，用過氧乙酸等消毒劑進(jìn)行噴霧消毒時，消毒人員應(yīng)做好個人防護(hù)，如戴好口罩、眼鏡、手套等。 空氣微生物采樣及檢驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑與無菌器械保存液醫(yī)療器械微生物采樣及檢驗(yàn)方法水中微生物的采樣及檢驗(yàn)方法采樣時間選擇消毒處理后4h內(nèi)進(jìn)行采樣 采樣方法 用5cm5cm滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積100cm2，連續(xù)采樣4個，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭于1支；在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之

15、轉(zhuǎn)動棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。 門把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。 檢驗(yàn)方法 采樣結(jié)果計(jì)算方法： 細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)=平板上菌落數(shù)稀釋倍數(shù)/采樣面積(cm2) 將采樣管用力振打80次以上，按照污染程度作相應(yīng)的稀釋后用無菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿內(nèi)加人已熔化的45-48的營養(yǎng)瓊脂18-20ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置37溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。戳印法 在檢驗(yàn)時，只需在現(xiàn)場打開皿蓋，將略突出于培養(yǎng)皿口平面的培養(yǎng)基輕輕往被檢物品表面一按，蓋上皿蓋，在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)一定時間后計(jì)菌落數(shù)。此數(shù)值即為1

16、0cm2被檢物品表面上的細(xì)菌數(shù)，無需任何換算即可同消毒標(biāo)準(zhǔn)和公共場所衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)加以比較。十分快捷、方便，甚至沒有無菌室和專門檢驗(yàn)人員也可順利完成操作。是目前最理想的用于公共場所物品表面細(xì)菌污染程度監(jiān)測的方法。結(jié)果判定 、類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)5cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)10cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。lV類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)15cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門氏菌。 空氣微生物采樣及檢驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑與無菌器械保存液醫(yī)療器械微

17、生物采樣及檢驗(yàn)方法水中微生物的采樣及檢驗(yàn)方法手消毒實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測醫(yī)務(wù)人員的手經(jīng)常直接或間接地同污染品或病人接觸，在醫(yī)院感染傳播中起著十分重要的作用。監(jiān)測目的： 通過定性定量的檢查，了解手的污染情況； 評價手清潔和消毒的消毒。采樣方法：棉拭子法、指壓法、洗脫法。手的采樣方法被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。檢驗(yàn)方法同物體表面采樣后的檢驗(yàn)方法一、棉簽采樣法二、指壓法取一塊普通血瓊脂平板，把待檢查手的十個手指的指

18、腹部分別按壓在平板表面。然后把平板放入37溫箱內(nèi)培養(yǎng)48h，計(jì)算菌落數(shù)。三、洗脫法該法較其它兩種方法采菌量多，但操作較復(fù)雜。取滅菌生理鹽水200ml300ml，倒入適當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，將待檢查的手浸入生理鹽水中，反復(fù)沖洗1min2min。然后將沖洗后的水用細(xì)菌過濾器過濾，過濾完畢，將濾膜貼于普通瓊脂培養(yǎng)基上，37培養(yǎng)24h，計(jì)算菌落數(shù)。皮膚粘膜采樣方法 用5cm5crn滅菌現(xiàn)格板，放在被檢皮膚處；用沒有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投人10ml含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉

19、拭子直接涂擦采樣。 檢驗(yàn)方法同物體表面采樣的檢驗(yàn)方法結(jié)果判定 、類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)5Cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)10Cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。lV類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)15Cfu/Cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門氏菌及其它致病菌。 空氣微生物采樣及檢驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑與無菌器械保存液醫(yī)療器械微生物采樣及檢驗(yàn)方法水中微生物的采樣及檢驗(yàn)方法采樣量及方法在無菌條件下，用無菌吸管吸取1ml被檢樣液，加入9ml稀釋液中混均。

20、醇類與酚類消毒劑，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可；含氯消毒劑、含碘消毒劑、過氧化物消毒劑，需在肉湯中加入01硫代硫酸鈉；洗必泰、季銨鹽類消毒劑，需在肉湯中加3（W/V）吐溫80和0.3%卵磷脂；醛類消毒劑，需在肉湯中加入0.3甘氨酸；含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒劑，需在肉湯中加入3（ W/V）吐溫80，以中和被檢藥液的殘效作用。結(jié)果分析平板上有菌生長，證明被檢樣液有殘存活菌，若每個平板的落數(shù)在10個以下，仍可用于消毒處理（但個能用于滅菌），若每個平板菌落數(shù)超過10個，說明每毫升被檢樣液含菌量己超過100個，即不宜再用。空氣微生物采樣及檢驗(yàn)方法物體表面微生物采樣及檢驗(yàn)方法醫(yī)護(hù)人員手表面采樣及檢驗(yàn)方法使用中消毒劑與無菌器械保存液醫(yī)療器械微生物采樣及檢驗(yàn)方法水