沉淀分離技術(shù)課件

現(xiàn)代食品分離技術(shù)第二章沉淀分離技術(shù)現(xiàn)代食品分離技術(shù)第二章沉淀分離技術(shù)1知識(shí)點(diǎn)：鹽析法，等電點(diǎn)沉淀法，有機(jī)溶劑沉淀法，選擇性變性沉淀法，金屬離子沉淀法。重點(diǎn)：上述幾種沉淀方法的概念、原理及其適用范圍；鹽析法的影響因素對(duì)沉淀效果的影響，并能根據(jù)實(shí)際情況予以靈活應(yīng)用和選擇。難點(diǎn)：常用沉淀方法的靈活運(yùn)用知識(shí)點(diǎn)：鹽析法，等電點(diǎn)沉淀法，有機(jī)溶劑沉淀法，選擇性變性沉2第一節(jié)沉淀分離的目的及其方法1.沉淀定義：溶液中的溶質(zhì)在適當(dāng)條件下由液相變成固相而析出的過(guò)程。2.沉淀目的：濃縮和去雜，液相變固相3.應(yīng)用要求：選擇性，目標(biāo)成分的活性和化學(xué)結(jié)構(gòu)的不破壞性，無(wú)有害殘留4.沉淀分類(lèi)：無(wú)機(jī)沉淀劑、有機(jī)沉淀劑、非離子多聚體沉淀劑、等電點(diǎn)沉淀、共沉淀分離、變性沉淀分離第一節(jié)沉淀分離的目的及其方法1.沉淀定義：溶液中的溶質(zhì)在適3很多金屬鹽類(lèi)的溶解性比較低，如硫酸鹽、碳酸鹽、草酸鹽。所以，當(dāng)添加適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)沉淀劑形成上述各種化合物時(shí)，便會(huì)形成沉淀。第二節(jié)無(wú)機(jī)沉淀劑沉淀分離法很多金屬鹽類(lèi)的溶解性比較低，如硫酸鹽、碳酸鹽、草酸鹽。所以，4第二節(jié)無(wú)機(jī)沉淀劑沉淀分離法一、金屬鹽類(lèi)沉淀分離法利用金屬離子與酸根在形成鹽類(lèi)時(shí)溶解度低而得以沉淀分離。檸檬酸工業(yè)中鈣鹽法

第一步鈣鹽中和2C6H8O7.H2O+CaCO3

→Ca3(C6H5O7)2.4H20+CO2+H2O第二步酸解Ca3(C6H5O7)2.4H20+3H2SO4+H2O→2C6H8O7.H2O+3CaSO4.H2O第二節(jié)無(wú)機(jī)沉淀劑沉淀分離法一、金屬鹽類(lèi)沉淀分離法5谷氨酸能與Zn2+、Ca2+、Cu2+等金屬離子作用生成谷氨酸鹽沉淀。此類(lèi)沉淀影響因素主要溫度和pH值常有共沉淀作用和吸附作用發(fā)生，因此分離作用不是很理想，一般用作粗分離。谷氨酸能與Zn2+、Ca2+、Cu2+等金屬離子作用生成6二、鹽析應(yīng)用：蛋白質(zhì)和酶的粗提純特點(diǎn)：成本低、操作簡(jiǎn)單、安全、對(duì)生物活性成分破壞作用小。主要內(nèi)容：1、原理鹽溶鹽析2、鹽的選擇3、影響鹽析效果的因素4、脫鹽處理二、鹽析71.鹽溶與鹽析的原理（1）鹽溶在低濃度下，蛋白質(zhì)和酶類(lèi)的溶解度隨鹽濃度的提高而增大，稱為鹽溶。主要是中性鹽離子對(duì)蛋白質(zhì)分子表面活性基團(tuán)及水活度的影響。a無(wú)機(jī)鹽離子在蛋白質(zhì)表面上吸附，使顆粒帶相同電荷而相互排斥；b無(wú)機(jī)鹽離子增加了蛋白質(zhì)的親水性，改善了與水膜的結(jié)合，增加了蛋白質(zhì)分子與溶劑分子相互作用，使蛋白質(zhì)濃度增加。