食品微生物學檢驗GB-4789-系列知識點匯總

食品微生物學檢驗GB4789系列知識點匯總GB4789.1-2023食品衛(wèi)生學檢驗總那么一、2023版總那么變更內(nèi)容1.刪除了標準中的英文名稱、起草單位變更為中華人民共和國國家衛(wèi)生和方案生育委員會國家食品藥品監(jiān)督管理總局。2.刪除了標準性引用文件。3.修改了實驗室根本要求：應(yīng)具有相應(yīng)的微生物專業(yè)教育或培訓經(jīng)歷〔如生物學、植物學、醫(yī)學、食品科學與工程、食品質(zhì)量與平安等與微生物有關(guān)的相關(guān)專業(yè)〕，具備相應(yīng)的資質(zhì)〔應(yīng)有崗位上崗證、生物平安上崗證和壓力容器上崗證〕，能夠理解并正確實施檢驗。=1\*GB3①人員修改為檢驗人員應(yīng)掌握實驗室生物平安操作和消毒知識〔相關(guān)標準及培訓，如GB19489-2023實驗室生物平安通用要求、消毒技術(shù)標準〔2002〕〕。應(yīng)在檢驗過程中保持個人整潔與衛(wèi)生，防止人為污染樣品。應(yīng)在檢驗過程中遵守相關(guān)平安措施的規(guī)定，確保自身平安。有顏色視覺障礙的人員不能從事涉及辨色的實驗〔即無顏色視覺障礙〕。=2\*GB3②環(huán)境與設(shè)施--突出溫度、濕度和潔凈度。生物危害程度應(yīng)與實驗室生物防護水平相適應(yīng):第一類：引起人和動物非常嚴重疾病，國家未發(fā)現(xiàn)或已宣布消滅的微生物，如天花病毒。第二類：引起任何動物比擬嚴重疾病，在人和人、人和動物之間傳播如霍亂弧菌。病原微生物分類第三類：引起疾病，但對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害如沙門氏菌、單增李斯特氏菌。第四類：通常不會引起人或動物疾病的微生物。一級〔BSL-1〕：操作第四類病原微生物〔屬于正壓，適用范圍如大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌等。重要設(shè)備是超凈工作臺，它可以保護樣品不受污染?！硨嶒炇疑锲桨布墑e二級〔BSL-2〕：操作第三類病原微生物〔屬于負壓，適用范圍如沙門氏菌、等致病菌。重要設(shè)備是=2\*ROMANII級生物平安柜。〕三級〔BSL-3〕：操作第二類病原微生物四級〔BSL-4〕：操作第一類病原微生物消毒：是殺死微生物的物理或化學手段，但不一定殺死其中的孢子。滅菌：是殺死和去除所有微生物及其中孢子的過程。紫外線消毒〔臭氧〕環(huán)境：潔凈室消毒空間熏蒸〔如空間被霉菌污染可用甲醛熏蒸法消毒〕消毒劑外表消毒微生物實驗濕熱滅菌或常用室消毒滅菌方式平皿工器具滅菌和設(shè)備消毒高壓滅菌干熱滅菌〔180℃1h或170℃2h〕濕熱滅菌或高壓滅菌培養(yǎng)基和試劑滅菌煮沸滅菌過濾除菌紫外線消毒法：紫外燈管放射一定波長，破壞細菌或病毒的DNA和RNA，使他們喪失生存能力和繁殖能力，從而到達滅菌目的。紫外線的特點是對芽孢和營養(yǎng)細胞都能起作用，但細菌芽孢和霉菌芽孢對其抵抗力大，且紫外線穿透力極低，所以只能用于外表滅菌，對固體物質(zhì)滅菌不徹底。微生物實驗室消毒處理方法：最正確殺菌波長：260nm，需定期更換。有效殺菌距離物品：25-60cm空氣：＜2m照射時間：燈亮5-7min后開始計算，＞30min〔無人條件下翻開〕適用范圍：室內(nèi)空氣、物體外表。考前須知：人員需在關(guān)閉紫外燈至少30min前方可入內(nèi)作業(yè)。=3\*GB3③檢驗用品--增加附錄A和一次性用品。附錄A微生物實驗室常規(guī)檢驗用品和設(shè)備高壓鍋滅菌效果評價方法化學指示劑：即化學指示卡/膠帶，使用方便，高壓后可立即得知檢測結(jié)果。生物指示劑：準確性高，高壓后需要培養(yǎng)后才得知檢測結(jié)果。