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學必求其心得,業(yè)必貴于專精學必求其心得,業(yè)必貴于專精PAGE15-學必求其心得,業(yè)必貴于專精微生物的實驗室培養(yǎng)[基礎全練]1.下列有關培養(yǎng)基的敘述,正確的是()A.培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質B.培養(yǎng)基都只含有水、碳源、氮源和無機鹽C.固體培養(yǎng)基中加入少量水即可制成液體培養(yǎng)基D.微生物在固體培養(yǎng)基上生長時,可以形成肉眼可見的單個細菌解析:培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質,A正確;培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽,除此之外,可能還含有維生素等,B錯誤;固體培養(yǎng)基中加入少量水不能制成液體培養(yǎng)基,C錯誤;單個細菌肉眼看不到,在固體培養(yǎng)基上可形成肉眼可見的單個菌落,D錯誤。答案:A2.巴氏消毒法常用于酒、奶等食品的消毒,該消毒法就是加熱到70~75℃、保持30min,或加熱到80℃、保持15min,能殺死一般雜菌和病原菌.與滅菌的要求相比,巴氏消毒法()A.不能殺滅芽孢等耐高溫的細菌B.能殺滅芽孢等休眠狀態(tài)的細菌C.能殺滅各種細菌,包括芽孢D.能殺滅各種真菌,包括孢子解析:由于酒、奶等食品中的某些成分在高溫下易被破壞,不宜采取高溫滅菌法,雖然巴氏消毒法不能殺滅芽孢等耐高溫細菌,但由于奶、酒等的污染并不嚴重,巴氏消毒法還是能達到消毒要求的.答案:A3.防止雜菌入侵,獲得純凈的培養(yǎng)物,是研究和應用微生物的前提。下列敘述錯誤的是()A.實驗室里可以用紫外線或化學藥物進行消毒B.在實驗室中,切不可吃東西、喝水,離開實驗室時一定要洗手,以防被微生物感染C.接種環(huán)、接種針等金屬用具,直接在酒精燈火焰的內焰部位灼燒滅菌D.使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進行滅菌處理,以免污染環(huán)境解析:為防止雜菌污染,研究和應用微生物時應進行消毒和滅菌,實驗室可以用紫外線或化學藥物進行消毒,A正確;在實驗室中,切不可吃東西、喝水,離開實驗室時一定要洗手,以防被微生物感染,B正確;接種環(huán)、接種針等金屬用具,直接在酒精燈火焰的充分燃燒層即外焰部位灼燒滅菌,C錯誤;使用后的培養(yǎng)基丟棄前一定要進行滅菌處理,以免污染環(huán)境,D正確。答案:C4.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟是()A.計算、稱量、倒平板、溶化、滅菌B.計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C.計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D.計算、稱量、滅菌、溶化、倒平板解析:制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的一般步驟:計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板.答案:C5.下列關于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的理解,錯誤的是()A.將牛肉膏連同稱量紙一起放在燒杯中加熱溶化是因為牛肉膏比較黏稠B.在稱量牛肉膏和蛋白胨時動作要迅速,稱后要及時蓋上瓶蓋C.因為滅菌的目的相同,故對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿的滅菌方法也相同D.在加熱熔化瓊脂過程中要不斷攪拌以防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂解析:牛肉膏比較黏稠,需要放在稱量紙上稱量,溶化時也需要連同稱量紙一起放入燒杯,A正確;由于牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮,稱取時動作要迅速,稱后要及時蓋上瓶蓋,B正確;對培養(yǎng)基的滅菌常用高壓蒸汽滅菌法,對培養(yǎng)皿的滅菌常用干熱滅菌法,C錯誤;加入瓊脂后需要熔化,此過程中要不斷用玻棒攪拌,防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂,D正確。答案:C6.有關倒平板操作的敘述錯誤的是()A.將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上B.打開的錐形瓶瓶口應迅速通過火焰C.將培養(yǎng)皿打開,培養(yǎng)皿蓋倒放在桌子上D.待平板冷卻凝固后需要倒過來放置解析:整個倒平板過程要防止外來雜菌的入侵,因此,滅過菌的培養(yǎng)皿應放在火焰旁;打開的錐形瓶瓶口應迅速通過火焰;將培養(yǎng)皿打開一條大于瓶口的縫隙,不能將培養(yǎng)皿蓋完全打開;待平板冷卻凝固后需要倒過來放置.答案:C7.下列有關平板劃線接種法的操作錯誤的是()A.在操作的每一步以及每次劃線前都要灼燒接種環(huán)B.待接種環(huán)冷卻后再伸入菌液中沾取一環(huán)菌液C.沾取菌液和劃線要在火焰旁進行D.劃線時要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連解析:將微生物的接種工具,如接種環(huán)、接種針或其他的金屬用具,直接在酒精燈火焰上灼燒,可以迅速徹底地滅菌,A正確;待接種環(huán)冷卻后,才可以伸入菌液中沾取一環(huán)菌液,否則會殺死微生物,B正確;沾取菌液和劃線要在火焰旁進行,防止空氣中雜菌的污染,C正確;劃線時要避免最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連,否則不易得到單個細菌繁殖而來的菌落,D錯誤。