1.鹽溶與鹽析的原理（1）鹽溶8分子在其等電點(diǎn)時(shí)，容易互相吸引，聚合成沉淀，加入鹽離子會(huì)破壞這些吸引力，使分子散開(kāi)，溶入水中。分子在其等電點(diǎn)時(shí)，容易互相吸引，聚合成沉淀，加入鹽離子會(huì)破壞9（2）鹽析原理①鹽離子與蛋白質(zhì)分子爭(zhēng)奪水分子，降低了用于溶解蛋白質(zhì)的有效水量，減弱了蛋白質(zhì)的水合程度，破壞了蛋白表面的水化膜，導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度下降；②鹽離子電荷的中和作用，使蛋白質(zhì)溶解度下降；③鹽離子引起原本在蛋白質(zhì)分子周?chē)行蚺帕械乃肿拥臉O化，使水活度降低。（2）鹽析原理10鹽析原理圖鹽析原理圖11蛋白質(zhì)分子表面的疏水性區(qū)域，都聚集許多水分子，當(dāng)鹽類(lèi)加入時(shí)，這些水分子被抽出，以便與鹽離子進(jìn)行水合，暴露出疏水性區(qū)域互相結(jié)合，形成沉淀。蛋白質(zhì)分子表面的疏水性區(qū)域，都聚集許多水分子，當(dāng)鹽類(lèi)加入時(shí)，12蛋白質(zhì)的溶解度與溶液中鹽的離子強(qiáng)度之間的關(guān)系（Cohn表達(dá)式）lg(S/S0)=-KsIlgS=lgS0-KsIS0：蛋白質(zhì)在純水中的溶解度；S：蛋白質(zhì)在離子強(qiáng)度為I的溶液中的溶解度；Ks：鹽析常數(shù)；I：離子強(qiáng)度注：M表示溶液中各種離子的物質(zhì)量濃度，z為各種離子的價(jià)數(shù)。蛋白質(zhì)的溶解度與溶液中鹽的離子強(qiáng)度之間的關(guān)系（Cohn表達(dá)式13當(dāng)溫度和pH值一定時(shí)，對(duì)于某一溶質(zhì)來(lái)說(shuō)，其S0是一個(gè)常數(shù)，即lgS0=ββ的大小取決于溶質(zhì)的性質(zhì)，與溫度和pH有關(guān)。β分段鹽析法：保持溶液的離子強(qiáng)度不變，改變?nèi)芤旱膒H和溫度，使不同的溶質(zhì)在不同的pH和溫度下有最大的析出.當(dāng)溫度和pH值一定時(shí)，對(duì)于某一溶質(zhì)來(lái)說(shuō)，其S0是一個(gè)常數(shù)，即14Ks取決于鹽的性質(zhì)，并且與離子的價(jià)數(shù)、平均半徑有關(guān)。高價(jià)陰離子有較高的Ks，高價(jià)陽(yáng)離子有較低的Ks。Ks越大，鹽析效果越好。Ks分段鹽析法：在一定的pH和溫度下，改變鹽離子的離子強(qiáng)度I值，使不同的溶質(zhì)在不同的離子強(qiáng)度下有最大的析出。Ks取決于鹽的性質(zhì)，并且與離子的價(jià)數(shù)、平均半徑有關(guān)。高價(jià)陰離152、鹽析分離法中鹽的選擇蛋白質(zhì)的鹽析中，以硫酸銨、硫酸鈉應(yīng)用最廣。（1）硫酸銨的特點(diǎn)：溫度系數(shù)小：溫度變化引起溶液性質(zhì)的變化不大；溶解度大；對(duì)蛋白質(zhì)變性影響??；價(jià)格低。但緩沖能力小；含氮，影響蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。2、鹽析分離法中鹽的選擇蛋白質(zhì)的鹽析中，以硫酸銨、硫酸鈉應(yīng)用16（2）無(wú)機(jī)鹽種類(lèi)的影響不同鹽溶液中碳氧血紅蛋白的溶解度與離子強(qiáng)度的關(guān)系（25℃）