=4\*GB3④培養(yǎng)基和試劑質(zhì)控-GB4789.28-2023。=5\*GB3⑤質(zhì)控菌株-新增實驗室別離、鑒定的野生菌株。4.修改了樣品采集=1\*GB3①采樣原那么：樣品的采集應(yīng)遵循隨機性、代表性的原那么；采樣過程遵循無菌操作程序，防止一切可能的外來污染。=2\*GB3②采樣方案：根據(jù)檢驗?zāi)康?、食品特點、批量、檢驗方法、微生物的威海程度等確定采樣方案。采樣方案分為二級好三級采樣方案。二級采樣方案設(shè)有n、c和m值，三級采樣方案設(shè)有n、c、m和M值。〔其中n表示桶一批次產(chǎn)品應(yīng)采集的樣品件數(shù)；c表示最大可允許超出m值得樣品數(shù)；m表示微生物指標可接受水平限量值(三級采樣方案)或最高平安限量值(二級采樣方案)；M表示微生物指標的最高平安限量值?！晨记绊氈喊凑斩壊蓸臃桨冈O(shè)定的指標，在n個樣品中，允許有≤c個樣品其相應(yīng)微生物指標檢驗值大于m值。按照三級采樣方案設(shè)定的指標，在n個樣品中，允許全部樣品中相應(yīng)微生物指標檢驗值≤m值；允許有≤c個樣品其相應(yīng)微生物指標檢驗值在m值和M值之間；不允許有樣品相應(yīng)微生物指標檢驗值大于M值。5.修改了檢驗—“樣品檢驗〞6.修改了生物平安和質(zhì)量控制〔優(yōu)化〕7.修改了記錄與報告檢驗過程中應(yīng)即時、客觀地記錄觀察到的現(xiàn)象、結(jié)果和數(shù)據(jù)等信息。實驗室應(yīng)按照檢驗方法中規(guī)定的要求，準確、客觀地報告檢驗結(jié)果。8.修改了檢驗后樣品的處理檢驗結(jié)果報告后，被檢樣品方能處理；檢出致病菌的樣品要經(jīng)過無害化處理；檢驗結(jié)果報告后，剩余樣品和同批產(chǎn)品不進行微生物工程的復(fù)檢。二、2023版總那么具體要求各種微生物危害分類采樣分級危害程度微生物學指標三級食品保質(zhì)期菌落總數(shù)、霉菌和酵母間接指示菌大腸菌群、糞大腸菌群、大腸埃希氏菌、腸桿菌科、金黃色葡萄球菌中等程度局限傳播葡萄球菌腸毒素、副溶血性弧菌、蠟樣芽孢桿菌、產(chǎn)氣夾饃梭菌二級中等程度廣泛傳播沙門氏菌、諾如病毒、腸出血大腸埃希氏菌嚴重程度O1型霍亂、肉毒梭菌單核細胞增生李斯特氏菌嬰兒食品沙門氏菌赫爾阪崎腸桿菌在中等以上甚至嚴重危害的情況下，使用二級采樣方案。對健康危害低的，那么建議使用三級采樣方案。分級抽樣方案：同批食品總微生物數(shù)量一般是正態(tài)分布，說明同批次具有均一性。但對于單一檢樣來說，微生物分布或數(shù)量一般不會均勻〔液態(tài)食品除外〕。這樣的不均一型造成檢驗結(jié)果判讀困難。N越大越準確，但是應(yīng)考慮適度嚴格性的要求。三、2023版總那么相關(guān)質(zhì)量控制檢驗人員的質(zhì)量控制〔實施考核、監(jiān)督方式〕：1.問答、試題2.盲樣測試3.加標測試4.實驗室內(nèi)部人員比照r≤0.25參考BSENISO4833-2003，其中對結(jié)果重復(fù)性的規(guī)定為：用相同的方法，同一試驗材料，在相同的條件〔同一操作者、相同的設(shè)備、同一實驗室和短暫的時間間隔〕下，所測得的兩個獨立測試結(jié)果只差的絕對值不能大于重復(fù)性極限〔r=0.25〕。舉例：第一次測試結(jié)果為105=100000CFU/g(ml)第二次測試結(jié)果應(yīng)在第一次結(jié)果的±0.25log10單位范圍內(nèi)即在log104.75-og105.25范圍內(nèi)即第二次測試結(jié)果在56000-178000CFU/g(ml)范圍內(nèi)視為無差異。5.