答案:D8.下列有關稀釋涂布平板法的敘述錯誤的是()A.涂布前,應將菌液進行一系列的梯度稀釋B.取少量稀釋后的菌液滴加到培養(yǎng)基表面C.每次涂布后要將涂布器末端浸在盛有70%酒精的燒杯中D.任一稀釋度的菌液都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落解析:稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,在適宜條件下培養(yǎng).在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落。答案:D9.某學習小組為調查湖水中細菌的污染情況進行了如下相關實驗,實驗包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、觀察統(tǒng)計菌落數(shù)。(1)制備培養(yǎng)基時,在進行稱量、溶化、定容后,滅菌之前還需進行的操作是________;對培養(yǎng)基進行滅菌,一般采用的方法是______________________。(2)整個微生物的分離和培養(yǎng)過程,一定要注意在________條件下進行。(3)圖甲和圖乙是采用兩種接種方法接種培養(yǎng)后得到的菌落分布圖,圖甲對應的接種方法是________________________,圖乙對應的接種方法是________。(4)為使該實驗所得結果可靠,還應該實施的操作是______________________.(5)獲取目的菌后如要臨時保存,可將其接種在________上,等長出菌落后放在________的冰箱中保存。解析:(1)培養(yǎng)基的制作流程主要是:計算、稱量、溶化、定容、調整pH、滅菌、倒平板。培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌法滅菌。(2)微生物培養(yǎng)成功的關鍵是無菌操作.(3)接種微生物的方法主要有稀釋涂布平板法和平板劃線法,據(jù)圖分析,圖甲對應的接種方法是稀釋涂布平板法,圖乙對應的接種方法是平板劃線法。(4)實驗還需要設置對照實驗,即在另一平板上接種無菌水作為對照。(5)臨時保存菌種時可以使用斜面固體培養(yǎng)基,待菌落長成后,將試管放入溫度為4℃的冰箱中。答案:(1)調整pH高壓蒸汽滅菌(2)無菌(3)稀釋涂布平板法平板劃線法(4)同時在另一平板上接種無菌水作為對照(5)斜面固體培養(yǎng)基4℃10.微生物的分離和培養(yǎng)是現(xiàn)代生物工程應用中的重要環(huán)節(jié)。下圖甲、乙、丙是大腸桿菌分離和培養(yǎng)過程中部分操作和實驗結果示意圖,請據(jù)圖回答有關問題:(1)上圖甲所示的是制備固體培養(yǎng)基時的實驗操作步驟之一,它稱為________,若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌,除考慮營養(yǎng)條件外,還要考慮________、________和滲透壓等條件.(2)培養(yǎng)大腸桿菌時,在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染.對于固體培養(yǎng)基應采用的檢測方法是________________________________________.(3)上圖乙是平板劃線法接種操作示意圖,正確的操作順序是A→B→________________(用字母和箭頭表示);找出圖乙中兩處錯誤的操作(用字母表示):________、________。(4)上圖丙是某同學用平板劃線法接種后的培養(yǎng)基培養(yǎng)12h后的實驗結果,如果培養(yǎng)基上________________________________,則說明無菌操作基本符合要求。解析:(1)圖甲所示操作為倒平板,需要在酒精燈火焰旁進行操作。培養(yǎng)基中除營養(yǎng)成分外,還應考慮pH、氧氣、無菌、溫度、滲透壓等條件。(2)檢測培養(yǎng)基是否被污染的方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產生,如有菌落,說明該培養(yǎng)基已被污染.(3)平板劃線法的操作順序為灼燒接種環(huán),冷卻,挑取菌種,劃線,灼燒接種環(huán),劃線,灼燒接種環(huán),平板倒置培養(yǎng),即A→B→G→F→E→C→D→H。圖乙中C操作應在酒精燈附近進行,D中劃線的首尾不應該相接。(4)同一菌種的菌落顏色、形狀、大小基本一致,如有雜菌污染,會有異常菌落出現(xiàn),可根據(jù)菌落的特征確定該菌落是否為大腸桿菌.答案:(1)倒平板溫度(氧氣)pH(無菌)(2)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產生(3)G→F→E→C→D→HCD(4)生長的菌落顏色、形狀、大小基本一致,并符合大腸桿菌菌落的特點[素養(yǎng)提升]11.下列有關細菌培養(yǎng)的敘述,正確的是()A.在瓊脂固體培養(yǎng)基上長出的單個菌落含有多種細菌B.在培養(yǎng)基中加入青霉素可抑制真菌而促進細菌生長C.向液體培養(yǎng)基中通入氧氣能促進破傷風桿菌的生長D.