使用gpc sec分析聚合物制藥應(yīng)用

目35年的聚合物GPC/SEC表征和分離的行35年的聚合物GPC/SEC表征和分離的行業(yè)領(lǐng)先解全系列的儀器和軟件實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確的聚合物分析每天24小時(shí)、每周7天的不間斷技術(shù)支持無可比擬的全球物流系統(tǒng)確保重要備件準(zhǔn)時(shí)交粘合 聚乙烯吡咯烷 聚乙二 果 殼聚 甲基纖維 包衣 明 醋酸纖維 崩解 羧甲基纖維 環(huán)糊 給藥載體材 聚己內(nèi)酰 聚乳酸羥基乙酸共聚 助懸劑或增稠 羥乙基纖維 更多安捷倫聚合物賦形劑分析解決方 GPC/SEC系統(tǒng)配 聚聚合物最重要的性質(zhì)是它的分子量分布這將決定聚合物的最終使用性能GPC/SEC是詳細(xì)獲知聚合物分子量分布的唯一成熟技術(shù)。安捷倫擁有豐富的GPC/SEC色譜柱、校準(zhǔn)物、儀器和軟件能夠表征各種合成聚合物以及生物分子聚合物提供廣泛的GPC/SEC解決方案包括從常規(guī)GPC到多柱、多檢測(cè)方法的復(fù)雜測(cè)定。制藥行業(yè)所用聚合物研劑方面有著非常重要的價(jià)值因此廣泛地用于藥物生產(chǎn)。一般來說這些化合物是藥物和個(gè)人護(hù)理用品中用于攜帶活性成分的非活性物質(zhì)。最常見的情況是由于活性成分的量非常少常用的止痛劑中可能含有80%或更多的惰性聚合物填充劑。藥物聚合物的其它作用還包括使活性成分更容易攝取或改善其口感或增加顏色使其便于辨認(rèn)等。除了上述便于病人攝入的性質(zhì)賦形劑聚合物也可在生產(chǎn)過程中使用輔助處理活性成分如防止其被機(jī)械粘附或在加工或貯存過程中發(fā)生降解等。許多類別的化合物被用于實(shí)現(xiàn)這些功能包括合成和天然聚合物、糖類和蛋白質(zhì)等。但是類似的化合物在不同劑型中可能具有不同功能。比如羧甲基纖維素可以作為粘合劑、懸浮劑和崩解劑。過去這些無藥理學(xué)活性的化合物被認(rèn)為是廉價(jià)而惰性的物質(zhì)其唯一的用途就是攜帶活性成分。但是現(xiàn)在人們發(fā)現(xiàn)它們能夠影響活性物質(zhì)的吸收速率和程度而且攝入之后還會(huì)引起副反應(yīng)脅的大環(huán)境下制造商逐漸不再使用合成聚合物添加劑（因?yàn)槠湓讷@取法規(guī)部門批準(zhǔn)時(shí)會(huì)受到阻礙）而是轉(zhuǎn)向毒性更低、更易獲

制藥行業(yè)也因此對(duì)賦形劑聚合物的價(jià)值開展了廣泛研究以提高其功效。以下是2006年以來推出的部分賦形劑化合物。改性賦形劑PolyplasdoneUltra(ISP)、Ltrolmicro68&127;KollidonCL-F&CL-SF(BASF),SwelstarMX1(AsahiKasei),GalenIQ721(Palatinit)復(fù)合處理的賦形劑–SpectrablendHS(Sensient),ProsolvODTSepitrap(Seppic),Starcap1500(Colorcon)新型賦形SolutolHS15SoluplusKollicoatSmartseal30D(BASF),SpressB818PregelatinizedCornStarchNF(GrainProcessingCorporation)許多添加劑的確切性質(zhì)和配方還屬于商業(yè)機(jī)密。但是即使是商業(yè)機(jī)密也涉及制藥公司所使用化合物的質(zhì)量問題特別是要遵循11人用藥品注冊(cè)文件的通用技術(shù)文件為：質(zhì)量–M4Q(R1)。國(guó)際人用藥品注冊(cè)和醫(yī)藥技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)議瑞士制藥質(zhì)量設(shè)“質(zhì)量源于設(shè)計(jì)”(QbD)的理念由J.M.Juran在20多年前提出。Juran的方法是將質(zhì)量作為生產(chǎn)過程的一部分加以規(guī)劃即在建立生產(chǎn)工藝的初始期就將質(zhì)量問題考慮在內(nèi)。實(shí)際上是以質(zhì)20022年開始實(shí)QbD并不斷加以改進(jìn)。2008到2009年間藥物產(chǎn)品召回事件增加了300%使制藥行業(yè)對(duì)QbD的需求日益高漲。在這些召回事件中有一部分就是由賦形劑問題造成的。但是此類化合物的生產(chǎn)廠商可能僅會(huì)為最終用戶提供材料的安全性數(shù)據(jù)而不提供性能表征方面的信息。產(chǎn)品質(zhì)量控制需要充分了解藥品中所有成分的性質(zhì)因此制藥公司對(duì)QbD的需求更加顯