實驗室間比照R≤0.45參考BSENISO4833-2003，其中對結(jié)果重復(fù)性的規(guī)定為：用相同的方法，同一試驗材料，在不同的條件〔不同的操作者、不同的設(shè)備、不同的實驗、不同或相同的時間〕下，所得的兩個測試結(jié)果只差絕對值不能大于再現(xiàn)性極限，即R=0.45。舉例：第一次測試結(jié)果為105=100000CFU/g(ml)第二次測試結(jié)果應(yīng)在第一次結(jié)果的±0.45log10單位范圍內(nèi)即在log104.55-og105.45范圍內(nèi)即第二次測試結(jié)果在36000-280000CFU/g(ml)范圍內(nèi)視為無差異。GB4789.2-2023食品微生物學檢驗菌落總數(shù)測定一、菌落總數(shù)的定義食品檢樣經(jīng)過處理，在一定條件下〔如培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間等〕培養(yǎng)后，所得每g(ml)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)。在GB4789.2-2023的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在平板計數(shù)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫需氧菌或兼性厭氧菌的菌落總數(shù)。注意：有的平板計數(shù)瓊脂上長一片霉菌，那么此次試驗結(jié)果作廢，需重新檢測〔霉菌屬于真菌類，它產(chǎn)生的霉菌毒素一直普通菌的生長，所以假設(shè)有一大片霉菌生長需重新檢測，并清理實驗室?！扯⒕淇倲?shù)測定的衛(wèi)生學意義檢測食品本身的新鮮程度和加工、貯存運輸過程中是否受到污染。必須配合大腸菌群的檢驗和其他病原菌工程的檢驗，才能作出比擬全面準確的判定。三、2023版國家標準的主要變動=1\*GB3①拍擊式均質(zhì)：方便，只需購置一次性無菌均質(zhì)袋；快捷，1-2min內(nèi)完成均質(zhì)；科學，均質(zhì)過程中不會產(chǎn)生高溫；均質(zhì)均勻，可使樣品菌完全稀釋出來；此方法不適合均質(zhì)堅硬樣品，如魚骨類樣品。=2\*GB3②培養(yǎng)基---平板計數(shù)瓊脂營養(yǎng)瓊脂NA營養(yǎng)瓊脂NA2003版蛋白胨10.0g牛肉膏3.0g氯化鈉5.0g瓊脂15.0g蒸餾水1000ml平板計數(shù)瓊脂PCA2023版和2023版胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g瓊脂15.0g蒸餾水1000ml培養(yǎng)基改變依據(jù)：國外食品微生物檢驗的權(quán)威方法〔ISO、FDA、AOCAC〕均采用PCA，它的營養(yǎng)更優(yōu)化。=3\*GB3③計數(shù)和報告-----平板和菌落選取原那么●選取每個平皿菌落數(shù)在30-300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板進行計數(shù)。每個稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。●有較大片狀生長菌落的平板不易采用?！袢缙瑺罹淙狈ζ桨逡话?，而另一半平板菌落分布均勻，可計分布均勻的一半，再乘以2。●如平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界限的鏈狀生長時，那么每條單鏈作為一個菌落計算。=4\*GB3④計數(shù)和報告-----菌落總數(shù)計算方法●如果只有一個稀釋度平板的菌落數(shù)在30-300CFU適宜范圍內(nèi)，那么計算該稀釋度兩個平板菌落平均數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)，作為每g〔ml〕樣品中菌落總數(shù)結(jié)果?！