乳腺癌動物模型的研究現(xiàn)狀與評價

乳腺癌動物模型的研究現(xiàn)狀與評價【摘要】乳腺癌動物模型的建立方法主要可分為自發(fā)性、誘發(fā)性和移植性3種，每種方法都有其各自的特點和應(yīng)用條件。【關(guān)鍵詞】乳腺癌;動物模型;現(xiàn)狀與評價;綜述乳腺癌是一種嚴(yán)重威脅女性安康和生命平安的惡性腫瘤。乳腺癌在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢［1］，乳腺癌動物模型的制作對進一步研究乳腺癌的病因、發(fā)病機理，從而對其進展有效預(yù)防、進步治療效果將起到非常關(guān)鍵的作用。在這方面，國內(nèi)外有關(guān)學(xué)者已做了大量工作，現(xiàn)將其研究狀況作一綜述。1實驗動物的選擇建立乳腺癌模型時對動物一般要求其癌誘發(fā)率高，飼養(yǎng)方便。常選用的動物主要有大鼠、小鼠、裸鼠、貓、犬及兔。其中，大鼠、小鼠由于本錢低，易飼養(yǎng)，且誘癌周期相對較短，故多用于大批量的實驗研究。但由于不同科系、性別乃至不同鼠齡的大鼠均會直接影響到誘癌率和造模時間，因此，誘癌率較高的istar系雌性大鼠常被選用。裸鼠因先天性缺乏胸腺，T細胞免疫功能接近于零，所以人體腫瘤異種移植時無排擠反響，移植后的人體腫瘤保持其原有的組織形態(tài)，免疫學(xué)特點以及特有的染色體組型和對抗腫瘤藥的原有敏感性，且對培養(yǎng)條件等要求比SID鼠低，無毛，易于動態(tài)觀察腫瘤的生長狀態(tài)，同時浸潤與轉(zhuǎn)移是人類惡性腫瘤的兩個重要特征，在裸鼠上可以通過接種方式、部位的選擇，到達較滿意的轉(zhuǎn)移效果，因此，目前多項選擇擇其進展人乳腺癌細胞異位移植。2造模方法2.1自發(fā)性乳腺癌動物模型實驗動物各群中自然發(fā)生或通過遺傳育種而保存下來的一類腫瘤稱為自發(fā)性腫瘤。3H小鼠最常用于自發(fā)產(chǎn)生乳腺癌的動物，一般生后6個月可100%產(chǎn)生乳腺癌。自發(fā)性腫瘤模型有一定的優(yōu)點，首先從腫瘤發(fā)生來看，與人類腫瘤相比更相似，實驗結(jié)果更易于外推于人;其次，對影響腫瘤發(fā)生、開展的原因更有可能被發(fā)現(xiàn)。但其腫瘤發(fā)生、開展的時間參差不齊，使實驗時間延長，實驗所需動物數(shù)量多，消耗大。2.2誘發(fā)性乳腺癌動物模型使用化學(xué)物質(zhì)、物理、生物因素等可在實驗動物中誘發(fā)乳腺癌的發(fā)生［2］，目前較多用的是化學(xué)誘導(dǎo)方式。用致癌物質(zhì)二甲基苯蒽〔DBA〕和甲基膽蒽可誘發(fā)乳腺癌。以灌胃［3］、部分涂抹［4］或皮下注射來作用于istar雌性大鼠。胃管灌注低劑量DBA，持續(xù)3個月，可建立乳腺癌癌前病變動物模型［5］。化學(xué)誘導(dǎo)乳腺癌發(fā)生的動物模型常用于乳腺癌的病因?qū)W研究及預(yù)防性研究［6］。實驗性腫瘤誘發(fā)研究的開展，能使人們得以有方案、有步驟地觀察癌變的整個過程［7］。但由于化學(xué)誘導(dǎo)乳腺癌發(fā)生的動物模型建立的過程長，個體差異很大，而且腫瘤細胞的形態(tài)特征差異也很大，所以較少用于腫瘤治療方面的研究。2.3移植性乳腺癌動物模型2.3.1免疫缺陷鼠人乳腺癌移植模型甄林林等［8］采用F-7細胞經(jīng)胰酶消化后，用Hank液清洗2次，再用1%錐藍染色，在細胞記數(shù)板上作細胞計數(shù)，并調(diào)節(jié)使活細胞濃度為1×107.l，于6周齡雌性裸鼠右側(cè)胸壁乳墊下接種0.1l.只。裸鼠飼養(yǎng)于層流罩中，接種10d，在接種部位乳墊處出現(xiàn)腫瘤結(jié)節(jié)，腫瘤移植成功率為95%，腫瘤可部分保持人乳腺癌生物學(xué)特性，為研究人乳腺癌提供了重要工具。移植模型相對價廉，可利用ER陽性的癌細胞株，且成瘤期相對短，免疫排擠反響弱，腫瘤移植生長良好，能保持腫瘤細胞的原有形態(tài)和生物學(xué)特性，可用于研究化療藥物、生物制劑等乳腺癌的治療作用。2.3.2免疫功能正常小鼠乳腺癌移植性模型免疫功能正常的小鼠其移植的乳腺癌細胞或腫塊有嚴(yán)格的種系特異性。最容易得到的近交系小鼠為BALB.，而來源于BALB.小鼠的乳腺癌細胞株文獻報到最多的是4T1、T40兩株乳腺癌細胞，接種于BALB.小鼠體內(nèi)都可生長出乳腺癌［9］。采用4～6周的BALB.小鼠，選擇對數(shù)生長期的T40D，細胞濃度調(diào)至106～108.l。在BALB.小鼠胸壁5～6肋間或腹壁第4對乳腺處皮下接種腫瘤細胞0.1l，相當(dāng)于105～107細胞.只小鼠，每天觀察腫瘤的生長情況。