安捷倫在賦形劑聚合物的凝膠滲透色譜（GPC也稱為體積排阻色譜SEC）分析領(lǐng)域有著悠久的歷史。凝膠滲透色譜是一種測(cè)定聚合物分子量分布的重要技術(shù)因?yàn)榉肿恿坑绊懼酆衔锏脑S多物理性質(zhì)。分子量分布比要求更高或更低都意味著該化合物本應(yīng)用文集包含了廣泛的應(yīng)用實(shí)例展示了用于賦形劑聚合物分析的安捷倫解決方案的優(yōu)異性能。主要側(cè)重點(diǎn)是GPC/SEC但還包括HPLC、梯度聚合物洗脫色譜和臨界條件下的液相色譜等其它2221世紀(jì)的藥品質(zhì)量–一種基于風(fēng)險(xiǎn)的方法。粘合賦形劑聚乙烯吡咯烷酮(PVP)已在上百種藥物中使用。它有三種形式：可溶性聚乙烯吡咯烷酮、不溶性交聯(lián)交聚維酮和共聚維酮乙烯吡咯烷酮和醋酸乙烯酯的水溶性共聚物。聚乙烯吡咯烷酮主要用于片劑粘合劑也可用作助溶和助流劑、分散劑和熱敏感活性組分的穩(wěn)定劑。交聚維酮是具有超強(qiáng)崩解性的增溶劑用于固體口服藥物攝入后的分散以增加吸收速度。共聚維酮也是一種片劑粘合劑。聚乙烯吡咯烷酮可溶于極性有機(jī)溶劑和水中。在本例中我們使用含溴化鋰的二甲基甲酰胺(DMF)以最大限度減少聚合電解質(zhì)效應(yīng)。使用RI檢測(cè)器時(shí)樣品在DMF中的響應(yīng)相對(duì)較小。使色譜分（1）。

色譜柱：2xPLgel10mMIXED-B，7.5x300洗脫液：DMF+0.1%LiBr流速 1.0溫度 70系統(tǒng) 1260InfinityGPC/SEC系統(tǒng) 圖1.使用AgilentPLgel10mMIXED-B色譜柱分析聚乙烯吡咯烷方的組成部分溶解在極性流動(dòng)相二甲基乙(DMAc中。實(shí)驗(yàn)PLgel10mMIXED-B色譜柱對(duì)其進(jìn)行了成功的分析（圖2）。結(jié)果獲得一個(gè)寬峰為典型的多分散樣品。色譜柱：3xPLgel10mMIXED-B，7.5x300洗脫液：DMAc+0.5%LiBr流速 1.0上樣量：0.2w/v,100溫度 60系統(tǒng) 1260InfinityGPC/SEC系統(tǒng) 圖2.使用AgilentPLgel10mMIXED-B三柱組合分析聚乙烯

正如第5頁(yè)中提到的聚乙烯吡咯烷酮可溶解于水相以及極性有機(jī)溶劑中。圖3顯示了這類材質(zhì)樣品的寬分子量分布。色譜柱：AgilentPLaquagel-OH608m，7.5x300（部件號(hào)PL1149-（部件號(hào)PL1149-洗脫液：0.2MNaNO30.01MNaH2PO4，pH流速 1.0溫度 50檢測(cè)器： 圖3.水相溶劑中寬分布的聚乙烯吡咯烷酮采用AgilentPLaquagel-OH柱分析后所聚乙二醇–臨界條件下的液相色譜分聚乙二醇廣泛用于醫(yī)藥產(chǎn)品和個(gè)人護(hù)理產(chǎn)品中。分子量較低的聚乙二醇主要用作液體和軟膠囊中的溶劑。固態(tài)PEG則用作軟膏基。臨界條件下的液相色譜(LCCC)或臨界點(diǎn)色譜是一項(xiàng)用于研究聚合物（如PEG類）化學(xué)結(jié)構(gòu)微小差異的技術(shù)。這種差異可能來源于共聚單體的使用或引入了末端官能團(tuán)。傳統(tǒng)的相互作用色

實(shí)驗(yàn)使用乙腈和水的不同等度組合條件分析不同分子量的PEG窄標(biāo)樣建立PEG的臨界點(diǎn)條件。PEGGPC/SEC分析為人們所熟知因此通常作為標(biāo)樣對(duì)這些技術(shù)中所用的色譜柱進(jìn)行校正。5顯示SEC和反相模式中標(biāo)樣的色譜圖以及洗脫結(jié)果與分譜技術(shù)通常對(duì)結(jié)構(gòu)上的微小變化不夠敏感因而臨界點(diǎn)色譜成為在凝膠滲透色譜中由于多孔填料的排阻作用大分子總是在小分子之前被洗脫。與之相反的是在相互作用色譜中由于大分子與填料發(fā)生了更大程度的相互作用因此會(huì)在小分子之后被洗脫。臨界點(diǎn)是指在SEC和相互作用機(jī)制之間達(dá)到平衡的洗脫條件即使這些聚合物分子無論分子量大小都在同一時(shí)間被洗脫。在臨界點(diǎn)上化學(xué)結(jié)構(gòu)的微小改變（如末端基團(tuán)的類型）將導(dǎo)致洗LCCC在分析末端基團(tuán)被氨基修飾的聚乙二醇時(shí)非常有用。PEG

ACN/ 70%PEG22,800PEG8,500PEG960

臨界49%

反40%料修飾前和修飾后的化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖4所示

圖5.使用SEC和反相色譜分析聚乙二醇尋找臨界圖4.聚乙二醇修飾前（上圖）和修飾后的（下圖）化學(xué)色譜柱：AgilentPLRP-S100?5m，4.6x150（部件號(hào)PL1110-