(○)NaCl;(▼)KCl;(?)MgSO4;(▲)NH4)SO4;(●)Na2SO4;(□)K2SO4;(■)檸檬酸三鈉（2）無(wú)機(jī)鹽種類(lèi)的影響不同鹽溶液中碳173、影響鹽析效果的因素（1）蛋白質(zhì)濃度：2.5~3%蛋白質(zhì)濃度高，鹽用量少，但是共沉淀導(dǎo)致選擇性下降。（2）離子強(qiáng)度的影響：不同類(lèi)型的蛋白質(zhì)，鹽析時(shí)所要求的離子強(qiáng)度各有不同。逐漸增加離子強(qiáng)度，分步鹽析?？梢泽w現(xiàn)出對(duì)蛋白質(zhì)的選擇性。各種蛋白質(zhì)的Ks相差越大，效果越好。3、影響鹽析效果的因素（1）蛋白質(zhì)濃度：2.5~3%18（3）不同離子類(lèi)型對(duì)鹽析效果的影響離子半徑小、帶較高電荷的離子鹽析效果好！磷酸鉀＞硫酸鈉＞硫酸銨＞檸檬酸鈉＞硫酸鎂（4）pH值的影響一般在等電點(diǎn)下進(jìn)行（5）溫度的影響通常在常溫下操作，對(duì)于敏感的酶類(lèi)，在低溫下操作。（3）不同離子類(lèi)型對(duì)鹽析效果的影響19鹽析操作鹽析操作204、脫鹽處理透析法：半透膜，具有讓小分子和水?dāng)U散而不斷通過(guò)，直到膜內(nèi)外濃度達(dá)到平衡。電滲析法葡萄糖凝膠過(guò)濾法4、脫鹽處理215.硫酸銨飽和度的調(diào)整方法1.添加硫酸銨固體在不宜增加溶液體積時(shí)應(yīng)用，可能導(dǎo)致局部濃度過(guò)高2.添加飽和硫酸銨溶液V-需加入的飽和硫酸氨溶液的體積；V0-待鹽析溶液的體積S1-原來(lái)溶液的飽和度S2-需要達(dá)到的飽和度5.硫酸銨飽和度的調(diào)整方法1.添加硫酸銨固體22第三節(jié)有機(jī)沉淀劑沉淀分離法一、基本原理及特點(diǎn)1.無(wú)機(jī)沉淀劑沉淀法的缺點(diǎn)：分離的選擇性和靈敏度都比較差。2.有機(jī)溶劑沉淀劑的特點(diǎn)：（1）選擇性比較高；（2）沉淀后所得產(chǎn)品不需脫鹽（3）缺點(diǎn)是對(duì)某些生物活性的大分子物質(zhì)如酶類(lèi)具有失活作用。第三節(jié)有機(jī)沉淀劑沉淀分離法一、基本原理及特點(diǎn)233.有機(jī)溶劑沉淀法的原理（1）有機(jī)溶劑改變了溶液的介電常數(shù)。增強(qiáng)了溶質(zhì)分子間的靜電作用力，降低了溶質(zhì)分子與溶劑分子間的相互作用，導(dǎo)致溶質(zhì)分子間發(fā)生聚合而析出。（2）脫水作用。有機(jī)溶劑必須溶解在水溶液中，這樣就減少了溶質(zhì)與水的作用，因而使溶質(zhì)脫水而相互聚集沉淀。3.有機(jī)溶劑沉淀法的原理（1）有機(jī)溶劑改變了溶液的介電常數(shù)。24二、有機(jī)沉淀劑的選擇

