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文檔簡介

血糖濃度的測定生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室實驗十二血糖濃度的測定生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室實驗十二1

【實驗?zāi)康摹?.鞏固復(fù)習(xí)血糖的相關(guān)知識。2.掌握分光光度計的原理及使用。3.掌握測定血糖濃度的方法?!緦嶒?zāi)康摹?血糖及血糖水平的概念*血糖,指血液中的葡萄糖。*血糖水平,即血糖濃度。正常血糖濃度:3.89-6.11mmol/L血糖及血糖水平的概念*血糖,指血液中的葡萄糖。*血糖水3血糖食物糖消化,吸收肝糖原分解

非糖物質(zhì)糖異生

氧化分解

CO2+H2O糖原合成

肝(?。┨窃姿嵛焯峭緩降?/p>

其它糖脂類、氨基酸合成代謝

脂肪、氨基酸血糖來源和去路血糖食物糖消化,吸收肝糖原分解非糖物質(zhì)4【實驗原理】利用物質(zhì)的光吸收特性進行含量分析與性質(zhì)鑒定的技術(shù)1.分光光度技術(shù)(AbsorptionPhotometry)【實驗原理】利用物質(zhì)的光吸收特性進行含量分析與性質(zhì)鑒定的技術(shù)5用顏色進行定量分析顏色濃度顏色如何量化?用顏色進行定量分析顏色濃度顏色如何量化?6同種溶液顏色越深,吸光能力越強溶液的顏色:由于物質(zhì)的結(jié)構(gòu)不同,會選擇性吸收特定波長的單色光溶液的顏色:由于物質(zhì)的結(jié)構(gòu)不同,會選擇性吸收特定波長的單色光7顏色濃度吸光能力濃度如何檢測吸光能力?用吸光能力進行定量分析顏色濃度吸光能力濃度如何檢測吸光能力?用吸光能力進行8分光光度計工作示意圖分光光度計工作示意圖9朗伯-比爾定律A

—吸光度(Absorbance)C—溶液濃度L—液層厚度K—吸光系數(shù)無色溶液適用嗎?朗伯-比爾定律A—吸光度(Absorbance)無色溶10物質(zhì)的光吸收曲線(吸收光譜)直接反映物質(zhì)對各單色光的吸收情況間接反映物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點最大吸收光定性物質(zhì)的光吸收曲線(吸收光譜)直接反映物質(zhì)對各單色光的吸收情況11標(biāo)準(zhǔn)溶液法標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測溶液的吸光度進行比較標(biāo)準(zhǔn)曲線法測出不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線例:未知濃度的測定標(biāo)準(zhǔn)溶液法標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測溶液的吸光度進行比較標(biāo)準(zhǔn)曲線法測出不12光源單色器樣品池(比色杯)檢測系統(tǒng)國產(chǎn)721型分光光度計光源單色器樣品池檢測系統(tǒng)國產(chǎn)721型分光光度計132.血糖濃度測定的原理葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺在熱醋酸溶液中縮合成葡萄糖基胺,再脫水生成希夫氏(Schiff)堿,然后經(jīng)分子重排,生成一組藍綠色化合物,在630nm處有一吸收峰,吸光度大小與血糖濃度成正比?!緦嶒炘怼?.血糖濃度測定的原理【實驗原理】14【試劑】1.鄰甲苯胺試劑:新配試劑應(yīng)放置24小時后(待老化)使用。此試劑腐蝕性極強,應(yīng)避免與皮膚接觸而造成灼傷。2.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(5mmol/L)準(zhǔn)確吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液5.0ml,置于100ml容量瓶中,再以12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度。【器材】水浴箱,分光光度計,試管,燒杯,容量瓶。【試劑與器材】【試劑】【試劑與器材】151.選試管3支,分別標(biāo)以“測定”、“標(biāo)準(zhǔn)”和“空白”,然后按下表操作。加入物(ml)測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液蒸餾水鄰甲苯胺試劑0.1—