加酸之前在全排阻區(qū)內(nèi)有一個(gè)峰（對(duì)應(yīng)的是未修飾的PEG）以相互作用模式洗脫出兩個(gè)峰（在色譜柱全滲透之后。以相互作用模式洗脫的兩個(gè)峰分別為一元胺和二元胺末端修飾的PEG。對(duì)峰面積進(jìn)行計(jì)算各組分的比例分別為8%PEG、45%一元胺和洗脫液流速49%乙腈的水溶1.047%二元胺。加入鹽酸 洗脫改變?yōu)镾EC模式（在PEG峰洗脫）說明在臨界條件下色譜對(duì)樣品化學(xué)結(jié)構(gòu)的變化非常敏感進(jìn)樣量20檢測(cè)器1260Infinity蒸發(fā)光散射檢PEGPEG-PEG-SEC一元胺二元胺 圖6.用鹽酸中和前（下圖）和中和后（上圖）的氨基修飾聚乙二

Agilent1260Infinity蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（左）和1290Infinity蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（右果果膠一種天然產(chǎn)物可用于制備膠囊外殼從蘋果、柑橘和甜菜等植物原材料中提煉而得。經(jīng)過提取物的加工后果膠會(huì)具有一些特殊性質(zhì)。雖然果膠的化學(xué)組成是其應(yīng)用的關(guān)鍵但流變特性對(duì)其性能也十分重要測(cè)定其分子量分布可以幫助預(yù)測(cè)其流變特離果膠的理想選擇。PLaquagel-OHMIXED-H8m色譜柱具有廣泛的分子量分離范圍（高達(dá)10000000g/mol相對(duì)于PEO/PEG來說）和高柱效（>35000塔板數(shù)/米）是本應(yīng)用的首選色譜柱。2L5m濾膜過濾。使用窄分子量分布的普魯藍(lán)標(biāo)樣對(duì)該組色譜柱進(jìn)行校正以下列出的分子量值均為相對(duì)該標(biāo)樣的相對(duì)分子量。校正曲線如圖7所示。

果膠樣品的原始數(shù)據(jù)色譜圖見圖8色譜柱：2xPLaquagel-OHMIXED-H8m，7.5x300（部件號(hào)PL1149-洗脫液：0.2MNaNO30.01MNaH2PO4，pH流速 1.0溫度 50檢測(cè)器：MpMpMpMpMpMpMpDCBALogDCBALog7.普魯藍(lán)標(biāo)樣AgilentPLaquagel-OHMIXED-H8m柱所得的校正曲

圖8.四種果膠樣品通過AgilentPLaquagel-OHMIXED柱所得的AgilentAgilentGPC/SEC使用最優(yōu)質(zhì)的聚合物標(biāo)樣（AgilentEasiVial和AgilentEasiCal）校正您的GPC/SEC色譜柱GPC色譜柱校準(zhǔn)的詳細(xì)信息CalibratingGPCColumnsAGuidetoBestPractice《GPC色譜柱校準(zhǔn)–最佳實(shí)踐向?qū)А?5991-2720EN)。獲取副本并查看其他有用信息請(qǐng)?jiān)L問： 色譜柱：2xPLaquagel-OHMIXED-H8m，7.5x300（部件號(hào)PL1149-洗脫液：0.2MNaNO30.01MNaH2PO4，pH流速 1.0溫度 50檢測(cè)器：AABC log 9.四種果膠的分子量

與其它樣品不同樣品D在全滲透區(qū)附近出現(xiàn)了一個(gè)強(qiáng)的正峰。該樣品為緩凝級(jí)樣品添加有緩沖液鹽進(jìn)行改性。各樣品的平均分子量見表1。表1.四種果膠樣品的平均分子量和多分散樣平均分子多分散度ABCD各樣品的分子量和多分散度(Mw/Mn)均不同PLglHIEDH8m色譜柱的寬分子量分離范圍使它們尤其適用于中高分子量的水溶性聚合物分析。使用簡(jiǎn)單的緩沖溶液作為分析果膠的流動(dòng)相可降低樣品和色譜柱之間的相互作用殼聚糖是一種自然界存在的多糖由幾丁質(zhì)通過堿性脫乙酰反應(yīng)得到幾丁質(zhì)被認(rèn)為是僅次于纖維素的含量最豐富的生物材料殼聚糖這一術(shù)語(yǔ)并不是指一種特定的化合物而是一系列含幾丁質(zhì)和殼聚糖單體的不同乙?；瘑卧墓簿畚铩ａ槍?duì)殼聚糖的主要關(guān)注點(diǎn)在于其在酸性溶液中呈現(xiàn)陽(yáng)離子狀態(tài)這種性質(zhì)與自然界其它多糖通常呈中性和帶負(fù)電荷不同。殼聚糖在藥學(xué)中的應(yīng)用包括片劑壓制、崩解、溶解。GPC/SEC可用作測(cè)定殼聚糖分子量和分子量分布的質(zhì)量控制工具我們采用包含兩根AiltPLHH8m柱的色譜柱組合對(duì)三個(gè)級(jí)別的殼聚糖進(jìn)行了分析。由于這類樣品具有陽(yáng)離子性質(zhì)因此使用強(qiáng)酸進(jìn)行配制并放置過夜助溶。用0.5M硝酸鈉緩沖液在低pH條件下對(duì)樣品進(jìn)行分析。系統(tǒng)使用同樣來自安捷倫科技公司的窄分子量分布的普魯藍(lán)多糖標(biāo)樣進(jìn)。用普魯藍(lán)標(biāo)樣校正PLaquagel-OHMIXED8μm柱的校正曲線如7所示（9頁(yè)三種殼聚糖樣品的原始數(shù)據(jù)色譜圖和平均分子量值(Mw)見圖10。由于樣品用強(qiáng)酸溶解配制因此RI檢測(cè)時(shí)觀察到一些不平衡峰（不相等正峰和負(fù)峰本分析所揭示的分子量細(xì)微差異足以改變?nèi)N殼聚糖樣品的最

