志賀氏菌的檢驗(yàn)課件

志賀氏菌的檢驗(yàn)

1、志賀氏菌的生物學(xué)性狀

2、志賀氏菌的流行病學(xué)

3、志賀氏菌的致病性

4、志賀氏菌的檢驗(yàn)一、志賀氏菌的生物學(xué)特性

志賀氏菌屬（Shigella）的細(xì)菌（通稱痢疾桿菌），是細(xì)菌性痢疾的病原菌人類對(duì)痢疾桿菌有很高的易感性。在幼兒可引起急性中毒性菌痢，死亡率甚高。志賀氏菌和大腸桿菌都屬于腸桿菌科，根據(jù)DNA雜交研究結(jié)果表明，志賀氏菌屬的四個(gè)種和大腸桿菌屬在生化上是難以區(qū)分的，因?yàn)橛挟a(chǎn)氣的志賀氏菌，也有乳糖陰性、不產(chǎn)氣、不運(yùn)動(dòng)的大腸桿菌，有些大腸桿菌也能引起痢疾狀的腹瀉。腸桿菌科中常見(jiàn)各屬細(xì)菌

腸桿菌科共同特性，都是革蘭氏陰性小桿菌，好氧或兼性厭氧，沒(méi)有芽孢。

屬代表種致病性埃希氏菌屬大腸埃希氏菌腸道外感染，急性腹瀉志賀氏菌屬痢疾志賀氏菌細(xì)菌性痢疾愛(ài)德華氏菌屬遲純愛(ài)德華氏菌蛇類等血?jiǎng)游锏恼Ｄc道寄居菌偶見(jiàn)于健康人或腹瀉者糞便內(nèi)沙門氏菌屬傷寒沙門氏菌腸熱癥、急性腸炎、敗血癥枸櫞酸桿菌屬弗勞地氏枸櫞酸桿菌條件致病菌，引起繼發(fā)性感染克雷伯氏菌屬肺炎克雷伯氏菌肺炎，泌尿系、創(chuàng)傷感染敗血癥等腸桿菌屬產(chǎn)氣桿菌很少引起原發(fā)性感染哈夫尼亞菌屬蜂窩啥夫尼亞菌對(duì)人無(wú)致病性沙雷氏菌屬粘質(zhì)沙雷氏菌件致病菌，引起泌尿系呼吸道及創(chuàng)傷感染變形桿菌屬通變形桿菌食物中毒，泌尿系、呼吸道感染等耶爾森氏菌屬鼠疫耶爾森氏菌鼠疫歐文氏菌屬草原居民歐文氏菌植物寄生菌從人體腸道及化膿扁桃體中分離到

革蘭氏染色法

革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。１）涂片固定。２）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。３）自來(lái)水沖洗。４）加碘液覆蓋涂面染1分鐘。５）水洗，用吸水紙吸去水分。６）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，30秒后水洗，吸去水分。７）蕃紅染色液染10秒鐘后，自來(lái)水沖洗。干燥，鏡檢。染色的結(jié)果，革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色，負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色。下面是革蘭氏陰性桿菌和革蘭氏陽(yáng)性桿菌。革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色，負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色。

下面是革蘭氏陰性桿菌和革蘭氏陽(yáng)性桿菌。和革蘭氏陽(yáng)性桿菌。革蘭氏陰性桿菌革蘭氏陽(yáng)性桿菌。

志賀氏菌掃描電鏡照片

志賀氏菌掃描電鏡照片

2、志賀氏菌的培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧。營(yíng)養(yǎng)要求不高，能在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，最適溫度為37℃，最適pH為6.4-7.8。37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)后菌落呈圓形、微凸、光滑濕潤(rùn)、無(wú)色、半透明、邊緣整齊，直徑約2mm，宋內(nèi)氏菌菌落一般較大，較不透明，并常出現(xiàn)扁平的粗糙型菌落。在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長(zhǎng)，無(wú)菌膜形成。3、志賀氏菌的生化特性本菌屬都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。大多不發(fā)酵乳糖，僅宋內(nèi)氏菌遲緩發(fā)酵乳糖。靛基質(zhì)產(chǎn)生不定，甲基紅陽(yáng)性，VP試驗(yàn)陰性，不分解尿素，不產(chǎn)生H2S。根據(jù)生化反應(yīng)可進(jìn)行初步分類。