窦僭O(shè)有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)均在30-300CFU適宜范圍內(nèi)，按公式N=∑C/(n1+0.1n2)d計算。N:樣品中菌落數(shù)，∑C：含適宜范圍CFU的平板菌落數(shù)之和，n1：第一稀釋度〔低稀釋度〕平板個數(shù)，n2：第二稀釋度〔高稀釋度〕，d：稀釋因子〔第一稀釋度〕?！袼衅桨寰鋽?shù)均＞300，計最高稀釋度平板的平均菌落數(shù)?！袼衅桨寰鋽?shù)均＜30，計最低稀釋度平板的平均菌落數(shù)?！駱悠吩汉退邢♂尪绕桨寰鶡o菌生長，以＜1乘以最低稀釋倍數(shù)計算?！袼邢♂尪绕桨寰鋽?shù)均不在20-300之間，有些＜30，有些＞300，那么最接近30-300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。=5\*GB3⑤計數(shù)和報告-----結(jié)果報告〔采取四舍五入法〕編號菌落總數(shù)報告方式單位195.596CFU/g或CFU/ml〔單位需大寫CFU〕216801700或1.7X1033均為蔓延菌落無法計數(shù)報告“菌落蔓延〞4空白對照有菌結(jié)果無效四、2023版國家標準的檢驗流程檢樣25g檢樣25g〔ml〕樣品+225ml稀釋液，均質(zhì)1010倍系列稀釋選擇2-3選擇2-3個適宜稀釋度樣品均液，各取1ml分別參加無菌培養(yǎng)皿中每個培養(yǎng)皿中參加每個培養(yǎng)皿中參加15-20ml平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基，混勻。培養(yǎng)培養(yǎng)計數(shù)各平板菌落數(shù)計數(shù)各平板菌落數(shù)計算菌落總數(shù)計算菌落總數(shù)報告報告五、其他考前須知1.如樣品〔干調(diào)、面粉、脫水蔬菜〕中可能含有在瓊脂外表蔓延生長的菌落，可在凝固后的瓊脂外表再覆蓋一層〔4ml〕培養(yǎng)基。這樣可以有效防止菌落蔓延的現(xiàn)象出現(xiàn)。2.稀釋液選擇磷酸鹽緩沖液：適用于偏酸或偏堿性樣品的稀釋。生理鹽水：適用于常規(guī)樣品的稀釋。3.傾注平板計數(shù)瓊脂在15-20ml，一般要求到達18ml以上，即瓊脂高度＞3mm。假設(shè)傾注的培養(yǎng)基太薄，菌需要的營養(yǎng)成分不夠，使菌生長的不完好，不便于觀察結(jié)果。4.樣品與培養(yǎng)基一定要混合均勻，建議混勻方法：上下?lián)u晃-左右搖晃-順時針搖晃-逆時針搖晃。假設(shè)混合不均勻，有的菌落會長到平板邊緣，不便于觀察，影響最終結(jié)果。5.培養(yǎng)基水浴溫度和傾注溫度在46±1℃。培養(yǎng)基的冷卻方法：要在恒溫水浴鍋中通過水來冷卻；不可直接放到試驗臺或地面上冷卻，因這樣培養(yǎng)基底部容易先凝固，傾注培養(yǎng)基時，有凝固塊到處，導(dǎo)致培養(yǎng)基有結(jié)塊，即不美觀，有影響觀察結(jié)果。6.培養(yǎng)條件：一般樣品36±1℃培養(yǎng)48±2h，水產(chǎn)品〔指原生態(tài)、未經(jīng)過加工的水產(chǎn)品原料〕，它的培養(yǎng)溫度要接近原生態(tài)的溫度，即30±1℃，培養(yǎng)72±3h。7.樣品稀釋液有時會帶有細碎的食物顆粒〔如奶粉、堅果〕，為防止這些顆粒與菌落發(fā)生混淆，可將樣品稀釋液與PCA混合，單做培養(yǎng)，置于4℃冰箱放置同樣時間，以便在計數(shù)時作為對照。〔營養(yǎng)瓊脂可加紅四氮唑來區(qū)別菌和顆粒，一般不建議使用〕8.