（一）沉淀金屬離子的有機(jī)沉淀劑主要有生成螯合物沉淀的有機(jī)沉淀劑、生成締合物的有機(jī)沉淀劑以及生成三元配合物的有機(jī)沉淀劑。（1）羥基肟類(lèi)，具有-C=C-結(jié)構(gòu)，能與二價(jià)金屬離子形成螯合物。（2）氨基酸類(lèi)，像鄰氨基苯甲酸等幾種芳香族氨基酸，能與銅離子、銀離子等形成絡(luò)合物而沉淀。（二）沉淀有機(jī)成分的有機(jī)沉淀劑使用有機(jī)溶劑沉淀水溶液中的氨基酸、蛋白質(zhì)、酶、核酸、多糖、果膠等。食品中蛋白質(zhì)和酶的沉淀多用乙醇。二、有機(jī)沉淀劑的選擇（一）沉淀金屬離子的有機(jī)沉淀劑25（三）影響沉淀效果的因素1.金屬離子的影響2.鹽濃度的影響3.溶質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量與有機(jī)溶劑用量的影響4.溫度的影響5.pH值的影響（三）影響沉淀效果的因素26第四節(jié)等電點(diǎn)沉淀分離法等電點(diǎn)：兩性離子所帶電荷因溶液的pH值不同而改變，當(dāng)兩性離子正負(fù)電荷數(shù)值相等時(shí)，溶液的pH值即其等電點(diǎn)。利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低而各種蛋白質(zhì)又具有不同等電點(diǎn)的特別進(jìn)行分離的方法，稱為等電點(diǎn)沉淀法。第四節(jié)等電點(diǎn)沉淀分離法等電點(diǎn)：兩性離子所帶電荷因溶液的pH27但在等電點(diǎn)時(shí)，各種蛋白質(zhì)仍有一定的溶解度而使沉淀不完全，同時(shí)許多蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)十分接近，故單獨(dú)使用此法效果不理想，分辨力也差。

大多用于提取后去除雜蛋白，即利用變動(dòng)提取液的pH值使某些與待提純的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)相距較大的雜蛋白從溶液中沉淀出。實(shí)際工作中常把等電點(diǎn)沉淀和鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法聯(lián)合使用。但在等電點(diǎn)時(shí)，各種蛋白質(zhì)仍有一定的溶解度而使沉淀不完全，同時(shí)28（一）氨基酸的等電點(diǎn)沉淀1.不同氨基酸的pI：精氨酸10.76賴氨酸9.74丙氨酸6.00甘氨酸5.97天門(mén)東氨酸2.77谷氨酸3.22

2.等電點(diǎn)法提取谷氨酸的工藝（一）氨基酸的等電點(diǎn)沉淀1.不同氨基酸的pI：29（二）蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)沉淀分離1.不同蛋白質(zhì)的pI：魚(yú)精蛋白12～12.4血紅蛋白7.1明膠4.7乳球蛋白5.1大豆蛋白4.32.大豆蛋白的提?。ǘ┑鞍踪|(zhì)的等電點(diǎn)沉淀分離1.不同蛋白質(zhì)的pI：30第五節(jié)其他沉淀分離技術(shù)一、變性沉淀1.變性沉淀分離的原理利用生物大分子對(duì)物理、化學(xué)等外部環(huán)境因子敏感性的差異，而選擇性的使某一組分發(fā)生變性形成沉淀。（雞蛋）2.影響蛋白質(zhì)變性的因子溫度、pH值、有機(jī)試劑、酶等。第五節(jié)其他沉淀分離技術(shù)一、變性沉淀313.