志賀氏菌生化反應(yīng)分類

志賀氏菌屬的細(xì)菌對(duì)甘露醇分解能力不同，可分為二大組。A、不分解甘露醇組：主要為志賀氏菌。又根據(jù)能否產(chǎn)生靛基質(zhì)，進(jìn)一步分靛基質(zhì)陽(yáng)性（1、3、4、5、6、9、10型）和靛基質(zhì)陰性（2、7、8型）的志賀氏痢疾菌。B、分解甘露醇組：包括福氏、鮑氏、宋內(nèi)氏菌。再按乳糖分解情況，分為遲緩分解乳糖的宋內(nèi)氏和不分解乳糖的福氏和鮑氏菌。后者進(jìn)一步再根據(jù)靛基質(zhì)產(chǎn)生與否，分靛基質(zhì)陽(yáng)性（福氏菌1、2、3、4、5型和鮑氏菌5、7、9、11、13、15型）和靛基質(zhì)陰性（福氏菌6型和鮑氏菌1、2、3、4、6、8、10、12、14）二類。4、志賀氏菌的抗原構(gòu)造與分型志賀氏菌屬細(xì)菌的抗原結(jié)構(gòu)由菌體抗原（O）及表面抗原（K）組成。主要抗原有三種。型特異性抗原、群特異性抗原、表面抗原（K抗原）。根據(jù)抗原構(gòu)造的不同，按最新國(guó)際分類法，將本屬細(xì)菌分為四個(gè)群、45個(gè)血清型（包括亞型）附：志賀氏菌抗原分類。志賀氏菌屬抗原的分類菌名血清分類生化特性

群型亞型甘露醇鳥(niǎo)氨酸脫羧酶

志賀氏菌A1~12--福氏菌B1~61a、1b、2a、2b、3a、3b+-

x、y變種

3c、4a、4b.5a.5b

鮑氏菌C1~18+-宋內(nèi)氏菌D1++

5、志賀氏菌的抵抗力志賀氏菌屬在外界環(huán)境中的生存力，以宋內(nèi)氏最強(qiáng)，福氏菌次之，志賀氏菌最弱。一般在潮濕土壤中能存活34天，37℃水中存活20天，在糞便內(nèi)（室溫）存活11天。日光直接照射30分鐘，56-60℃10分即被殺死，對(duì)高溫和化學(xué)消毒劑很敏感，1%石炭酸中15-30分鐘即被殺死，對(duì)氯霉素、磺胺類、鏈霉素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。

6、志賀氏菌的變異性

S-R型變異：菌落可由光滑型變?yōu)榇植谛?，同時(shí)常伴有生化反應(yīng)、抗原構(gòu)造和致病性的變異。在機(jī)體內(nèi)，尤其在慢性患者和恢復(fù)期患者，志賀氏菌可發(fā)生變異而失去原來(lái)的生化和抗原特性，成為不典型菌株。但其中部分不典型菌株，可通過(guò)10%膽汁肉湯等返祖為典型菌株。故在慢性患者或帶菌者糞便檢查時(shí)，對(duì)這類菌株要特別注意，必須多次反復(fù)檢查。因這對(duì)傳染源的發(fā)現(xiàn)及控制有重要意義。耐藥性變異毒力變異與其他變異

三、志賀氏菌的致病性

志賀氏菌引起的細(xì)菌性痢疾，主要通過(guò)消化道途徑傳播。根據(jù)宿主的健康狀況和年齡，只需少量病菌（至少為10個(gè)細(xì)胞）進(jìn)入，就有可能致病。

致病因素：志賀氏菌的致病作用，主要是侵襲力、菌體內(nèi)毒素個(gè)別菌株能產(chǎn)生外毒素。志賀氏菌引起的細(xì)菌性痢疾可分為兩類:A、急性細(xì)菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型。B、慢性細(xì)菌性痢疾：又分慢性遷延型、慢性隱伏型、慢性急性發(fā)作型三型。

免疫性：病后有一定的免疫力，但免疫期短，也不穩(wěn)定。

四、志賀氏菌的檢驗(yàn)