必須做空白對照：檢測培養(yǎng)基、平皿、稀釋液的無菌程度。同時，應(yīng)在工作臺內(nèi)翻開一塊空白PCA〔其暴露時間應(yīng)與檢樣時間相當〕，以了解樣品在檢驗過程中有無受到來自環(huán)境的污染。GB4789.3-2023食品微生物學檢驗大腸菌群計數(shù)一、大腸菌群定義1.定義：在一定培養(yǎng)條件下能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。2.該菌主要來源于人畜糞便，作為糞便污染指標評價食品的衛(wèi)生狀況，推斷食品中腸道致病菌污染的可能。即大腸菌群為衛(wèi)生學指標。3.這些細菌在生化及血清學方面并非完全一致。根據(jù)進一步的生化鑒定試驗，可將大腸菌群細分為大腸埃希氏菌〔俗稱大腸桿菌〕、弗氏檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和腸桿菌等。二、2023年國標主要修訂內(nèi)容1.標準替代：GB4789.3-2023；GB/T4789.32-2002；SN/T0169-20232.增加檢驗原理MPN法：是統(tǒng)計學和微生物學結(jié)合的一種定量檢測法，待測樣品經(jīng)系列稀釋并培養(yǎng)后，根據(jù)其未生長的最低稀釋度與生長的最高稀釋度，應(yīng)用統(tǒng)計學概率論推算出待測樣品中大腸菌群的最大可能數(shù)。平板計數(shù)法：大腸菌群在固體培養(yǎng)基中發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，在指示劑的作用下形成可計數(shù)的紅色或紫色，帶有或不帶有沉淀環(huán)的菌落。3.修改典型菌落描述：如菌落直徑較典型菌落小，為可疑菌落，也要挑取進行驗證。4.修改第二法平板菌落數(shù)的選擇：最低稀釋度平板低于15CFU的記錄具體菌落數(shù)。5.修改第二法驗證試驗：假設(shè)少于10個菌落的挑取全部典型和可疑菌落進行驗證。假設(shè)大于10個菌落，那么挑取10個典型和可疑菌落進行驗證。三、大腸菌群檢測流程●MPN法PH應(yīng)在之間，必要時可用PH應(yīng)在之間，必要時可用1mol/L的NAOH或HCL調(diào)節(jié)檢樣25g〔ml〕+225ml稀釋液，均質(zhì)10倍梯度稀釋10倍梯度稀釋選擇適宜三個連續(xù)稀釋度的稀釋液，接種到選擇適宜三個連續(xù)稀釋度的稀釋液，接種到LST肉湯中24h為預(yù)判假設(shè)產(chǎn)氣進行驗證；假設(shè)未產(chǎn)氣繼續(xù)培養(yǎng)至24h為預(yù)判假設(shè)產(chǎn)氣進行驗證；假設(shè)未產(chǎn)氣繼續(xù)培養(yǎng)至48h查看結(jié)果。BGLB肉湯產(chǎn)氣不產(chǎn)氣BGLB肉湯產(chǎn)氣不產(chǎn)氣36±1℃48±2h產(chǎn)氣不產(chǎn)氣產(chǎn)氣不產(chǎn)氣大腸菌群陽性大腸菌群陰性大腸菌群陽性大腸菌群陰性查MPN表，報告結(jié)果查MPN表，報告結(jié)果1.初發(fā)酵試驗：A、月桂基硫酸鹽胰蛋白胨LST〔成分：胰蛋白胨或胰酪胨、氯化鈉、乳糖、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、月桂基硫酸鈉〕作用：=1\*GB3①胰酪胨在培養(yǎng)基中作為根底營養(yǎng)物質(zhì)提供細菌生長所需的氮源、維生素、氨基酸等生長因子。=2\*GB3②乳糖作為可發(fā)酵的碳源。=3\*GB3③NaCl維持體系滲透壓平衡。=4\*GB3④磷酸鹽為菌體生長提供一個相對穩(wěn)定的酸堿緩沖體系。=5\*GB3⑤月桂基硫酸鈉抑制非大腸菌群類細菌的生長。