羅氏試劑盒說明書 TESTO05423074001V1

1、05423074001V1睪酮（Testosterone II） 2009-07, V 1 中文 6/6 Elecsys 和 cobas e 分析儀05200067 190 100測試本試劑盒適用的分析儀Elecsys 2010MODULAR ANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601主要用途用于體外定量檢測人血清或血漿中的睪酮。Elecsys和cobas e 免疫分析儀的工作原理是電化學(xué)發(fā)光免疫分析“ECLIA”。臨床應(yīng)用雄性激素睪酮（17-羥雄烯二酮）的分子量為288道爾頓。男性體內(nèi)的睪酮幾乎全由睪丸間質(zhì)細胞合成。分泌受黃體生成素（LH）的調(diào)節(jié)，并負反饋影響垂

2、體-下丘腦的調(diào)節(jié)機制。睪酮促進男性第二性征的形成，維持前列腺和精囊的功能。血循環(huán)中的睪酮絕大部份與載體蛋白質(zhì)結(jié)合（如性激素結(jié)合球蛋白（SHBG）。女性的卵巢可產(chǎn)生少量睪酮。生理水平濃度的雄激素對婦女沒有特殊的作用。女性雄激素水平的升高可導(dǎo)致男性化（取決于雄激素水平的增加程度）。檢測女性體內(nèi)睪酮含量有助于診斷雄激素綜合征（AGS）、多囊性卵巢（Stein-Leventhal綜合癥）以及懷疑卵巢腫瘤、腎上腺腫瘤、腎上腺發(fā)育不良或卵巢功能障礙時。檢測男性體內(nèi)睪酮含量可用于診斷睪酮產(chǎn)生不足的疾病，如性腺發(fā)育不足、雌激素治療、染色體異常（如Klinefelter綜合征）和肝硬化。Elecsys睪酮II檢

3、測基于競爭法原理，使用一種高親和力的單克隆抗體（羊源），能夠特異性的識別睪酮。樣本中的內(nèi)源性睪酮被雙溴雌二醇釋放并與釕標(biāo)記的睪酮衍生物競爭結(jié)合生物素化的抗體。Elecsys睪酮II檢測與同位素稀釋-氣相色譜/質(zhì)譜分析（ID-GC/MS）參考方法的比較結(jié)果顯示其女性測量范圍的檢測性能得到了提升。檢測原理競爭法，總檢測時間：18分鐘第一次孵育：20l樣本和生物素鏈結(jié)的睪酮特異性抗體一起孵育。標(biāo)記抗體的結(jié)合位點被樣本中的分析物占據(jù)（取決于分析物的濃度）。第二次孵育：添加鏈霉素包被的磁珠微粒和釕標(biāo)記的睪酮衍生物，復(fù)合物通過生物素、鏈霉素之間的反應(yīng)結(jié)合到固相載體上。將反應(yīng)液吸入測量池中，通過電磁作用將磁

4、珠吸附在電極表面。未與磁珠結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell被去除。給電極加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，并通過光電倍增器測量發(fā)光強度。Elecsys軟件自動通過定標(biāo)曲線計算得到檢測結(jié)果。a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)三聯(lián)吡啶釕試劑工作溶液M包被鏈霉親和素的磁珠微粒包被鏈霉親和素的磁珠微粒包被鏈霉親和素的磁珠微粒包被鏈霉親和素的磁珠微粒（透明瓶蓋），每瓶6.5ml；包被鏈霉親和素的磁珠微粒包被鏈霉親和素的磁珠微粒包被鏈霉親和素的磁珠微粒包被鏈霉親和素的磁珠微粒，0.72mg/ml；防腐劑。R1 生物素鏈接的抗睪酮抗體（灰蓋），

5、每瓶，10ml；生物素化的抗睪酮單克隆抗體（羊），濃度40ng/Ml；雙溴雌二醇釋放試劑；MES緩沖液 50mmol/L，pH 6.0；防腐劑。R2 Ru(bpy)32+標(biāo)記的抗睪酮抗體（黑蓋），每瓶，9ml，釕標(biāo)記的睪酮衍生物，濃度1. 5ng/mL，MES緩沖液 50mmol/l，Ph6.0；防腐劑。警告和注意事項僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時必需遵循所有試驗室試劑操作的注意事項。所有廢棄物必需按照當(dāng)?shù)胤ㄒ?guī)進行處置。專業(yè)人員可要求獲得安全數(shù)據(jù)報告。避免試劑和樣本（樣本、定標(biāo)液和質(zhì)控品）產(chǎn)生氣泡。試劑處理試劑盒（M,R1和R2）為即用型，不能分開使用。試劑相關(guān)信息可以通過試劑條形碼閱讀獲取