變性沉淀分離方法（1）熱變性沉淀分離（2）選擇性酸堿變性沉淀分離（3）利用酶進(jìn)行變性分離（凝乳酶）（4）利用表面活性劑或有機(jī)溶劑引起變性3.變性沉淀分離方法32二、非離子型聚合物沉淀分離法1.非離子型聚合物是近年來(lái)出現(xiàn)的一類(lèi)生物大分子沉淀劑，這類(lèi)沉淀劑主要是聚乙二醇。2.機(jī)理目前還不太清楚，有如下幾種解釋:（1）聚合物與生物大分子共沉淀（2）聚合物與生物大分子以氫鍵結(jié)合形成復(fù)合物而沉淀（3）聚合物與生物大分子爭(zhēng)奪水分子，生物大分子脫水而沉淀（4）聚合物對(duì)生物大分子的空間排斥作用，使生物大分子被聚集在一起而沉淀。二、非離子型聚合物沉淀分離法1.非離子型聚合物是近年來(lái)出現(xiàn)的333.影響聚乙二醇沉淀生物大分子的因素?（1）沉淀劑相對(duì)分子質(zhì)量越大，沉淀效果越好。但大于20000粘度太大。（2）生物大分子的相對(duì)分子質(zhì)量越大，沉淀效果越好，若低于20000，效果不明顯。（3）生物大分子的濃度要適中。（4）當(dāng)溶液的離子強(qiáng)度大時(shí)，使用的沉淀劑的濃度可以顯著降低。（5）等電點(diǎn)時(shí)，所需沉淀劑的濃度也會(huì)降低。3.影響聚乙二醇沉淀生物大分子的因素?344.非離子型聚合物分離方法的優(yōu)點(diǎn)？（1）操作條件溫和（2）具有高的沉淀分離效果，成本低（3）選擇性好（4）沉淀后的多聚物易于去除，也可以回收。4.非離子型聚合物分離方法的優(yōu)點(diǎn)？35現(xiàn)代食品分離技術(shù)第二章沉淀分離技術(shù)現(xiàn)代食品分離技術(shù)第二章沉淀分離技術(shù)36知識(shí)點(diǎn)：鹽析法，等電點(diǎn)沉淀法，有機(jī)溶劑沉淀法，選擇性變性沉淀法，金屬離子沉淀法。重點(diǎn)：上述幾種沉淀方法的概念、原理及其適用范圍；鹽析法的影響因素對(duì)沉淀效果的影響，并能根據(jù)實(shí)際情況予以靈活應(yīng)用和選擇。難點(diǎn)：常用沉淀方法的靈活運(yùn)用知識(shí)點(diǎn)：鹽析法，等電點(diǎn)沉淀法，有機(jī)溶劑沉淀法，選擇性變性沉37第一節(jié)沉淀分離的目的及其方法1.沉淀定義：溶液中的溶質(zhì)在適當(dāng)條件下由液相變成固相而析出的過(guò)程。2.沉淀目的：濃縮和去雜，液相變固相3.應(yīng)用要求：選擇性，目標(biāo)成分的活性和化學(xué)結(jié)構(gòu)的不破壞性，無(wú)有害殘留4.沉淀分類(lèi)：無(wú)機(jī)沉淀劑、有機(jī)沉淀劑、非離子多聚體沉淀劑、等電點(diǎn)沉淀、共沉淀分離、變性沉淀分離第一節(jié)沉淀分離的目的及其方法1.沉淀定義：溶液中的溶質(zhì)在適38很多金屬鹽類(lèi)的溶解性比較低，如硫酸鹽、碳酸鹽、草酸鹽。所以，當(dāng)添加適當(dāng)?shù)臒o(wú)機(jī)沉淀劑形成上述各種化合物時(shí)，便會(huì)形成沉淀。第二節(jié)無(wú)機(jī)沉淀劑沉淀分離法很多金屬鹽類(lèi)的溶解性比較低，如硫酸鹽、碳酸鹽、草酸鹽。所以，39第二節(jié)無(wú)機(jī)沉淀劑沉淀分離法一、金屬鹽類(lèi)沉淀分離法利用金屬離子與酸根在形成鹽類(lèi)時(shí)溶解度低而得以沉淀分離。檸檬酸工業(yè)中鈣鹽法