大腸菌群類細菌利用培養(yǎng)基中的乳糖產(chǎn)氣而與其它不產(chǎn)氣的細菌相區(qū)別。B、接種方式：1ml稀釋液+10mlLST；10ml稀釋液+10ml雙料LST。C、培養(yǎng)條件：36℃，培養(yǎng)24-48±2h。D、結(jié)果觀察：小導(dǎo)管是否產(chǎn)氣。2.復(fù)發(fā)酵試驗：A、煌綠乳糖膽鹽肉湯BGLB〔成分：蛋白胨、乳糖、牛膽粉溶液、0.1%煌綠水溶液〕的作用：=1\*GB3①蛋白胨在培養(yǎng)基中作為根底營養(yǎng)物質(zhì)提供細菌生長所需的碳源、氮源。=2\*GB3②牛膽鹽和煌綠抑制革蘭氏陽性菌及非大腸菌群的革蘭氏陰性菌的生長。=3\*GB3③乳糖作為可發(fā)酵的碳水化合物。B、接種方式：1環(huán)產(chǎn)氣的LST+10mlBGLG。C、培養(yǎng)條件：36℃，48±2h。D、結(jié)果觀察：小導(dǎo)管是否產(chǎn)氣。3.結(jié)果報告表大腸菌群最可能數(shù)MPN檢索表陽性管數(shù)MPN95%可信限陽性管數(shù)MPN95%可信限0.100.010.001下限上限0.100.010.001下限上限000<0.3-9.5220214.5420013.00.159.6221288.7940103.00.1511222358.7940116.11.218230298.7940206.21.218231368.7940309.43.638300234.6941003.60.1718301388.71101017.21.3183026417180102113.6383104391801107.41.3203117517200111113.63831212037420120113.64231316040420121154.5423209318420130164.542321150374202009.21.43832221040430201153.642323290901000202204.542330240421000210153.742331460902000211204.54233211001804100212278.794333>1100420-注1：本表采用3個稀釋度0.1g〔ml〕、0.01g〔ml〕、0.001g〔ml〕，每個稀釋度接種3管。注2：表內(nèi)所列檢樣量如改用1g〔ml〕、0.1g〔ml〕、0.01g〔ml〕時，表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低10倍；如改用0.01g〔ml〕、0.001g〔ml〕、0.0001g〔ml〕時，那么表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)增高10倍，其余類推。根據(jù)陽性管數(shù)的出現(xiàn)率，用概率論來推算樣品中含菌量的最近似數(shù)值。MPN檢索表只給了三個稀釋度，如改用其他稀釋度，那么表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低或增加10倍。檢樣25g〔檢樣25g〔ml〕+225ml稀釋液，均質(zhì)需同時用生理鹽水做空白對照10倍梯度稀釋需同時用生理鹽水做空白對照10倍梯度稀釋選擇2-3選擇2-3個適宜連續(xù)稀釋度的樣品勻液，接種VRBA平板上計數(shù)典型和可疑菌落36±1℃18-24h計數(shù)典型和可疑菌落BGLB肉湯BGLB肉湯報告結(jié)果36±1℃24-48h報告結(jié)果1.培養(yǎng)基：結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂〔VRBA〕=1\*GB3①原理：乳糖作為可發(fā)酵碳源；膽鹽和結(jié)晶紫抑制革蘭氏陽性菌生長；中性紅為酸堿指示劑。