—5.0—0.1—5.0——0.15.02.將上述各管分別混勻后,置沸水浴中煮沸12分鐘,取出用自來水流水冷卻5分鐘。3.用分光光度計,在波長630nm下,以空白管調(diào)零,讀取各管吸光度?!緟⒖贾怠?.89~6.11mmol/L(70~110mg/dl)【步驟】加入物(ml)測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清0.1——2.將上述各161.飯后1~2小時、攝入高糖食物后、情緒緊張導(dǎo)致腎上腺素分泌增加時,均可出現(xiàn)高血糖。此為生理性高血糖。2.饑餓或劇烈運動后可出現(xiàn)生理性低血糖。3.糖尿病、對抗胰島素的激素分泌過多、顱內(nèi)壓增加時可出現(xiàn)病理性高血糖。4.胰島β細胞增生或癌瘤、對抗胰島素的激素分泌不足、嚴重肝病患者可出現(xiàn)病理性低血糖。【臨床意義】【臨床意義】17

尿葡萄糖定性實驗生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室實驗十三尿葡萄糖定性實驗生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室實驗十三18【實驗?zāi)康摹?/p>

掌握尿糖的檢測方法?!緦嶒炘怼科咸烟窃谄咸烟茄趸傅拇呋饔孟滦纬善咸烟撬岷瓦^氧化氫,過氧化氫在過氧化氫酶的催化作用下形成水和氧,氧可將某種無色化合物氧化成有色的化合物,將上述兩種酶和無色化合物固定在紙條上,制成測試尿糖含量的酶試紙。這種酶試紙與尿液相遇時,很快會因為尿液中葡萄糖的含量的少到多而依次呈現(xiàn)淺藍、淺綠、棕或深棕色?!驹噭┡c器材】目測尿糖試紙、尿杯【實驗?zāi)康摹?9【步驟】1.將試紙帶浸入尿液中(中段尿液最佳),濕透(約1-2秒鐘)后取出;2.在30-60秒內(nèi)觀察試紙帶顏色并與比色板對照,測得結(jié)果;3.結(jié)果判斷:(試紙由淺藍到棕紅色變化來表示檢測結(jié)果)淺藍色表示沒有糖尿病,用“-”表示;顏色愈深“+”號愈多,尿糖愈高?!緟⒖贾怠空?yīng)為陰性?!咀⒁馐马棥?.尿液應(yīng)新鮮,如放置后細菌生長??煞纸馓嵌菇Y(jié)果偏低;2.不要在尿樣中加入防腐劑,尿樣不可離心?!九R床意義】

尿糖陽性見于糖尿病、腎性糖尿、甲亢等。內(nèi)服、注射大量葡萄糖及精神激動等也可致陽性反應(yīng)?!静襟E】20THANKYOU

THANKYOU21

血糖濃度的測定生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室實驗十二血糖濃度的測定生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室實驗十二22

【實驗?zāi)康摹?.鞏固復(fù)習(xí)血糖的相關(guān)知識。2.掌握分光光度計的原理及使用。3.掌握測定血糖濃度的方法?!緦嶒?zāi)康摹?3血糖及血糖水平的概念*血糖,指血液中的葡萄糖。*血糖水平,即血糖濃度。正常血糖濃度:3.89-6.11mmol/L血糖及血糖水平的概念*血糖,指血液中的葡萄糖。*血糖水24血糖食物糖消化,吸收肝糖原分解

非糖物質(zhì)糖異生

氧化分解

CO2+H2O糖原合成

肝(?。┨窃姿嵛焯峭緩降?/p>

其它糖脂類、氨基酸合成代謝

脂肪、氨基酸血糖來源和去路血糖食物糖消化,吸收肝糖原分解非糖物質(zhì)25【實驗原理】利用物質(zhì)的光吸收特性進行含量分析與性質(zhì)鑒定的技術(shù)1.分光光度技術(shù)(AbsorptionPhotometry)【實驗原理】利用物質(zhì)的光吸收特性進行含量分析與性質(zhì)鑒定的技術(shù)26用顏色進行定量分析顏色濃度顏色如何量化?用顏色進行定量分析顏色濃度顏色如何量化?27同種溶液顏色越深,吸光能力越強溶液的顏色:由于物質(zhì)的結(jié)構(gòu)不同,會選擇性吸收特定波長的單色光溶液的顏色:由于物質(zhì)的結(jié)構(gòu)不同,會選擇性吸收特定波長的單色光28顏色濃度吸光能力濃度如何檢測吸光能力?用吸光能力進行定量分析顏色濃度吸光能力濃度如何檢測吸光能力?用吸光能力進行29分光光度計工作示意圖分光光度計工作示意圖30朗伯-比爾定律A