乳腺癌細胞數(shù)量107組，接種后1周，肉眼便可見皮下腫塊，成瘤率為100%，在無任何治療的情況下，荷瘤小鼠可存活12～15周。這種模型是目前抗癌藥物挑選和藥效學(xué)研究中使用最多的模型。2.3.3組織塊懸液注射法制作兔移植性乳腺癌模型姚青等［10］綜合細胞液部分注射和乳腺切開后實體瘤原位種植［11］兩者的優(yōu)點，采用瘤組織塊懸液注射于乳腺腺體建立了性質(zhì)穩(wěn)定，成瘤率高的兔VX2乳腺癌模型。近年來，國內(nèi)外有大量VX2瘤株種植于肝、腎、肌肉、骨、膀胱、子宮、肺等建立相應(yīng)的原位腫瘤動物模型的報道［12、13］。2.4乳腺癌遠處轉(zhuǎn)挪動物模型乳腺癌遠處轉(zhuǎn)挪動物模型的建立首先有利于藥物開發(fā)，其次可區(qū)分腫瘤轉(zhuǎn)移抑制或促進基因，使其作為一個新的靶點，用于開發(fā)新的治療方法，并使人們更能理解腫瘤轉(zhuǎn)移的復(fù)雜性。建立乳腺癌遠處轉(zhuǎn)挪動物模型有各種方法。細胞原位植入實驗鼠，可自發(fā)產(chǎn)生肺和骨轉(zhuǎn)移，也可自尾靜脈注入或注射入左心室［14］。3評價與展望理想的乳腺癌動物模型應(yīng)具備以下條件:①致癌方法簡單、易行;②經(jīng)濟、快速;③指標(biāo)客觀、明確;④對癌變器官的特異性高;⑤重復(fù)性好;⑥誘發(fā)乳腺癌的病理類型、生物學(xué)行為、電鏡下表現(xiàn)及組織化學(xué)改變等應(yīng)與人體癌腫相似。而中醫(yī)動物模型的復(fù)制要從病癥、病因、治療、相關(guān)因素、客觀指標(biāo)等多角度來加以考慮，才能充分表達動物模型與原病證的相似性和典型性［15］?！緟⒖嘉墨I】［1］李樹玲.乳腺腫瘤學(xué)［］.北京:科學(xué)技術(shù)文獻出版社，2000:3-7.［2］agnerKU.delsfbreastaner:puvadis，anialdeling［J］.BreastanerRes，2022，6〔1〕:31-38.［3］Larief，LiS，Labri，etal.Inhibitryeffetfasteridalan-tiestrgennestrne-stiulatelgrthf7，12-dietheylabenz〔a〕anthraene〔DBA〕induedaaryarinaintherat.BreastanerRes，1995，〔3〕3:237-244.［4］TsuburaA，ShikataN，InuiT，etal.rphlgialandbilgialharateristisfaarytursinduedbythediretapplia-tinfDBApdertrataaryglands.VirhsArh，1998，414〔1〕:1.［5］張慧影，劉美生，王曉明，等.7，12-二甲苯蒽誘發(fā)大鼠乳腺癌的激素依賴性及孕、雌激素受體狀況.實驗生物學(xué)報，1985，〔18〕:225-330.［6］HeffelfingerS，Yan，GearRB，etal.InhibitinfBEGFR2preventsDBA-induedaaryturfratin［J］.LabIn-vest.2022，84〔8〕:989-998.［7］TalangNT，KuriharaH，ngGY，etal.Prneplastitransfra-tininuseaarytissue:identifiatinandvalidatinfinterediatedbiaderfrhepreventin.AntianerRes，1991，11〔3〕:1021.［8］甄林林，武正炎，范萍，等.人乳腺癌裸鼠移植模型的建立［J］.南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2001，〔11〕:509-510.［9］ShiHY，Zhang，LiangR，etal.Blkingturgrth，inva-sin，andetastasisbyaspininasyngenEibreastanerd-el.anerRes，2001，〔61〕:6945-6951.［10］姚青，陳江浩，凌瑞，等.組織塊懸液注射法制作兔VX2乳腺癌模型［J］.中國癌癥雜志，2022，14〔1〕:22-23.［11］吳傳新，劉長安，喬天愚，等.兔乳腺移植性鱗癌模型的建立及其生物學(xué)特征的觀察［J］.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，1999，24〔2〕:137-140.［12］郭衛(wèi)平，劉燕，王執(zhí)民，等.兔肝VX2移植瘤改進模型的建立［J］.中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù)，2002，18〔5〕:397-399.［13