藥理實驗1課件

藥理學實驗實驗一藥理實驗基礎知識實驗二

不同給藥途徑對藥物效應的影響實驗三藥物的協(xié)同作用和拮抗作用實驗四戊巴比妥鈉LD50的測定實驗五利尿藥對家兔尿量的影響藥理學實驗

實驗一藥理實驗基礎知識一、目的1.掌握基本操作，鍛煉動手、動腦能力；2.更好地掌握藥理學基本理論知識；3.培養(yǎng)科學思維三、實驗報告的書寫1.題目2.目的3.原理4.材料：實驗動物，器材，藥品5.方法：用自己的語言簡單扼要描述出來；6.結(jié)果：要求真實、清楚；7.討論：將實驗結(jié)果進行比較、分析；實驗中有哪些不足之處；結(jié)果異常或失敗的原因；8.結(jié)論：將實驗結(jié)果進行歸納總結(jié)，應帶有提示性質(zhì)。四、實驗設計基本原則1.隨機原則使每一實驗對象都有同等的機會抽到實驗組或?qū)φ战M中，除處理因素外其他因素盡可能均衡一致，從而抵消非實驗因素的影響。2.對照原則⑴組間對照：陰性對照，陽性對照，同因素不同水平對照；⑵自身前后對照3.

重復原則五、實驗動物1.動物的選擇⑴小白鼠：適用于需大量動物的實驗，如某些藥物的篩選，半數(shù)致死量的測定。也較適用于避孕藥實驗、抗炎鎮(zhèn)痛藥實驗、中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥實驗、抗腫瘤藥及抗衰老藥實驗等。⑵大白鼠：比較適用于抗炎藥物實驗，血壓測定、利膽、利尿藥實驗，也可用于進行亞急性和慢性毒性實驗。

⑶豚鼠：因其對組胺敏感，并易于致敏，故常被選用于抗過敏藥、平喘藥和抗組胺藥的實驗。也常用于離體心臟、心房、腸管實驗。又因它對結(jié)核敏感，常用于抗結(jié)核病藥的實驗。⑷家兔：常用于觀察研究腦電生理作用，藥物對小腸的作用。由于家兔體溫變化敏感，也常用于體溫實驗，用于熱原檢查。⑸狗：狗是記錄血壓，呼吸最常用的大動物。還可利用狗做成胃瘺、腸瘺，以觀察藥物對胃腸蠕動和分泌的影響。在進行慢性毒性實驗時，也常采用狗。3.麻醉藥的選擇⑴局部麻醉：常采用2％普魯卡因做皮下浸潤注射，可用于局部手術(shù)。⑵全身麻醉：①吸入麻醉：可將乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩內(nèi)，利用乙醚揮發(fā)的性質(zhì)，經(jīng)肺泡吸收，作用較快，適用于小鼠、大鼠短時間麻醉。②注射麻醉：常用戌巴比妥鈉和烏拉坦。⑶豚鼠豚鼠性情溫和不咬人，用手握住軀干即可。⑷家兔可用一手抓住家兔頸背部皮膚，將兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿勢。在進行仰位手術(shù)操作時，可用繩帶將其四肢仰位捆綁在兔手術(shù)臺上。頭部用兔頭固定夾固定。③皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮膚處進針即可。④靜脈注射(i.v.)：將小鼠置于特制的固定筒內(nèi)或倒置的大漏斗下，讓其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或?qū)⑹笪苍?0'C熱水中浸泡半分鐘使血管擴張。左手拉尾端，右手持注射器將針頭刺入尾靜脈，推入藥液。⑵家兔①灌胃：需兩人合作進行。一人取坐位用兩腿夾持兔身，左手握家兔雙耳，右手抓住兩前肢。另一人將木制開口器橫插家兔口內(nèi)，壓住舌頭并固定之。取8號導尿管從開口器中部小孔插入食道。插管時如誤入氣管會出現(xiàn)動物的掙扎和呼吸困難。也可將導尿管的外端浸入水中，如有氣泡吹出，表示插在氣管內(nèi)，此時應拔管重插。當判明導尿管在食道以內(nèi)后，用注射器接通導尿管將藥液推入。②皮下、腹腔注射：給藥方法基本上同小鼠，唯針頭可稍大，給藥量可稍多。皮下與肌內(nèi)為0.5-1.0/mg，腹腔為1.0-5.0ml/mg。③靜脈注射：將家兔置固定箱內(nèi)，撥去耳殼外緣的毛，選擇一條比較明顯的耳緣靜脈，用酒精棉球涂擦皮膚，使血管顯露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指墊在兔耳注射處的下面，右手持注射器，將針頭從近耳尖處刺入，當確認針頭在血管中后，將藥液推入。6.動物的處死：大、小鼠通常用頸椎脫臼法處死。一、實驗目的