第一步鈣鹽中和2C6H8O7.H2O+CaCO3

→Ca3(C6H5O7)2.4H20+CO2+H2O第二步酸解Ca3(C6H5O7)2.4H20+3H2SO4+H2O→2C6H8O7.H2O+3CaSO4.H2O第二節(jié)無(wú)機(jī)沉淀劑沉淀分離法一、金屬鹽類(lèi)沉淀分離法40谷氨酸能與Zn2+、Ca2+、Cu2+等金屬離子作用生成谷氨酸鹽沉淀。此類(lèi)沉淀影響因素主要溫度和pH值常有共沉淀作用和吸附作用發(fā)生，因此分離作用不是很理想，一般用作粗分離。谷氨酸能與Zn2+、Ca2+、Cu2+等金屬離子作用生成41二、鹽析應(yīng)用：蛋白質(zhì)和酶的粗提純特點(diǎn)：成本低、操作簡(jiǎn)單、安全、對(duì)生物活性成分破壞作用小。主要內(nèi)容：1、原理鹽溶鹽析2、鹽的選擇3、影響鹽析效果的因素4、脫鹽處理二、鹽析421.鹽溶與鹽析的原理（1）鹽溶在低濃度下，蛋白質(zhì)和酶類(lèi)的溶解度隨鹽濃度的提高而增大，稱為鹽溶。主要是中性鹽離子對(duì)蛋白質(zhì)分子表面活性基團(tuán)及水活度的影響。a無(wú)機(jī)鹽離子在蛋白質(zhì)表面上吸附，使顆粒帶相同電荷而相互排斥；b無(wú)機(jī)鹽離子增加了蛋白質(zhì)的親水性，改善了與水膜的結(jié)合，增加了蛋白質(zhì)分子與溶劑分子相互作用，使蛋白質(zhì)濃度增加。1.鹽溶與鹽析的原理（1）鹽溶43分子在其等電點(diǎn)時(shí)，容易互相吸引，聚合成沉淀，加入鹽離子會(huì)破壞這些吸引力，使分子散開(kāi)，溶入水中。分子在其等電點(diǎn)時(shí)，容易互相吸引，聚合成沉淀，加入鹽離子會(huì)破壞44（2）鹽析原理①鹽離子與蛋白質(zhì)分子爭(zhēng)奪水分子，降低了用于溶解蛋白質(zhì)的有效水量，減弱了蛋白質(zhì)的水合程度，破壞了蛋白表面的水化膜，導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度下降；②鹽離子電荷的中和作用，使蛋白質(zhì)溶解度下降；③鹽離子引起原本在蛋白質(zhì)分子周?chē)行蚺帕械乃肿拥臉O化，使水活度降低。（2）鹽析原理45鹽析原理圖鹽析原理圖46蛋白質(zhì)分子表面的疏水性區(qū)域，都聚集許多水分子，當(dāng)鹽類(lèi)加入時(shí)，這些水分子被抽出，以便與鹽離子進(jìn)行水合，暴露出疏水性區(qū)域互相結(jié)合，形成沉淀。蛋白質(zhì)分子表面的疏水性區(qū)域，都聚集許多水分子，當(dāng)鹽類(lèi)加入時(shí)，47蛋白質(zhì)的溶解度與溶液中鹽的離子強(qiáng)度之間的關(guān)系（Cohn表達(dá)式）lg(S/S0)=-KsIlgS=lgS0-KsIS0：蛋白質(zhì)在純水中的溶解度；S：蛋白質(zhì)在離子強(qiáng)度為I的溶液中的溶解度；Ks：鹽析常數(shù)；I：離子強(qiáng)度注：M表示溶液中各種離子的物質(zhì)量濃度，z為各種離子的價(jià)數(shù)。蛋白質(zhì)的溶解度與溶液中鹽的離子強(qiáng)度之間的關(guān)系（Cohn表達(dá)式48當(dāng)溫度和pH值一定時(shí)，對(duì)于某一溶質(zhì)來(lái)說(shuō)，其S0是一個(gè)常數(shù)，即lgS0=ββ的大小取決于溶質(zhì)的性質(zhì)，與溫度和pH有關(guān)。