淀粉的國(guó)標(biāo)測(cè)定方法()

淀粉的國(guó)標(biāo)測(cè)定方法測(cè)定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的測(cè)定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理樣品經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類后，其中淀粉用淀粉酶水解成雙糖，再用鹽酸將雙糖水解成單糖，最后按還原糖測(cè)定，并折算成淀粉。2.適用范圍009.9,適用于所有含淀粉的食物。3.儀器回流冷凝器水浴鍋4.試劑除特殊說明外，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水，試劑為分析純。（1）乙醚（）碘溶液：稱取.6碘化鉀溶于0m水中，加入1.碘，溶解后加水稀釋至100m。85乙%醇。其余試劑同《蔗糖測(cè)定方法》5.操作方法樣品處理稱取?樣品，置于放有折疊濾紙的漏斗內(nèi)，先用0m乙醚分次洗除脂肪（注：如果脂肪含量少，此步驟可免），再用約100m乙醇洗去可溶性糖類（注：此步驟目的是去除可溶性糖），將殘留物移入ml燒杯內(nèi)，并用0m水洗濾紙及漏斗，洗液并入燒杯內(nèi)，將燒杯置沸水浴上加熱1mn使淀粉糊化，放冷至60℃以下，加0m淀粉酶溶液，再560℃保溫1,并時(shí)時(shí)攪拌（注：溫度過高，淀粉酶的活性破壞）。然后取1滴此液加1滴碘溶液，應(yīng)不現(xiàn)蘭色，若顯蘭色，再加熱糊化并加0m淀粉酶溶液，繼續(xù)保溫，直至加碘不顯蘭色為止。加熱至沸，冷后移入0m容量瓶中，并加水至刻度，混勻，過濾。（注：此時(shí)淀粉已水解成雙糖，過濾可去除殘?jiān)屠w維素）棄去初濾液，取0n濾液，置于0m錐形瓶中，加m6m鹽酸，裝上回流冷凝器，在沸水浴中回流1,冷后加滴甲基紅指示劑，用m氫氧化鈉溶液中和至中性，溶液轉(zhuǎn)入100m容量瓶中，洗滌錐形瓶，洗液并入100m容量瓶中，加水至刻度，混勻備用。（淀粉在沸水浴條件下糊化是淀粉水解的第一步反應(yīng)，然后在淀粉酶的作用下，分解成短鏈淀粉、糊精、麥芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸進(jìn)一步水解得到葡萄糖。）5.2測(cè)定按《還原糖的測(cè)定方法》操作。同時(shí)量取0m水及與樣品處理時(shí)相同量的淀粉酶溶液，按同一方法做試劑空白試驗(yàn)。算X0.91m1X（A1-）A2X0.91m1X100X100（1）XX1000

100式中：樣-品-中淀粉的含量，式中：樣-品-中淀粉的含量，測(cè)定用樣品中還原糖的含量。g試劑空白中還原糖的含量，；0.9還測(cè)原測(cè)糖(以葡萄糖計(jì))換算成淀粉的換算系數(shù)；試測(cè)樣品質(zhì)量，；水解用樣品溶液體積，；樣品定容總體積，l測(cè)定用樣品處理液的體積，。二、酸水解法1.原理樣品經(jīng)除去脂肪及可溶性糖類后，其中淀粉用酸水解成具有還原性的單糖，然后按還原糖測(cè)定，折算成淀粉。2適.用范圍本法適用于含淀粉的食物3.儀器水浴鍋。高速組織搗碎機(jī)：1200。rpm()皂化裝置并附錐形瓶。4.試劑除特殊說明外，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水，試劑為分析純。乙醚。85乙%醇溶液。()鹽酸溶液。()氫氧化鈉溶液。

().氫氧化鈉溶液。甲基紅指示液：0.2乙%醇溶液。()精密試紙。20乙%酸鉛溶液，10硫%酸鈉溶液。其余試劑同還原糖的測(cè)定。5.操作方法5.1樣品處理洗液合并于容量瓶中，加水稀釋至刻度。過濾，棄去初濾液0,濾液供測(cè)定用。5.2測(cè)定按還原糖的測(cè)定步驟操作。6.計(jì)算X0.90XX0.90XX10000-1001001)式中：樣品中淀粉的含量，;測(cè)定用樣品中還原糖的含量。；試劑空白中還原糖的含量，；稱測(cè)樣品質(zhì)量，；測(cè)定用樣品處理液的體積，。00樣品液總體積，；0.9測(cè)測(cè)還原糖(以葡萄糖計(jì))換算成淀粉的換算系數(shù)；