=2\*GB3②大腸菌群特點：紫紅色菌落，周圍紅色膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0.5mm或更大。=3\*GB3③培養(yǎng)基傾注方法：每個平皿傾注15-20ml，凝固后再加3-4ml覆蓋，防止菌落蔓延生長，影響結(jié)果。2.平板菌落數(shù)的選擇=1\*GB3①選取菌落數(shù)在15-150CFU之間的平板計數(shù)。=2\*GB3②分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑菌落〔如菌落直徑較典型菌落小〕。=3\*GB3③最低稀釋度平板低于15CFU的記錄具體菌落數(shù)。3.驗證試驗=1\*GB3①從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，少于10個菌落的挑取全部典型和可疑菌落。=2\*GB3②移種于BGLB肉湯管，36±1℃培養(yǎng)24-48h，觀察產(chǎn)氣=3\*GB3③凡BGLB肉湯管產(chǎn)氣，即可報告為大腸菌群陽性。4.平板計數(shù)的報告BGLB陽性管數(shù)比例乘以計數(shù)的平板菌落數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)，即為每g〔ml〕樣品中大腸菌群數(shù)。例如：樣品稀釋度典型和可疑菌落數(shù)選取驗證菌落BGLB陽性管結(jié)果CFU/g(ml)10-4100106100*(6/10)*104=6.0*10510-1000<10考前須知：=1\*GB3①樣品PH調(diào)節(jié)方法：添加NaOH調(diào)節(jié)=2\*GB3②在36±1℃培養(yǎng)24-48h的意義：24h為預(yù)判，假設(shè)預(yù)判未產(chǎn)氣繼續(xù)培養(yǎng)到48h最終確定結(jié)果。=3\*GB3③假設(shè)典型菌落和可疑菌落超過10個，應(yīng)挑取10個典型和可疑菌落接種驗證；假設(shè)少于10個菌落的那么挑取全部典型和可疑菌落接種進行驗證。=4\*GB3④大腸菌群類細菌可發(fā)酵乳糖產(chǎn)氣，因此主要看小導(dǎo)管產(chǎn)氣情況來確定大腸菌群。假設(shè)BGLB肉湯變成黃綠色，那么產(chǎn)酸導(dǎo)致。=4\*GB3④在乳糖發(fā)酵試驗中，經(jīng)常可以看到在小導(dǎo)管內(nèi)有極微小的氣泡，有時可以看到沿管壁有緩緩上浮的小氣泡。如果對產(chǎn)氣不明顯的乳糖發(fā)酵現(xiàn)象有疑問，可以輕輕拍打試管，如有氣泡沿管壁上浮，即可能有氣體產(chǎn)生。GB4789.4-2023食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗一、沙門氏菌簡介1.細菌學分類：腸桿菌科沙門氏菌屬下設(shè)6個亞屬：=1\*ROMANI、=2\*ROMANII、=4\*ROMANIV、=5\*ROMANV、=6\*ROMANVI及=3\*ROMANIII〔原亞利桑那菌屬〕。2.致病性：胃腸炎、傷寒、敗血癥〔傷寒氏沙門易患敗血癥〕等人類疾病，嚴重時能導(dǎo)致死亡。3.種類：種類繁多，抗原結(jié)果復(fù)雜，在?ANTIGENICFORMULAEOFTHESALMONELLASEROVARS?(20079thedition)中已公布了2579個血清型。4.感染途徑：食物，主要是生肉和生蛋。5.生物學特征：=1\*GB3①形態(tài)特征：革蘭氏陰性、短桿菌，無芽孢，一般無莢膜；除雞沙門氏菌和雛沙門氏菌外都有周身鞭毛，運動力特強。=2\*GB3②需氧或兼性厭氧，10-42℃都可以生長，最適生長溫度為37℃，最適PH為。綜上所述：沙門氏