6、。儲存及穩(wěn)定性存放于28。請垂直擺放Elecsys 睪酮試劑盒，確保儀器的自動攪拌器能夠完全混勻磁珠微粒。穩(wěn)定性：未開封試劑，28有效期內(nèi)均可使用開封試劑，2812周放置分析儀上8周樣本的采集和準(zhǔn)備僅以下羅列的樣本類型通過足量的測試并被接受。血清樣本須用標(biāo)準(zhǔn)試管或有分離膠的真空管收集。肝素鋰、EDTA-K2或K3抗凝血漿適用。標(biāo)準(zhǔn)：血清值1ng/mL的回收率在80-120%范圍內(nèi)；血清值1ng/mL的回收值在0.2ng/mL范圍內(nèi)，并且斜率0.9-1.1，截距0.05ng/mL，相關(guān)系數(shù)0.95。穩(wěn)定性：2-8可保存1周；-20可保存6個月，一次凍融。選擇合適的試管進行不同類型樣本的采集，不是

7、所有的試管均可用于檢測。不同廠商的樣本采集系統(tǒng)可能含有不同的物質(zhì)，某些情況下會影響檢測結(jié)果。如果使用原始管進行檢測（樣本前處理系統(tǒng)）時，應(yīng)遵循生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。有沉淀的樣本檢測前必須先作離心處理。避免使用熱滅活的樣本。添加疊氮化合物的樣本和質(zhì)控品均不能使用。檢測前，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品須室溫平衡(20-25)。由于蒸發(fā)因素的影響，樣本、定標(biāo)液及質(zhì)控品在分析儀上的檢測必須2小時內(nèi)完成。提供的物品參閱“試劑工作溶液”17章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號05202230190, 睪酮 II CalSet II, 規(guī)格4 x1 ml貨號11731416122或11731416190, PreciCon

8、trol Universal，規(guī)格2 x3ml，分別為PreciControl Universal 1和2實驗室基礎(chǔ)設(shè)備Elecsys 2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析儀Elecsys 2010和cobas e 411分析儀所需材料：貨號11662988122, ProCell, 6 x 380 mL ,系統(tǒng)緩沖液貨號11662970122, CleanCell, 6 x 380 mL,測量池洗液 貨號11930346122, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液貨號11933159001, SysClean 適配器 貨號

9、11706829001, Elecsys 1010分析杯, 12 x 32反應(yīng)管或者貨號11706802, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反應(yīng)管貨號11706799001, Elecsys 2010 分析吸頭, 30 x 120移液管吸頭MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析儀所需材料：貨號04880340190,ProCell M, 2 x 2 L 系統(tǒng)緩沖液貨號04880293190, CleanCell M, 2 x 2 L測量池洗液 貨號03023141001, PC/CC杯, 12個用于在檢測前預(yù)熱Procell M及Clean

10、cell M。貨號03005712190,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在檢測完畢后或更換試劑時清洗試劑針。貨號12102137001,反應(yīng)杯/吸頭 組合裝84反應(yīng)杯/吸頭 組合裝48盒,廢物袋 貨號03023150001, WasteLiner,廢物袋 貨號03027651001,系統(tǒng)清潔適配器 M所有分析儀需要：貨號11298500316, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系統(tǒng)清洗液 檢測要優(yōu)化檢測性能，請遵照本說明書中有關(guān)分析儀的相關(guān)指導(dǎo)，并參照分析儀操作手冊。MODULAR ANALYTICS E170和cobas e分析儀：必須