—吸光度(Absorbance)C—溶液濃度L—液層厚度K—吸光系數(shù)無色溶液適用嗎?朗伯-比爾定律A—吸光度(Absorbance)無色溶31物質(zhì)的光吸收曲線(吸收光譜)直接反映物質(zhì)對各單色光的吸收情況間接反映物質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點最大吸收光定性物質(zhì)的光吸收曲線(吸收光譜)直接反映物質(zhì)對各單色光的吸收情況32標(biāo)準(zhǔn)溶液法標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測溶液的吸光度進行比較標(biāo)準(zhǔn)曲線法測出不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線例:未知濃度的測定標(biāo)準(zhǔn)溶液法標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測溶液的吸光度進行比較標(biāo)準(zhǔn)曲線法測出不33光源單色器樣品池(比色杯)檢測系統(tǒng)國產(chǎn)721型分光光度計光源單色器樣品池檢測系統(tǒng)國產(chǎn)721型分光光度計342.血糖濃度測定的原理葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺在熱醋酸溶液中縮合成葡萄糖基胺,再脫水生成希夫氏(Schiff)堿,然后經(jīng)分子重排,生成一組藍綠色化合物,在630nm處有一吸收峰,吸光度大小與血糖濃度成正比?!緦嶒炘怼?.血糖濃度測定的原理【實驗原理】35【試劑】1.鄰甲苯胺試劑:新配試劑應(yīng)放置24小時后(待老化)使用。此試劑腐蝕性極強,應(yīng)避免與皮膚接觸而造成灼傷。2.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(5mmol/L)準(zhǔn)確吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)貯存液5.0ml,置于100ml容量瓶中,再以12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度?!酒鞑摹克∠洌止夤舛扔?,試管,燒杯,容量瓶?!驹噭┡c器材】【試劑】【試劑與器材】361.選試管3支,分別標(biāo)以“測定”、“標(biāo)準(zhǔn)”和“空白”,然后按下表操作。加入物(ml)測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液蒸餾水鄰甲苯胺試劑0.1—

—5.0—0.1—5.0——0.15.02.將上述各管分別混勻后,置沸水浴中煮沸12分鐘,取出用自來水流水冷卻5分鐘。3.用分光光度計,在波長630nm下,以空白管調(diào)零,讀取各管吸光度?!緟⒖贾怠?.89~6.11mmol/L(70~110mg/dl)【步驟】加入物(ml)測定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管血清0.1——2.將上述各371.飯后1~2小時、攝入高糖食物后、情緒緊張導(dǎo)致腎上腺素分泌增加時,均可出現(xiàn)高血糖。此為生理性高血糖。2.饑餓或劇烈運動后可出現(xiàn)生理性低血糖。3.糖尿病、對抗胰島素的激素分泌過多、顱內(nèi)壓增加時可出現(xiàn)病理性高血糖。4.胰島β細胞增生或癌瘤、對抗胰島素的激素分泌不足、嚴重肝病患者可出現(xiàn)病理性低血糖?!九R床意義】【臨床意義】38

尿葡萄糖定性實驗生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室實驗十三尿葡萄糖定性實驗生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室實驗十三39【實驗?zāi)康摹?/p>

掌握尿糖的檢測方法。【實驗原理】葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下形成葡萄糖酸和過氧化氫,過氧化氫在過氧化氫酶的催化作用下形成水和氧,氧可將某種無色化合物氧化成有色的化合物,將上述兩種酶和無色化合物固定在紙條上,制成測試尿糖含量的酶試紙。這種酶試紙與尿液相遇時,很快會因為尿液中葡萄糖的含量的少到多而依次呈現(xiàn)淺藍、淺綠、棕或深棕色?!驹噭┡c器材】目測尿糖試紙、尿杯【實驗?zāi)康摹?0【步驟】1.將試紙帶浸入尿液中(中段尿液最佳),濕透(約1-2秒鐘)后取出;2.在30-60秒內(nèi)觀察試

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