1、增菌

稱取檢樣25g，加入裝有225mLGN增菌液的500mL廣口瓶?jī)?nèi)，固體食品用均質(zhì)器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用金屬匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培養(yǎng)6～8h。培養(yǎng)時(shí)間視細(xì)菌生長(zhǎng)情況而定，當(dāng)培養(yǎng)液出現(xiàn)輕微混濁時(shí)即應(yīng)中止培養(yǎng)。

2、分離和初步生化試驗(yàn)

取增菌液1環(huán)，劃線接種于HE瓊脂平板或SS瓊脂平板1個(gè)；另取1環(huán)劃線接種于麥康凱瓊脂平板和伊紅美藍(lán)瓊脂平板各1個(gè)，于36℃培養(yǎng)18～24h。志賀氏菌在這些培養(yǎng)基上呈現(xiàn)無(wú)色透明不發(fā)酵乳糖的菌落。

SS平板原理及反應(yīng)

大腸桿菌或者別的發(fā)酵乳糖的腸桿菌是沙門氏菌。有黑色中心。如果沒(méi)有黑色中心，就很可能是志賀氏菌了。

麥康凱瓊脂平板

EMB平板照片及原理

互動(dòng)：志賀氏菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生H2S。應(yīng)該產(chǎn)生什么現(xiàn)象？大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生H2S。應(yīng)該是什么現(xiàn)象？沙門氏菌，能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生H2S，多數(shù)產(chǎn)氣。

下述培養(yǎng)物可以棄去嗎？

a.在三糖鐵瓊脂斜面上呈蔓延生長(zhǎng)的培養(yǎng)物；

b.在18～24h內(nèi)發(fā)酵乳糖、蔗糖的培養(yǎng)物；

c.不分解葡萄糖和只生長(zhǎng)在半固體表面的培養(yǎng)物；

d.產(chǎn)氣的培養(yǎng)物；

e.有動(dòng)力的培養(yǎng)物；

f.產(chǎn)生硫化氫的培養(yǎng)物。

凡是乳糖、蔗糖不發(fā)酵，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體)，無(wú)動(dòng)力的菌株，可做血清學(xué)分型和進(jìn)一步的生化試驗(yàn)。

3、血清學(xué)分型

挑取三糖鐵瓊脂上的培養(yǎng)物，做玻片凝集試驗(yàn)。先用4種志賀氏菌多價(jià)血清檢查，如果由于K抗原的存在而不出現(xiàn)凝集，應(yīng)將菌液煮沸后再檢查；如果呈現(xiàn)凝集，則用A1、A2、B群多價(jià)和D群血清分別試驗(yàn)。如系B群福氏志賀氏菌，則用群和型因子血清分別檢查。福氏志賀氏菌各型和亞型的型和群抗原見(jiàn)表1?？上扔萌阂蜃友鍣z查，再根據(jù)群因子血清出現(xiàn)凝集的結(jié)果，依次選用型因子血清檢查。

4種志賀氏菌多價(jià)血清不凝集的菌株，可用鮑氏多價(jià)1、2、3分別檢查，并進(jìn)一步用1～18各型因子血清檢查。如果鮑氏多價(jià)血清不凝集，可用痢疾志賀氏菌3～12型多價(jià)血清及各型因子血清檢查。

4、進(jìn)一步的生化試驗(yàn)在做血清學(xué)分型的同時(shí)，應(yīng)做進(jìn)一步的生化試驗(yàn)，即：葡萄糖銨西蒙氏檸檬酸鹽賴氨酸和鳥(niǎo)氨酸脫羧酶pH7.2尿素KCN生長(zhǎng)水楊苷和七葉苷的分解除宋內(nèi)氏菌和鮑氏13型為鳥(niǎo)氨酸陽(yáng)性外，志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果。必要時(shí)還應(yīng)做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗(yàn)，應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。生化反應(yīng)不符合的菌株，即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集，仍不得判定為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物。

已判定為志賀氏菌屬的培養(yǎng)物，應(yīng)進(jìn)一步做

5%乳糖發(fā)酵甘露醇棉子糖甘油的發(fā)酵靛基質(zhì)試驗(yàn)志賀氏菌屬4個(gè)生化