色譜柱：2xPLaquagel-OHMIXED-H8m，7.5x300（部件號(hào)PL1149-洗脫液：0.5MNaNO30.01MNaH2PO4，pH流速 1.0溫度 505m檢測(cè)器：5mAA(MwB(MwC(Mw因此產(chǎn)生了DRI的不平衡圖10.三種殼聚糖樣品的原始數(shù)據(jù)色譜圖和平樣品瓶的完整性、潔凈性及一致性對(duì)精確的實(shí)驗(yàn)室操作至關(guān)重要。正因如此安捷倫為您提供了多種高質(zhì)量的樣品瓶、瓶蓋和隔墊來滿足您實(shí)驗(yàn)室的所有需求。安捷倫豐富的專業(yè)知識(shí)能幫助您做出最明智的選擇；成熟的技術(shù)支持可維持您的這種聚合物是纖維素的衍生物用作干性粘合劑在直接粉末壓制中或濕法制粒后加入。甲基纖維素還可用于治療便秘。我們用PLaquae-OH柱對(duì)兩種甲基纖維素樣品進(jìn)行了SC分析并將計(jì)算得到的平均分子量與廠商的粘度值進(jìn)行了對(duì)比。采用安捷倫的普魯藍(lán)多糖標(biāo)樣進(jìn)行校正。圖1顯示了兩種甲基纖維素的原始數(shù)。2。

色譜柱：PLaquagel-OH608m，7.5x300（部件號(hào)PL1149-（部件號(hào)PL1149-洗脫液：0.05MNaH2PO40.25MNaCl，pH流速 1.0溫度 50表2.兩種甲基纖維素樣品的粘度和分子量范甲基甲基纖維素樣AB粘度范圍854000 log 圖11.兩種甲基纖維素通過AgilentPLaquagel-OH色譜柱組合所得的原始數(shù)據(jù)色包衣明我們可通過明膠的體積排阻色譜分析得到重要的分子量信息這些分子量信息決定了該聚合物的物理性質(zhì)（例如凝膠性質(zhì)）。本研究使用的是線性PLaquagel-OHMIXED-H8μm柱。使用簡(jiǎn)單的緩沖溶液作為洗脫液用于明膠的分析減小樣品和色譜柱之間的相互作用確保獲得良好的色譜圖。采用光散射技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)這項(xiàng)技術(shù)無需校正色譜柱即可提供絕使用緩沖液作為洗脫液通過添加0.1M的NaOH調(diào)節(jié)其pH值。用洗脫液將樣品精確配制成1.0mg/mL的溶液。首先使用安捷倫普魯藍(lán)多糖標(biāo)樣校正光散射檢測(cè)器標(biāo)樣Mp186000通過示差折光色譜圖如果已知明膠樣品的配制濃度則可以計(jì)dn/dc。然后使用該dn/dc數(shù)值根據(jù)從90到15的光散射對(duì)于使用雙角度光散射信號(hào)分析的明膠樣品RI和光散射數(shù)據(jù)也用于執(zhí)行SEC逐段式分子量的計(jì)算?？偡肿恿恐禐?74000(90°)、189850(15°)和184800(SEC)。圖12顯示了明膠的RI和90°與15°光散射數(shù)據(jù)

光散射檢測(cè)對(duì)較高分子量的物質(zhì)更為敏感RI色譜圖相比90°和15°光散射色譜圖更偏向于高分子量范圍。由于樣品、溶劑和洗脫液之間的組成差異RI色譜中還包含負(fù)峰這在光散色譜柱：2xPLaquagel-OHMIXED-H8m，7.5x300（部件號(hào)PL1149-洗脫液：Water0.2MNaNO30.01MNaH2PO4，pH流速 1.0 1260Infinity多檢測(cè)器GPC/SEC系統(tǒng)，等度泵，手動(dòng)進(jìn)樣器，雙角度雙角度光散射響示差折光響折射率- 圖12.明膠的示差折光和90°與15°光散射數(shù)據(jù)，通過兩根AgilentPLaquagel-OHMIXED-H柱組合分析而得纖維素是由乙?；⒍□；蜞彵蕉姿岣M(jìn)行酯化形成的一類混合酯類可用作膠囊和片劑的緩釋包衣料。醋酸纖維素可溶于有限的幾種溶劑。在本研究中我們用二甲基乙酰胺作為溶劑。色譜柱：3xPLgel10μmMIXED-B，7.5x300洗脫液：DMAc+0.5%LiBr流速 1.0上樣量：0.2w/v，100溫度 60系統(tǒng) 1260InfinityGPC/SEC系統(tǒng) 圖13.采用AgilentPLgel10μmMIXED-B柱分析醋酸纖維 Agilent1260InfinityGPC/SEC系崩解羧甲基纖維素等崩解劑在遇濕時(shí)會(huì)膨脹、溶解，使片劑崩開并釋放出活性成分?？蓪?duì)崩解劑進(jìn)行改性，或?qū)⒉煌澜鈩┻M(jìn)行組合，使片劑在一段時(shí)間內(nèi)緩慢溶解，起到緩慢釋放活性成分的作用。線的細(xì)微差異。羧甲基纖維素(CMC)等聚合物材料由于分子量存tLH08m和PLalOH08m柱是區(qū)分CMC分子量細(xì)微差異的理想選擇因?yàn)樗鼈兙哂械团抛柘?、高孔隙體積和高柱效（>3500塔板數(shù)米）的特點(diǎn)可實(shí)現(xiàn)最高分離度。在本例中我們將兩種不同的PLaquagel-OH串聯(lián)在一起分子量覆蓋范圍為104到107。使用安捷倫普魯蘭標(biāo)樣對(duì)色譜柱進(jìn)行校準(zhǔn)。

