號上午-ifd診斷sop p侵襲性真菌病臨床實驗室

侵襲性真菌病臨床操作規(guī)范-組織標本處理Operating

Procedures

for

Laboratory

diagnosis

ofInvasiveFungal

Diseases(2014-5-

)起草單位：中國醫(yī)學(xué)

協(xié)和醫(yī)院、第一醫(yī)院復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院中

民

衛(wèi)生行業(yè)標準高?；颊哳A(yù)防用藥擬診經(jīng)驗性治療臨床搶先治療確診靶向治療2Ben,

et

al.

Clin

Infect

Dis.

2008;

46:1813–21臨床/影像學(xué)表現(xiàn)病原學(xué)(培養(yǎng)及非培養(yǎng))無菌部位培養(yǎng)陽性組織病理學(xué)陽性IFD及治療臨床真菌學(xué)檢驗應(yīng)該發(fā)揮更大作用!微生物學(xué)-確診鏡檢：□無菌病灶處

□病理片培養(yǎng)：以下任一無菌病灶處培養(yǎng)陽性：□腦脊液

□組織

□無菌病灶

液□血（酵母菌、鐮刀菌等，曲霉除外）肺泡

液、顱竇標本、尿中培養(yǎng)出絲狀菌不能確診抗原檢測：隱球菌抗原微生物學(xué)

-臨床鏡檢：以下任一病灶處查見絲狀菌：□痰

□肺泡

液

□支氣管刷片

□竇道吸出物培養(yǎng)：以下任一病灶處培養(yǎng)見絲狀菌：□肺泡液□支氣管刷片

□竇道吸出物抗原檢測：G試驗（

）GM試驗（血漿、

、BALF、CSF）真菌病的臨床病史體檢影像學(xué)顯微鏡檢標本活檢組織,血液,CSF,BAL,

痰,尿,胸水,腹水,插管尖端等.培養(yǎng)和鑒定學(xué)抗原、抗體、分子學(xué)取決于

部位合適的

標本取材David

Ellis.

Med

Mycol

Training

Network,

4-6

Dec.2009,

Taipei標本與處理規(guī)范了各類標本與處理血液骨髓靜脈導(dǎo)管無菌體液尿液膿液、液、創(chuàng)面

物及竇道下呼吸道標本（深部痰液，支氣管吸取物，肺泡

液）眼部標本（角膜刮片、玻璃體液等）組織標本組織標本后無菌容器轉(zhuǎn)運，滴加無菌鹽標本

：水保濕標本處理：及時送檢，若不

送檢則室溫保存培養(yǎng)標本使用滅菌眼科剪將標本剪成米粒大小后接種懷疑接合菌

的組織則直接接種最好接種到包含抗生素和血的培養(yǎng)基中真菌培養(yǎng)檢查規(guī)定培養(yǎng)檢查的條件培養(yǎng)基：沙保弱葡萄糖瓊脂、馬鈴薯瓊脂、腦心浸膏瓊脂等適宜真菌生長的培養(yǎng)基，有條件平行接種顯色培養(yǎng)基；培養(yǎng)基中可加入氯霉素或慶大霉素抑制細菌。操作步驟：螺口管斜面培養(yǎng)法：標本處理后接種于培養(yǎng)基斜面中下部，，建議平行接種兩管。平板培養(yǎng)：三區(qū)劃線接種，每平板只能接種一份標本。培養(yǎng)條件：通常28±1℃培養(yǎng)7天，如懷疑雙相真菌（如馬內(nèi)菲青霉），應(yīng)同時在28±1℃及35±1℃培養(yǎng)。對于組織、腦脊液等標本，或懷疑罕見真菌或慢生長真菌（如莢膜組織胞漿菌、隱球菌）

時，建議至少培養(yǎng)1個月。各種培養(yǎng)法雙相真菌37

°C

–酵母相27

°C

–菌絲相真菌培養(yǎng)有無臨床意義的判定嚴格防止污染條件下，組織標本及無菌標本中有任何真菌生長都有意義。非無菌標本，兩試管有同一形態(tài)真菌生長，真菌鏡檢同時陽性，提示可能有臨床意義；僅一管生長，生長部位非接種部位，菌落為霉菌樣則可能是污染。是否為致病菌需結(jié)合標本直接鏡檢結(jié)果和患者臨床癥狀體征、影像學(xué)及其它檢查結(jié)果綜合分析。侵襲性真菌病組織形態(tài)特點第一醫(yī)院真菌和真菌病李若瑜16病原學(xué)IFD真菌標本的鏡檢濕片Calcofluor