β分段鹽析法：保持溶液的離子強(qiáng)度不變，改變?nèi)芤旱膒H和溫度，使不同的溶質(zhì)在不同的pH和溫度下有最大的析出.當(dāng)溫度和pH值一定時(shí)，對(duì)于某一溶質(zhì)來(lái)說(shuō)，其S0是一個(gè)常數(shù)，即49Ks取決于鹽的性質(zhì)，并且與離子的價(jià)數(shù)、平均半徑有關(guān)。高價(jià)陰離子有較高的Ks，高價(jià)陽(yáng)離子有較低的Ks。Ks越大，鹽析效果越好。Ks分段鹽析法：在一定的pH和溫度下，改變鹽離子的離子強(qiáng)度I值，使不同的溶質(zhì)在不同的離子強(qiáng)度下有最大的析出。Ks取決于鹽的性質(zhì)，并且與離子的價(jià)數(shù)、平均半徑有關(guān)。高價(jià)陰離502、鹽析分離法中鹽的選擇蛋白質(zhì)的鹽析中，以硫酸銨、硫酸鈉應(yīng)用最廣。（1）硫酸銨的特點(diǎn)：溫度系數(shù)?。簻囟茸兓鹑芤盒再|(zhì)的變化不大；溶解度大；對(duì)蛋白質(zhì)變性影響小；價(jià)格低。但緩沖能力小；含氮，影響蛋白質(zhì)含量的測(cè)定。2、鹽析分離法中鹽的選擇蛋白質(zhì)的鹽析中，以硫酸銨、硫酸鈉應(yīng)用51（2）無(wú)機(jī)鹽種類(lèi)的影響不同鹽溶液中碳氧血紅蛋白的溶解度與離子強(qiáng)度的關(guān)系（25℃）

(○)NaCl;(▼)KCl;(?)MgSO4;(▲)NH4)SO4;(●)Na2SO4;(□)K2SO4;(■)檸檬酸三鈉（2）無(wú)機(jī)鹽種類(lèi)的影響不同鹽溶液中碳523、影響鹽析效果的因素（1）蛋白質(zhì)濃度：2.5~3%蛋白質(zhì)濃度高，鹽用量少，但是共沉淀導(dǎo)致選擇性下降。（2）離子強(qiáng)度的影響：不同類(lèi)型的蛋白質(zhì)，鹽析時(shí)所要求的離子強(qiáng)度各有不同。逐漸增加離子強(qiáng)度，分步鹽析?？梢泽w現(xiàn)出對(duì)蛋白質(zhì)的選擇性。各種蛋白質(zhì)的Ks相差越大，效果越好。3、影響鹽析效果的因素（1）蛋白質(zhì)濃度：2.5~3%53（3）不同離子類(lèi)型對(duì)鹽析效果的影響離子半徑小、帶較高電荷的離子鹽析效果好！磷酸鉀＞硫酸鈉＞硫酸銨＞檸檬酸鈉＞硫酸鎂（4）pH值的影響一般在等電點(diǎn)下進(jìn)行（5）溫度的影響通常在常溫下操作，對(duì)于敏感的酶類(lèi)，在低溫下操作。（3）不同離子類(lèi)型對(duì)鹽析效果的影響54鹽析操作鹽析操作554、脫鹽處理透析法：半透膜，具有讓小分子和水?dāng)U散而不斷通過(guò)，直到膜內(nèi)外濃度達(dá)到平衡。電滲析法葡萄糖凝膠過(guò)濾法4、脫鹽處理565.硫酸銨飽和度的調(diào)整方法1.添加硫酸銨固體在不宜增加溶液體積時(shí)應(yīng)用，可能導(dǎo)致局部濃度過(guò)高2.添加飽和硫酸銨溶液V-需加入的飽和硫酸氨溶液的體積；V0-待鹽析溶液的體積S1-原來(lái)溶液的飽和度S2-需要達(dá)到的飽和度5.硫酸銨飽和度的調(diào)整方法1.