（注：酸水解能分解部分半纖維素，形成具有還原力的單糖，如木糖、阿拉伯糖等，可影響分析結(jié)果。為了比較正確地測(cè)定食物中淀粉含量，建議采用淀粉酶糖化淀粉，除去不可溶性的殘?jiān)螅儆盟崴馐怪蔀槠咸烟?，然后測(cè)定其含量，最后換算成淀粉。三、可消化淀粉和抗性淀粉的測(cè)定方法（酶-直接法）1.原理樣品先在37℃下經(jīng)a淀粉酶水解，使可消化淀粉轉(zhuǎn)化成葡萄糖，用乙醇提取，未水解的抗性淀粉部分經(jīng)沸水浴凝膠化后，在淀粉葡萄糖苷酶轉(zhuǎn)化成葡萄糖，用葡萄糖氧化酶法分別測(cè)定葡萄糖含量，再換算成可消化淀粉和抗性淀粉含量。2.適用范圍參考和Ca的方法。適用于所有含淀粉食物的測(cè)定。3.儀器恒溫水浴箱溫箱分光光度計(jì).試劑除特殊說明外，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水，試劑為分析純。（）乙酸緩沖液（（）乙酸緩沖液（H）：稱取冰乙酸，并調(diào)節(jié)H5用水定容至。2乙酸鈉（CH3COONa?3H2O）溶于水中，加入27用公司）、淀粉葡萄糖苷酶溶液用公司）、淀粉葡萄糖苷酶溶液ra公司）溶液于研缽中，用離心，取上清液。（2）酶溶液：分別稱取a淀粉酶溶液（aa（acd公司）和3轉(zhuǎn)換酶（乙酸緩沖液研磨制成勻漿，并調(diào)節(jié)體積為：3（3）淀粉葡萄糖苷酶溶液：稱取2淀粉葡萄糖苷酶（a公司），加乙酸緩沖液研磨成勻漿。3離心，取上清液。（）乙醇：乙醇加水至酸(6)2乙酸溶液：量取冰乙酸,加水至，混勻。（）氫氧化鉀溶液：稱取22氫氧化鉀，用水溶解并加至。(6)2乙酸溶液：量取冰乙酸,加水至，混勻。（7）其它試劑同《葡萄糖測(cè)定方法》。5.操作步驟5.1樣品處理：測(cè)定時(shí)，直接稱取樣品0.?1;測(cè)定時(shí)，選用生的樣品，先研磨打碎后再稱取樣品0.?1,。測(cè)定時(shí)，則先將樣品加水煮沸至少15i使之凝膠化，然后取出放入4℃冰箱冷藏過夜，再混勻后稱取樣品0.?1（需折合水分）。加入10酶溶液，輕輕混勻。37℃溫箱或水浴中酶解16。加入40無水乙醇，使乙醇含量終濃度為0%充分搖勻。靜置30i3000離心15，上清液轉(zhuǎn)移至100容量瓶中。用0乙醇反復(fù)洗滌沉淀?3次。合并上清液并用乙酸緩沖液定容，供測(cè)定可消化淀粉用。5.水解抗性淀粉：將經(jīng)反復(fù)洗滌的沉淀置于100℃干燥，然后用15水將沉淀轉(zhuǎn)移至錐形瓶中，沸水浴中加熱30i冷卻至室溫。加入1倍體積的4氫氧化鉀溶液，使氫氧化鉀終濃度為，室溫下混合30。（注：在樣品凝膠化后，氫氧化鉀的作用是進(jìn)一步破壞淀粉結(jié)構(gòu)，如果氫氧化鉀的濃度過高或過低，不利于結(jié)構(gòu)破壞，操作中需注意。）加入約30乙酸溶液，調(diào)節(jié)為5.0,再加入淀粉葡萄糖苷酶溶液5i65℃~70℃水浴0。冷卻后將水解液轉(zhuǎn)移至100容量瓶中，用乙酸緩沖液定容至刻度。過濾。5.3測(cè)定：吸取0.5上清液（5.1）和抗性淀粉水解液（5.）,按照葡萄糖氧化酶法分別測(cè)定葡萄糖含量（從測(cè)定步驟開始）。同時(shí)做葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.計(jì)算根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線得出上清液中和抗性淀粉水解液中葡萄糖濃度，再根據(jù)稀釋定容體積和稱樣量分別計(jì)算出可消化淀粉和抗性淀粉含量。AAb)XVXFX0.X0.1X0.0.5X式中樣品中可消化淀粉抗性淀粉含量，100A由標(biāo)準(zhǔn)回歸方程求出的樣品測(cè)定管中葡萄糖含量，Ab由標(biāo)準(zhǔn)回歸方程求出的樣品空白管中葡萄糖含量，V樣品定容體積，；F稀釋倍數(shù)0.5測(cè)定時(shí)吸取樣品提取液的體積，；樣品質(zhì)量，；0.1將轉(zhuǎn)換成100的系數(shù)。.注意事項(xiàng)根據(jù)抗性淀粉的分類，對(duì)樣品處理采用不同的處理方法。讀者可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇相應(yīng)的方法。測(cè)定抗性淀粉時(shí)，模擬胃腸道內(nèi)環(huán)境，根據(jù)a淀粉酶水解時(shí)間長(zhǎng)短，將時(shí)已水解的淀粉稱為快消化淀粉，?水解的淀粉稱為慢消化淀粉，后仍沒有水解的淀粉稱為抗性淀粉。有的學(xué)者指出在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，腸道對(duì)淀粉的消化能力可能超過認(rèn)為的水解時(shí)間過