色譜柱：PLaquagel-OH608m，7.5x300（部件號(hào)PL1149-1xPLaquagel-OH408μm，7.5x300洗脫液：0.5MNa2SO4流速 1.0檢測(cè)器： log 圖14.通過AgilentPLaquagel-OH柱得到的原始數(shù)據(jù)色譜圖，顯示相同粘度范圍的三環(huán)糊精–采用反相HPLC環(huán)糊精(CD)為環(huán)狀低聚糖通常由6、7或8個(gè)葡萄糖單元組成即α-β-或γ-。帶相對(duì)疏水的內(nèi)腔和親水性外緣。環(huán)糊精的結(jié)構(gòu)使其能與一定大小的分子發(fā)生相互作用形成包合物。制藥行業(yè)利用這一性質(zhì)將環(huán)糊精作為藥物載體用。環(huán)糊精常用于疏水性藥物分子以改善目標(biāo)化合物的溶解性、穩(wěn)定性、生物利用度和溶出度。環(huán)糊精的類型決定了其對(duì)目標(biāo)分子性質(zhì)的改變程度。此外所用環(huán)糊精的選擇還取決于劑型、給藥途徑的需要以及攜帶藥物所需要的溶解能力等。環(huán)糊精的使用促進(jìn)了疏水性藥物的溶出為不溶解性藥物的開發(fā)提供了輸送系。因此環(huán)糊精的表征對(duì)于制藥部門來說非常重要。由于環(huán)糊精UV發(fā)色團(tuán)對(duì)其進(jìn)行HPLC分析比較困難而且由于常常需要進(jìn)行梯度洗脫因此無法使用RI檢測(cè)。蒸發(fā)光散射檢測(cè)(ELSD)為環(huán)糊精的測(cè)定提供了一種良好的選擇因?yàn)樵摍z測(cè)方法不依賴于化合物的光學(xué)性質(zhì)。由于這個(gè)原因ELSD通常被認(rèn)Agilent1260Infinity蒸發(fā)光散射檢測(cè)器可以檢測(cè)任何揮發(fā)性弱于流動(dòng)相的化合物從而可通過一次色譜分析檢測(cè)到藥物制劑中的各個(gè)組分。AgilentELSD還可以在藥物化合物所需要的低溫下進(jìn)行操作因?yàn)槠洳僮鳒囟扰c流動(dòng)相無關(guān)。圖15顯示了使用ELS檢測(cè)分析含環(huán)糊精和活性藥物布洛芬的藥物

色譜柱：C185μm，4.6x150A：水洗脫液B：流速 1.0進(jìn)樣量：20梯度 流動(dòng)相B在5分種內(nèi)從0%增加至檢測(cè)器：1260Infinity蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（霧化溫30°C，蒸發(fā)溫度=50°C，氣體流速=1.0SLM）33峰標(biāo)α-環(huán)糊β-環(huán)糊布洛12AgilentUV,221 圖15.AgilentELS檢測(cè)結(jié)果揭示了環(huán)糊精的存圖16中顯示了分析同一制劑時(shí)AgilentELSD低溫分析的優(yōu)勢(shì)。實(shí)驗(yàn)在30°C下使用該儀器分析了該樣品混合物的真實(shí)組成。但在50°C溫度下半揮發(fā)的布洛芬存在損失因此測(cè)得的活性藥物濃度會(huì)低于實(shí)際值。因此AgilentELSD僅通過一次色譜分析即色譜柱：C185μm，4.6x150A：水洗脫液B：流速 1.0進(jìn)樣量 20梯度 流動(dòng)相B在5分種內(nèi)從50%增加至檢測(cè)器：1260Infinity蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（霧化30°C，蒸發(fā)溫度=50°C，氣體流速=1.0SLM）α-環(huán)糊β-環(huán)α-環(huán)糊β-環(huán)糊布洛50330 圖16.AgilentELSD的低溫操作顯示了藥物制