white墨汁染色:Giemsa，Gram組織病理條件致病性真菌疾病病原體發(fā)生率念珠菌病Candida

albicans

白念珠菌和相關(guān)菌常見隱球菌病Cryptococcus

neoformans

新生隱球菌少見/常見曲霉病Aspergillus

fumigatus

etc.煙曲霉等相關(guān)菌常見假阿利什霉病Scedosporium

species

賽多孢霉、波氏霉少見接合菌病Rhizopus,

Mucor,

Rhizomucor,Absidia

etc.根霉、毛霉、根毛霉、犁頭霉等少見/常見（毛霉病）透明絲孢霉病Penicillium,

Paecilomyces,

Beauveria,Fusarium,Scopulariopsisetc.青霉、擬青霉、白僵菌、鐮刀菌、帚霉等少見暗色絲孢霉病Cladosporium,

Exophiala,

Wangiella,

Bipolaris,Exserohilum,Curvularia.枝孢霉、外瓶霉、王氏霉、離蠕孢、突臍孢、彎孢等少見真菌寄生形態(tài)學(xué)特點酵母樣孢子：提示酵母菌；酵母樣孢子和假菌絲：提示念珠菌；有莢膜的酵母樣孢子：提示隱球菌；透明、有隔菌絲，約45?角分枝，鹿角樣提示曲霉；透明、無隔或少隔菌絲，菌絲寬大，約90?度分枝提示毛霉目真菌；棕色或黑色菌絲或孢子：提示暗色絲狀真菌。直接鏡檢—酵母細胞念珠菌病-直接鏡檢念珠菌病-病理特點隱球菌病—直接鏡檢隱球菌病-病理特點多形性酵母菌，大小及形狀顯著不同“大莢膜中小菌體”莢膜的量與肉芽腫樣浸潤成反比在一起常常有距離地成簇黏蛋白卡紅染成紅色Fontana-Masson黑素染色陽性隱球菌病-組織病理阿申藍染色H&EPASImmunochemistry隱球菌病-組織病理曲霉病—直接鏡檢雙分支菌絲曲霉頭曲霉病-病理特點壞死

變；肉芽腫改變；化膿性改變；菌絲一般用HE染色觀察即可,少數(shù)需用GMS染色或PAS染色；與外界相通氧氣供應(yīng)充足的膿瘍或空腔內(nèi)有時可見到分生孢子頭；菌絲分隔，呈45度角叉狀分支,典型的排列成放射狀,或平行排列向同一方向分支生長。曲霉病-組織病理接合菌（毛霉）病—直接鏡檢粗大無分隔菌絲接合菌病-病理特點（毛霉病）（蟲霉?。┟鼓肯x霉目主要特征寬闊、中空、波浪狀、有折光性的菌絲血管、組織壞死90度分枝多見，也有些呈銳角菌絲無隔，但菌絲的

及內(nèi)彎常常被誤認為有隔。革蘭染色能很好接合菌病-組織病理致病性雙相真菌疾病病原菌HistoplasmosisHistoplasma

capsulatum少見*Penicillium

marneffeiinfectionPenicillium

marneffei少見*CoccidioidomycosisCoccidioides

immitis少見*BlastomycosisBlastomycesdermatitidis少見*ParacoccidioidomycosisParacoccidioidesbrasiliensis少見**

見于流行區(qū)銀染（GMS）示肺巨噬細胞中的組織胞漿菌酵母細胞銀染（GMS）示肺巨噬細胞中的馬內(nèi)菲青霉酵母細胞-與組織胞漿菌相似馬內(nèi)菲青霉病馬內(nèi)菲青霉分隔的酵母細胞真菌

組織病理檢查的意義是確診的重要依據(jù),需要專業(yè)知識和認真觀察；可做出

,但不能確切鑒定致病菌種類,

需與鏡檢及培養(yǎng)結(jié)合；較菌種鑒定更能了解疾病過程,結(jié)合臨床信息也很重要.主要參考文獻秦啟賢主編：臨床真菌學(xué).

復(fù)旦大學(xué)

，2001.王端禮主編：醫(yī)學(xué)真菌學(xué)－

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Reference

Method

for

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DilutionAntifungal

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of

Yeasts,

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Institute,

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2012,

M27-S4,vol.28,

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No16.ycology

Unit[11]