添加硫酸銨固體57第三節(jié)有機(jī)沉淀劑沉淀分離法一、基本原理及特點(diǎn)1.無(wú)機(jī)沉淀劑沉淀法的缺點(diǎn)：分離的選擇性和靈敏度都比較差。2.有機(jī)溶劑沉淀劑的特點(diǎn)：（1）選擇性比較高；（2）沉淀后所得產(chǎn)品不需脫鹽（3）缺點(diǎn)是對(duì)某些生物活性的大分子物質(zhì)如酶類(lèi)具有失活作用。第三節(jié)有機(jī)沉淀劑沉淀分離法一、基本原理及特點(diǎn)583.有機(jī)溶劑沉淀法的原理（1）有機(jī)溶劑改變了溶液的介電常數(shù)。增強(qiáng)了溶質(zhì)分子間的靜電作用力，降低了溶質(zhì)分子與溶劑分子間的相互作用，導(dǎo)致溶質(zhì)分子間發(fā)生聚合而析出。（2）脫水作用。有機(jī)溶劑必須溶解在水溶液中，這樣就減少了溶質(zhì)與水的作用，因而使溶質(zhì)脫水而相互聚集沉淀。3.有機(jī)溶劑沉淀法的原理（1）有機(jī)溶劑改變了溶液的介電常數(shù)。59二、有機(jī)沉淀劑的選擇

（一）沉淀金屬離子的有機(jī)沉淀劑主要有生成螯合物沉淀的有機(jī)沉淀劑、生成締合物的有機(jī)沉淀劑以及生成三元配合物的有機(jī)沉淀劑。（1）羥基肟類(lèi)，具有-C=C-結(jié)構(gòu)，能與二價(jià)金屬離子形成螯合物。（2）氨基酸類(lèi)，像鄰氨基苯甲酸等幾種芳香族氨基酸，能與銅離子、銀離子等形成絡(luò)合物而沉淀。（二）沉淀有機(jī)成分的有機(jī)沉淀劑使用有機(jī)溶劑沉淀水溶液中的氨基酸、蛋白質(zhì)、酶、核酸、多糖、果膠等。食品中蛋白質(zhì)和酶的沉淀多用乙醇。二、有機(jī)沉淀劑的選擇（一）沉淀金屬離子的有機(jī)沉淀劑60（三）影響沉淀效果的因素1.金屬離子的影響2.鹽濃度的影響3.溶質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量與有機(jī)溶劑用量的影響4.溫度的影響5.pH值的影響（三）影響沉淀效果的因素61第四節(jié)等電點(diǎn)沉淀分離法等電點(diǎn)：兩性離子所帶電荷因溶液的pH值不同而改變，當(dāng)兩性離子正負(fù)電荷數(shù)值相等時(shí)，溶液的pH值即其等電點(diǎn)。利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低而各種蛋白質(zhì)又具有不同等電點(diǎn)的特別進(jìn)行分離的方法，稱為等電點(diǎn)沉淀法。第四節(jié)等電點(diǎn)沉淀分離法等電點(diǎn)：兩性離子所帶電荷因溶液的pH62但在等電點(diǎn)時(shí)，各種蛋白質(zhì)仍有一定的溶解度而使沉淀不完全，同時(shí)許多蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)十分接近，故單獨(dú)使用此法效果不理想，分辨力也差。

大多用于提取后去除雜蛋白，即利用變動(dòng)提取液的pH值使某些與待提純的蛋白質(zhì)等電點(diǎn)相距較大的雜蛋白從溶液中沉淀出。實(shí)際工作中常把等電點(diǎn)沉淀和鹽析法、有機(jī)溶劑沉淀法聯(lián)合使用。但在等電點(diǎn)時(shí)，各種蛋白質(zhì)仍有一定的溶解度而