由于AgilentELSD對(duì)弱UV吸收或無UV發(fā)色團(tuán)的化合物也非常敏感因此可測(cè)得環(huán)糊精和布洛芬的真實(shí)組成。該儀器在針對(duì)半揮發(fā)性化合物的低溫HPLC應(yīng)用方面優(yōu)于其它ELSD其創(chuàng)新性的設(shè)計(jì)體現(xiàn)了新一代的ELSD技術(shù)為各種HPLC應(yīng)用提供了優(yōu)化性能。給藥載體材傳統(tǒng)的給藥系統(tǒng)（如口服避孕藥丸）有重大缺陷–活性成分呈非線性釋放，攝入初期一般劑量很大，隨著藥物被代謝劑量將持續(xù)遞減。這種類型的釋放曲線效率很低，或很可能無效。理想的狀態(tài)應(yīng)該是：攝入體內(nèi)的活性化合物在治療過程中應(yīng)保持恒定水平。體外控釋給藥，實(shí)現(xiàn)線性劑量色譜柱：2色譜柱：2xPLgel5μmMIXED-C，7.5x300洗脫液：THF（穩(wěn)定后）流速 1.0進(jìn)樣量：200~檢測(cè)器：0聚己內(nèi)酰胺是一種眾所周知的生物降解聚合物其酯鍵可在體內(nèi)藥物將隨著聚合物基質(zhì)的降解得到持續(xù)釋放。圖17所示為使用兩譜圖。聚合物洗脫出一個(gè)寬峰平均分子量為80000g/mol多分散度為2.5。聚合物寬峰后有一組大的正、負(fù)峰系統(tǒng)峰。這是假峰在示差折17.AgilentPLgelMIXED-C柱分析所得凝膠滲透色譜顯示了聚己內(nèi)酰胺的寬聚乳酸羥基乙酸共聚物–梯度聚合物洗脫色聚乳酸及其與乙交酯的共聚物最初設(shè)計(jì)用于生物可降解縫合線。但人們發(fā)現(xiàn)其在給藥系統(tǒng)中有更廣泛的用途因?yàn)樗哂懈淖兓钚猿煞炙幋鷦?dòng)力學(xué)性質(zhì)和保護(hù)其在體內(nèi)不被降解的功能。本示例介紹了使用梯度聚合物洗脫色譜(GPEC)對(duì)乳酸和乙交酯規(guī)共聚物進(jìn)行的成分分析。GPEC為通用術(shù)語(yǔ)指在由兩種溶劑構(gòu)成的梯度色譜條件下分析聚合物。GC分析可用于對(duì)一系列分子量不同的聚合物進(jìn)行分離更常用于分離化學(xué)組成不同的聚合物。常 化學(xué)組成的分布是由聚合反應(yīng)的不均一性或單體共聚反應(yīng)GPEC實(shí)驗(yàn)所用的設(shè)備與傳統(tǒng)梯度LC技術(shù)使用的相同：二元梯度泵、進(jìn)樣閥、反相或正相HPLC色譜柱（雖然GPEC已采用全惰性材料）以及對(duì)流動(dòng)相成分不敏感的檢測(cè)器（通常為蒸發(fā)光散射檢測(cè)器。分析中使用的梯度通常是由針對(duì)該聚合物的熱力學(xué)良好溶劑和熱力學(xué)不良溶劑組成的二元系統(tǒng)。首先將熱力學(xué)不良溶劑引入系統(tǒng)。將要研究的聚合物樣品溶解于良好溶劑中注入色譜柱然后開始以熱力學(xué)不良溶劑向熱力學(xué)良好溶劑的方向轉(zhuǎn)移進(jìn)行梯度洗脫。分析開始時(shí)熱力學(xué)不良溶劑占梯度主要成分聚合物會(huì)從溶液中沉淀出來。隨著梯度洗脫的進(jìn)行當(dāng)達(dá)到熱力學(xué)良好的條件時(shí)聚合物會(huì)重新溶解。當(dāng)聚合物溶于溶液中時(shí)會(huì)與色譜柱填料表面發(fā)生相互作用其相互作用的機(jī)理取決于所

體積排阻機(jī)制使聚合物相對(duì)于溶劑前沿保留或加速洗脫。聚合對(duì)于溶劑前沿保留在色譜柱上則聚合物會(huì)保留在溶解度良好的區(qū)域由分子量控制分離（與典型的反相或正相HPLC實(shí)驗(yàn)相似。但是如果聚合物相對(duì)于良好溶劑前沿加速洗脫樣品則進(jìn)入到溶解度差的區(qū)域會(huì)重新沉淀。溶劑前沿將繼續(xù)沿色譜柱下行從而再次達(dá)到良好溶劑條件聚合物再溶解。在此條件下這一過程經(jīng)過若干次重復(fù)不斷沉淀/溶解直到聚合物被洗脫出色譜柱。樣品的洗脫由聚合物成分在兩種流動(dòng)相中的相對(duì)溶解度控制從圖18顯示了共聚物的通用結(jié)構(gòu)。本例分析中我們以四氫呋喃作為熱力學(xué)良好溶劑甲醇作為熱力學(xué)不良溶劑。丙丙交乙交末端基起始片圖18.聚乳酸羥基乙酸無規(guī)共聚物的結(jié)19所示為：99甲醇保持2分鐘接著在10分鐘的時(shí)間內(nèi)氫呋喃由1%到99%梯度條件下洗脫所得共聚物的色譜

圖20顯示了乙交酯百分含量與樣品分子量和保留時(shí)間的相關(guān)性。顯然共聚物的分子量與保留時(shí)間不存在相關(guān)性。但共聚物中的乙交酯百分比與保留時(shí)間存在線性關(guān)系說明實(shí)現(xiàn)了成分分離。色譜柱：AgilentPLRP-S100?5m，4.6x150（部件號(hào)PL1110-%logR2=洗脫液%logR2=流速 1.0進(jìn)樣量：20%溫度 %檢測(cè)器：1260Infinity蒸發(fā)光散射檢