同一種物質可能既作碳源又作氮源解析:菌落是指單個或少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時,形成的一個肉眼可見的、具有一定形態(tài)結構的子細胞群體,所以單個菌落中通常只有一種細菌,A錯誤;青霉素能夠干擾細菌細胞壁的合成,所以青霉素培養(yǎng)基抑制細菌生長而促進真菌生長,B錯誤;破傷風桿菌的代謝類型屬于異養(yǎng)厭氧型,向其培養(yǎng)基中通入氧氣會抑制其生長,C錯誤;同一種物質可能既作碳源又作氮源,如牛肉膏,D正確。答案:D12.以下關于無菌技術的敘述,錯誤的是()A.對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行滅菌B.將用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌C.為避免周圍環(huán)境中微生物的污染,實驗操作應在酒精燈火焰附近進行D.實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸解析:對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行消毒處理,A項錯誤;用于微生物培養(yǎng)的培養(yǎng)皿、接種用具和培養(yǎng)基都應進行滅菌操作,B項正確;實驗過程中為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染,實驗操作應在酒精燈火焰附近進行,C項正確;實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸,D項正確.答案:A13.下列有關微生物的分離與培養(yǎng)的敘述,不正確的是()A.獲得純凈培養(yǎng)物的關鍵是防止雜菌污染B.倒置平板可防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落造成污染C.倒平板時將培養(yǎng)皿的蓋拿開,以便于將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿D.檢驗培養(yǎng)基是否被雜菌污染的最有效方法是將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)解析:為避免雜菌污染培養(yǎng)基,倒平板時用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙,右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20mL)倒入培養(yǎng)皿,左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋,C錯誤.答案:C14.最常用的接種微生物的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法,下列關于二者的比較正確的是()平板劃線法稀釋涂布平板法①需在無菌條件下操作不需無菌操作②培養(yǎng)基中不加瓊脂培養(yǎng)基中加有瓊脂③不可計算菌液中的活菌數(shù)可計算菌液中的活菌數(shù)④需要接種環(huán)需要涂布器A.②④ B.③④C.①④ D.②③解析:平板劃線法和稀釋涂布平板法都需要進行無菌操作,以避免雜菌污染;平板劃線法和稀釋涂布平板法都使用固體培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中都加有瓊脂;稀釋涂布平板法可計算菌液中的活菌數(shù),平板劃線法不能計算菌液中的活菌數(shù);平板劃線法采用接種環(huán)或接種針進行接種,而稀釋涂布平板法采用涂布器進行接種。故選B。答案:B15.如圖是生物興趣小組為研究“某酸奶中乳酸菌種類及其耐藥情況”而繪制的流程圖。請分析回答:eq\x(\a\al(配制細菌培,養(yǎng)基并滅菌))→eq\x(\a\al(乳酸菌,分離純化))→eq\x(\a\al(乳酸菌耐,藥性檢測))(1)與酵母菌相比,乳酸菌在結構上的主要區(qū)別是__________________________,________(填“有”或“無”)染色體.(2)本研究使用的細菌培養(yǎng)基中特別加入了一定量的碳酸鈣,乳酸菌在________(生理過程)中產生的乳酸能與不溶性的碳酸鈣生成可溶性的乳酸鈣,從而在菌落周圍形成溶鈣圈。從物理形態(tài)分析,本研究使用的培養(yǎng)基屬于________(類型).(3)在利用高壓蒸汽滅菌鍋對培養(yǎng)基滅菌時,把鍋內的水加熱煮沸,必須________________后,將鍋密閉,繼續(xù)加熱以保證鍋內氣壓上升,溫度達到121℃。滅菌后的培養(yǎng)基應適當冷卻,在________附近倒平板.(4)請完善“檢測乳酸菌對青霉素、四環(huán)素的耐藥性”實驗操作步驟:步驟1:分別取____________________加入三組無菌培養(yǎng)皿中,再加入經過滅菌并冷卻到50℃左右的培養(yǎng)基,立即混勻,靜置凝固成平板。步驟2:向三組培養(yǎng)基中分別接種待檢測的乳酸菌菌種。步驟3:將接種后的三組培養(yǎng)基和一個________都置于適宜溫度等條件下培養(yǎng)若干天,觀察比較培養(yǎng)基中菌落生長情況。解析:(1)酵母菌屬于真核生物,乳酸菌屬于原核生物,兩者區(qū)別在于乳酸菌細胞內沒有核膜包被的細胞核,無染色體。(2)培養(yǎng)基中特別加入了一定量的碳酸鈣,乳酸菌在無氧呼吸中產生的乳酸能與不溶性的碳酸鈣生成可溶性的乳酸鈣,從而在菌落周圍形成溶鈣圈。從物理形態(tài)分析,本研究使用的培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基。(3)在利用高壓蒸汽滅菌鍋對培養(yǎng)基滅菌時
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