11、使用PreClean M。試劑使用前分析儀自動攪拌磁珠微粒，使其處于懸浮狀態(tài)。試劑相關(guān)信息可通過條形碼自動讀取，在特殊情況下，分析儀無法自動讀取條碼信息時，請輸入條碼標(biāo)簽上的15位數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys2010和cobas e分析儀：將冷藏試劑室溫平衡至20C左右，放置分析儀的試劑盤（20C）內(nèi)。避免泡沫產(chǎn)生。分析儀能自動調(diào)節(jié)試劑溫度和開/關(guān)各試劑盒瓶蓋。定標(biāo)溯源性：該檢測方法可溯源至ID-GC/MS(同位素稀釋-氣相色譜/質(zhì)譜分析)參考測量程序8，9每套Elecsys 睪酮II試劑的條碼標(biāo)簽上均含有其批特異的定標(biāo)信息。使用Elecsys 睪酮I

12、I定標(biāo)液可調(diào)整預(yù)設(shè)置的定標(biāo)曲線。定校頻率：新批號試劑必須進行定標(biāo)（新試劑盒在分析儀上放置不能超過24小時）。以下情況建議重新進行定標(biāo)：MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 和cobas e 分析儀:使用同一批號試劑，1月后（28天）7天后（同一試劑盒在分析儀上使用）根據(jù)需要：如失控。質(zhì)控可使用Elecsys PreciControl Universal 1和2進行質(zhì)量控制。其他合適的質(zhì)控品也適用。各濃度質(zhì)控至少每24小時內(nèi)檢測一次，每次更換試劑盒或定標(biāo)后也須進行質(zhì)控。每個實驗室可根據(jù)各自的情況設(shè)定合適的控制限和質(zhì)控周期。質(zhì)控值必須處于規(guī)定的控制限內(nèi)。若失控每

13、個試驗室必須采取相應(yīng)的糾正措施。遵循各地政府或?qū)t關(guān)于質(zhì)量控制的要求。計算儀器會自動計算每個樣本中的分析物濃度，單位可選擇ng/mL、ng/dL或nmol/L。轉(zhuǎn)換因子：ng/mL3.47nmol/L ng/mL100ng/dLnmol/L0.288ng/mL干擾因素檢測結(jié)果不受黃疸（膽紅素513mol/L或30 mg/dL）, 溶血（血紅蛋白0.372 mmol/L或 0.6 g/dL）, 脂血(脂肪乳劑1000mg/dL)和生物素60 ng/mL或 5mg/天），必須在末次生物素治療8小時后采集樣本。檢測結(jié)果不受類風(fēng)濕因子影響（RF1000 IU/ml）。體外對18種常用藥物進行試驗未發(fā)現(xiàn)

14、會影響檢測結(jié)果。對2種特殊藥物進行額外的試驗發(fā)現(xiàn)諾龍（國際通用命名，WHO）能產(chǎn)生明顯的干擾。使用該藥物進行治療的患者不建議進行睪酮檢測。個別病例發(fā)現(xiàn)終末期的腎衰女性患者出現(xiàn)睪酮水平的增加。少數(shù)病例中高濃度的分析物特異性抗體、生物素抗體和釕抗體會影響檢測結(jié)果。通過適宜性的實驗設(shè)計可將影響因素降到最低。作為診斷指標(biāo)，必須結(jié)合患者病史，臨床檢查和其他臨床資料來綜合評估檢測結(jié)果。女性出現(xiàn)異常升高的睪酮值必須使用萃取法或LC-MS/MS進行確定。檢測范圍0.025-15.0ng/mL（或0.087-52.0 nmol/L）（通過最低檢出限和廠商定標(biāo)曲線的最高值確定）。低于檢出限的值報告0.025 ng

15、/mL或15.0 ng/mL 或52.0 nmol/L。稀釋由于檢測范圍較寬通常情況下無須進行稀釋。期望值使用Elecsys 睪酮II 檢測214名表面健康男性和190名表面健康女性（均未服用過避孕和處方類藥物）的樣本獲得下表中的數(shù)據(jù)：214名表面健康男性的睪酮值分布如下圖（實線表示50位點；虛線表示2.5和97.5位點）：190名表面健康女性的睪酮值分布如下圖（實線表示50位點；虛線表示2.5和97.5位點）：每個實驗室必須調(diào)查各自患者群體的參考范圍變異性，必要時根據(jù)具體情況制訂自己的參考范圍。特殊的性能指標(biāo)試劑在分析儀上的性能試驗數(shù)據(jù)如下。各實驗室由于具體情況不同，所得出的數(shù)據(jù)可能會稍有差