loglog系統(tǒng)系統(tǒng) 1260Infinity模%乙交酯含2

圖20.乙交酯百分含量和樣品分子量與保留時(shí)間的相關(guān)圖19.不同四氫呋喃濃度下，聚乳酸羥基乙酸共聚物的色譜

由此可見GPEC是一種檢測(cè)聚合物分子結(jié)構(gòu)的有力分析工具謹(jǐn)慎選擇流動(dòng)相和色譜柱可實(shí)現(xiàn)組成和分子量的針對(duì)性分離。對(duì)分析條件敏感度較高存在一定的缺陷要想獲得成功的GPEC實(shí)驗(yàn)必須專門設(shè)計(jì)適合每個(gè)應(yīng)用的分析條件。助懸劑和/羥乙基纖維素(HEC)廣泛用于化妝品和制藥行業(yè)例如作為殺菌劑的載體凍膠。它是一種極為有用的非離子型聚合物可用作增稠劑、穩(wěn)定劑、乳化劑或分散劑且易溶于熱水和冷水。HEC可以用水性GPC進(jìn)行分析但更多時(shí)候是用極性有機(jī)溶劑于這類纖維素的分析由于樣品某些材料屬于離子型因此實(shí)驗(yàn)中添加LiBr改性劑用以防止樣品聚集（圖21）。采用PEO/PEG標(biāo)樣作為校正物聚苯乙烯可溶于DMF但會(huì)表現(xiàn)出一定吸附。表3列出了三種羥乙基纖維素樣品的分散度和平均分子量。

色譜柱：PLgel5μmMIXED-C，7.5x300洗脫液：DMF+0.1%LiBr流速 1.0溫度 50檢測(cè)器：BAC表3.三種羥乙基纖維素的平均分子量和分BAC樣平均分子樣平均分子 多分散

分子 圖21.使用AgilentPLgel5μmMIXED-C柱分析三種羥乙基纖實(shí)驗(yàn)采用PLaquagel-OH柱對(duì)三種羥乙基纖維素樣品進(jìn)行體積排阻分析并將計(jì)算的平均分子量與廠商標(biāo)注的粘度值進(jìn)行了對(duì)比。相關(guān)性如表4所示。樣平均分子粘度范表4.三樣平均分子粘度范A75B250C1500色譜柱：PLaquagel-OH608m，7.5x300（部件號(hào)PL1149-（部件號(hào)PL1149-洗脫液：0.05MNaH2PO40.25MNaCl，pH流速 1.0溫度 50ABC檢測(cè)器：ABC

改變HEC的疏水性使分子量發(fā)生了變化這些改變可以采用安捷倫的PLaquagel-OH40和PLaquagel-OH608μm柱進(jìn)行體積排阻在本例中我們將兩種不同的AgilentPLaquagel-OH柱串聯(lián)在一起分子量覆蓋范圍為104到107。使用安捷倫普魯蘭標(biāo)樣對(duì)色圖23為疏水性改變前后HEC樣品的分子量分布重疊圖。樣品為HEC。樣品B為疏水性改變后的樣品A樣品：改性前后的羥乙基纖維色譜柱：PLaquagel-OH608m，7.5x300（部件號(hào)PL1149-（部件號(hào)PL1149-洗脫液：0.05MNaH2PO40.25MNaCl，pH流速 1.0溫度 50檢測(cè)器：A0.0A0.0

log

圖23.改性前后羥乙基纖維素樣品分子量分布圖22.使用AgilentPLaquagel-OH柱分析羥乙基纖維素混合物所得原始數(shù)據(jù)色譜更多安捷倫賦形劑聚合物解決方安捷倫為各種聚合物分析提供有各種各樣的工具包，為制藥行業(yè)帶來更多的價(jià)值。理化性質(zhì)表RS和。S和s。通過將色譜法和其他分析方法結(jié)合可以顯著增加聚合物表征的信息量。安捷倫提供了兩種創(chuàng)新的接口將凝膠滲透色譜(GPC)與傅里葉變換紅外光譜(FTIR)相結(jié)合可在一次測(cè)量中快速確定對(duì)于揮發(fā)性雜質(zhì)和殘留雜質(zhì)安捷倫提供有行業(yè)內(nèi)選擇范圍最廣泛的氣相色譜(GC)和氣質(zhì)聯(lián)用(GC/MS)系統(tǒng)、技術(shù)支持和備件。因此無論您需要進(jìn)行復(fù)雜研究的靈活而可靠的硬件和軟件還是用于常規(guī)生產(chǎn)環(huán)境的簡(jiǎn)便耐用型系統(tǒng)亦或是在工廠或現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行實(shí)時(shí)測(cè)量所需的快速、耐用的便攜式解決方案我們都能提供ICP-AgilentPoroshell120色譜對(duì)于重金屬雜質(zhì)AgiletxCS該系統(tǒng)具有安捷倫獨(dú)特的高基質(zhì)進(jìn)樣接口(H)和3反應(yīng)池。7700x憑借高溫等離子體（降低氧化物干擾、基質(zhì)耐受接口和9AgilentPoroshell120色譜為滿足USP1法、2法、5法和6法溶出度分析的要求可使用Agilent708-DS溶出度儀3法可使用AgilentBIO-DIS往復(fù)筒溶出度儀。我們7法使用安捷倫往復(fù)支架7法溶出度儀制劑使Agilent400-DS7法溶出度儀。

LC液相色譜和氣質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)都是適用于賦形劑聚合物中半揮發(fā)性雜質(zhì)分析的理想技術(shù)?；A(chǔ)分析或確證（通過已知分子量確證）可使用AetBysit600精確質(zhì)量TFC/MS系統(tǒng)。對(duì)于更復(fù)雜的未知聚合物的結(jié)構(gòu)分析Agilent6500精確質(zhì)量QTOFLC/MS系統(tǒng)可提供卓越的數(shù)據(jù)質(zhì)量并提供繪制曲線、鑒別、表征和定量等先進(jìn)分析。與MssHtr軟件工具聯(lián)用使您充滿信心。AgilentPoroshell120柱可在主流液相色譜儀器壓力范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的高分離度分離使現(xiàn)有液相色譜儀能享有亞2微米性能的優(yōu)勢(shì)。Poroshell色譜柱可以在現(xiàn)有儀器上實(shí)現(xiàn)高分離度和高速分離GPC/SEC系統(tǒng)配下列表格（表5-11）將幫助您選擇滿足您應(yīng)用需求的合適系統(tǒng)，這些表格列出了必要的部件和Agilent1260InfinityGPC/SEC表5.Agilent1260InfinityGPC/SEC系統(tǒng)針對(duì)不同應(yīng)用的樣品傳輸模塊要樣品傳輸模1260Infinity等度1260Infinity柱溫1260Infinity標(biāo)準(zhǔn)或1260Infinity手動(dòng)進(jìn)樣溶劑脫推薦用于80°C可容納兩7.5x300mmGPC色譜GPC/SEC的典型進(jìn)樣量20、50、100200應(yīng)粘合如：聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二(PEG)、果膠、殼聚包衣如：明膠、醋酸纖維素、聚乙二醇(PEG)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚醋酸乙烯酞酸酯)崩解如：羧甲基纖維素(CMC)、給藥載體材基乙酸共聚物、乙基纖維增稠如：羥乙基纖維素*聚乙烯吡咯烷酮、淀粉和醋酸纖維素所必

注必可檢測(cè)1260Infinity示差折光檢測(cè)1260Infinity示差折光或1260Infinity多波長(zhǎng)檢8L流通池接用于單波長(zhǎng)或多波長(zhǎng)分應(yīng)粘合如：聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二(PEG)、果膠、殼聚包衣如：明膠、醋酸纖維素、聚乙二醇(PEG)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚醋酸乙烯酞酸酯)崩解如：羧甲基纖維素(CMC)、給藥載體材基乙酸共聚物、乙基纖維素、甲基丙烯酸酯類共聚增稠如：羥乙基纖維素控制、采集和分析 Agilent Agilent軟 儀器驅(qū)動(dòng)程專門用于GPC計(jì)算的提供儀器控制和數(shù) *至少需配備以下檢測(cè)器中的一個(gè)：1260Infinity示差折光檢測(cè)器、1260Infinity可變波長(zhǎng)檢測(cè)器或1260Infinity多波長(zhǎng)檢測(cè)器，

注必可AitHPLC備件按照嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行設(shè)計(jì)、測(cè)試和生產(chǎn)析效率。這意味著您的液相色譜或液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)將能夠快速提供卓越的定性和定量結(jié)果、一致的重現(xiàn)性和可靠性以及超高靈敏度的檢測(cè)性能。針對(duì)您實(shí)驗(yàn)室中配置的知名品牌的高效液相色譜和氣相色譜儀器安捷倫提供有完整系列的CrossLabCrossLab適用于布魯克/瓦里安、CTC、珀金埃爾默、島津、賽默/戴安、沃特世以及其他公司的儀器。與所有安捷倫產(chǎn)品一樣用戶將享有安捷倫90天的產(chǎn)品質(zhì)量保障。Agilent1260Infinity多檢測(cè)GPC/SEC表7.Agilent1260Infinity多檢測(cè)器GPC/SEC系統(tǒng)針對(duì)不同應(yīng)用的樣品傳輸模1260Infinity等度1260Infinity標(biāo)準(zhǔn)型1260Infinity柱溫箱1260Infinity標(biāo)準(zhǔn)1260Infinity手動(dòng)進(jìn)樣GPC/SEC要求等度液80°C可容納7.5x300mmGPC色譜柱GPC/SEC的典型進(jìn)樣量應(yīng)粘合如：聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇(PEG)、果膠、殼聚包衣如：明膠、醋酸纖維素、聚乙二醇(PEG)、羥丙基甲基纖維素PMC)烯酞酸酯VAP)崩解給藥載體材如：聚己內(nèi)酰胺、聚乳酸羥基乙酸共聚物、乙基纖維素、甲基丙烯酸酯類共聚物增稠如：羥乙基纖維素*強(qiáng)烈推**聚乙烯吡咯烷酮、淀粉和醋酸纖維素所必

注必可表8.Agilent1260Infinity多檢測(cè)器GPC/SEC系統(tǒng)針對(duì)不同應(yīng)用的檢測(cè)器要檢測(cè)1260多檢測(cè)器套12601260Infinity1260或包括用于數(shù)據(jù)采示差折光檢用于構(gòu)象信對(duì)于單波長(zhǎng)或多和手動(dòng)控制的集控制模分析，只采集一個(gè)通的信應(yīng)粘合如：聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇(PEG)、果膠、殼聚包衣如：明膠、醋酸纖維素、聚乙二醇(PEG)、羥丙基甲基纖維素PMC)烯酞酸酯VAP)崩解給藥載體材如：聚己內(nèi)酰胺、聚乳酸羥基乙酸共聚物、乙基纖維素、甲基丙烯酸酯類共聚物增稠如：羥乙基纖維素*至少需配備以下檢測(cè)器中的一個(gè)：1260InfinityMDS示差折光檢測(cè)器或1260InfinityMDS粘度計(jì)