16、異。精密度應(yīng)用Elecsys試劑盒、人混合血清樣本和質(zhì)控品驗證重復(fù)性，按照CLSI的EP5-A2執(zhí)行：每天2次重復(fù)檢測，共21天 (n=84)。數(shù)據(jù)如下：分析靈敏度空白檢出限（LoB）,最低檢出限（LoD）和定量檢出限（LoQ）空白檢出限：0.012ng/mL或0.042 nmol/L最低檢出限：0.025ng/mL或0.087 nmol/L定量檢出限：0.120ng/mL或0.416 nmol/L空白檢出限和最低檢出限參照CLSI的EP17-A執(zhí)行。定量檢出限等于功能靈敏度的結(jié)果?？瞻讬z出限取n60的不含分析物樣本的95位點結(jié)果。不含分析物樣本的檢測結(jié)果低于空白檢出限的概率為95。最低檢出限

17、是基于空白檢出限和最低分析物濃度的標(biāo)準(zhǔn)差。最低檢出限指能夠檢測出的最低分析物濃度（值高于空白檢出限的概率為95）。定量檢出限（功能靈敏度）指最低分析物濃度的樣本批間重度測定CV值20所對應(yīng)的濃度值。使用低濃度的睪酮樣本。方法學(xué)比較a)使用39份樣本比較Elecsys 睪酮II 檢測（y）和ID-GC/MS 檢測（x），相關(guān)性數(shù)據(jù)如下：標(biāo)本數(shù)n=39：Passing/Bablok18 線性回歸y = 1.02x 0.027 y = 1.01x -0.003r = 0.928 r = 0.999樣品比較的濃度范圍約為0.17317.3ng/mL （0.660.0 nmol/L） 女性樣本（n=20

18、）：Passing/Bablok18 線性回歸y = 0.959x 0.005 y = 0.969x +0.007r = 0.780 r = 0.992樣品比較的濃度范圍約為0.1732.29ng/mL （0.67.95 nmol/L） b)使用臨床標(biāo)本比較Elecsys 睪酮II 檢測（y）和Elecsys 睪酮檢測（x），相關(guān)性數(shù)據(jù)如下：樣本數(shù):男性239例，女性149例外部多中心研究數(shù)據(jù)（研究號CIM000669）男性樣本（n=239）：Passing/Bablok18 線性回歸y = 0.977x + 0.032 y = 0.957x +0.155r = 0.870 r = 0.985

19、樣品比較的濃度范圍約為0.06314.0ng/mL （0.21948.5 nmol/L） 女性樣本（n=149）：Passing/Bablok18 線性回歸y = 0.715x + 0.023 y = 0.957x -0.061r = 0.697 r = 0.972樣品比較的濃度范圍約為0.0239.26ng/mL （0.0832.1nmol/L），有兩例高值標(biāo)本分別為4.16ng/mL（14.44nmol/L）和 9.26ng/mL（32.1nmol/L）。分析特異性所使用的單克隆抗體與下列物質(zhì)的交叉反應(yīng)結(jié)果如下表：參考文獻1. Nieschlag E, Behre HM. Testoste

20、ron Action, Deficiency, Substitution. Cambridge University2. Runnebaum B, Rabe T. Gynkologische Endokrinologie und Fortpflanzungsmedizin Springer Verlag 1994; Band 1:36-38,70,116 Band 1:39-40, 520-521, 593-594, 422-423. ISBN 3-540-57345-3, ISBN 3-540-57347-x.3. Wheeler MJ. The determination of bio-a

21、vailable testosterone. Ann Clin Biochem 1995;32:345-357. 4. Kane J, Middle J, Cawood M. Measurement of serum testosterone in women; what should we do? Ann Clin Biochem 2007;44:5-15.5. Rosner W, Auchus RJ, Azzis R, Sluss PM, Raff H. Position Statement: Utility, Limitations, and Pitfalls in Measuring

22、Testosterone: An Endocrine Society Positions Statement. J Clin Endocrinol Metab 2007;92(2):404-413.6. Arlt W. Androgen Therapy in Women. Eur J Endocrinol 2006;154(1):1-11. 7. Wu AHB. Tietz Clinical Guide To Laboratory Tests. 4th Edition, WB Saunders Co, 2006:1010 pp.8. Thienpont LM, De Brabandere VI, Stckl D, De Leenheer AP. Use of cyclodextrins for prepurification of progesterone and testosterone from human serum prior t