1.觀察不同給藥途徑對同一藥物的作用速度、強度的影響；2.觀察同一藥物從不同途徑進入機體可產(chǎn)生不同的作用。二、實驗材料

注射器、針頭、小鼠灌胃針頭、燒杯、普通天平、硫酸鎂溶液實驗二

不同給藥途徑對藥物作用的影響

[實驗方法]取體重相近的小白鼠3只隨機分為三組，稱其體重分別放入鐘罩內(nèi)，觀察它們的正?；顒蛹胺瓷淝闆r，然后按下表給藥；觀察小白鼠用藥后的反應及活動情況，以翻正反射消失時作為麻醉開始指標。記錄麻醉開始時間，麻醉維持時間，麻醉深度有何不同（用鑷子夾其后肢看其反應）。組別處理方法灌胃組0.3%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g的量灌胃

肌注組0.3%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g的量肌注腹注組0.3%戊巴比妥鈉溶液0.1ml/10g的量腹腔注射[實驗結(jié)果]實驗結(jié)果填入下表中

不同途徑對藥物效應的影響組別給藥方法麻醉開始時間麻醉維持時間麻醉深度灌胃組肌注組腹注組[實驗方法]取禁食12h的小鼠3只，稱重，分別標為對照組、灌胃組和肌內(nèi)注射組按以下給藥：A：對照組：灌胃給生理鹽水0.2ml/10g；B：灌胃組：灌胃給3.5％硫酸鎂溶液0.2ml/10g；C：肌內(nèi)注射組：肌內(nèi)注射給3.5％硫酸鎂溶液0.2ml/10g。[實驗結(jié)果]實驗結(jié)果填入下表中

不同途徑對藥物效應的影響鼠號

體重(g)

藥物及劑量

給藥途徑

動物反應

炭末推進率（%）ABC炭末推進率計算公式：炭末的移動距離（cm）

小腸推進率=

×100%

小腸全長（cm）六、思考討論題

1、灌胃和腹腔注射給硫酸鎂的效應有哪些不同？為什么？2、給藥前動物禁食12小時的原因。3、為何比較炭末推進率，而非小腸全長或炭末在小腸內(nèi)的推進距離？4、本次實驗結(jié)果對臨床用藥有何提示？實驗三藥物的協(xié)同作用和拮抗作用［目的］觀察激動劑與拮抗劑之間的相互作用［材料］兔子１只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%鹽酸腎上腺素注液,0.2%硝酸毛果蕓香堿注射液［方法］１、取兔放于兔固定箱內(nèi)固定，避免陽光直射眼睛，用毛剪剪去兔兩眼睫毛，然后用瞳孔量尺測量瞳孔大小，連續(xù)三次，取平均值。２、在兔左眼滴入０.2%毛果蕓香堿3滴，滴藥時用姆指和食指將下眼瞼提起,使成囊狀,再用中指壓住鼻淚管開口處,防止藥液流入鼻淚管而不起作用，再用右手滴入藥液。15分鐘后再測量瞳孔大小，連續(xù)三次，取平均值，并進行比較。項目正常毛果蕓香堿腎上腺素阿托品瞳孔大小左眼

右眼

［記錄］

［討論題］從實驗結(jié)果中如何說明藥物的協(xié)同作用和拮抗作用？實驗四戊巴比妥鈉LD50的測定一、毒理學實驗方法1.急性毒性實驗：一次性大劑量給予藥物后觀察藥物的作用；2.慢性毒性實驗：長期連續(xù)多次給予中、小劑量的藥物，觀察動物一些器官的慢性受損程度；3.特殊毒性實驗：致癌，致畸，致突變，過敏反應等。二、LD50的測定的目的與原理目的：通過實驗學習測定LD５０的方法、步驟和計算過程，了解急性毒性實驗的常規(guī)方法。LD50是指使一群體動物中半數(shù)死亡的劑量，是衡量藥物毒性大小的指標，是評價藥物優(yōu)劣的重要參數(shù)。了解藥物單次給藥或短時間內(nèi)多次給藥后動物所產(chǎn)生的毒性反應及其嚴重程度，為臨床安全用藥及監(jiān)測提供一定的參考。LD50的測定方法很多，較為常用的有改良寇氏法、簡化概率單位法、序貫法、孫瑞元點斜法和Bliss-Finney法。本實驗介紹結(jié)果較準確、計算簡便、可計算出全部有關(guān)參數(shù)的改良寇氏法及及計算機應用程序中的Bliss-Finney法。三、具體實驗(以戊巴比妥鈉為例)

［材料］1.動物：小白鼠(體重18-22g，雌雄各半，實驗前禁食12h)2.器材：注射器、鼠籠、天平、計算器等。3.藥品：戊巴比妥鈉[實驗方法]1、預實驗：①探索劑量范圍：根據(jù)經(jīng)驗或文獻找出動物100%及0%死亡的劑量，即上下限劑量（Dm,Dn）。對于無毒性參考資料的藥物，一般先配制最大濃度藥劑，然后按等比關(guān)系（如2：1）稀釋成多個劑量，方法是每組取2∽10只小鼠，按估計劑量給藥，如果全死則降低劑量，如果全活則增加劑量，進而確定出Dm,Dn。②確定組數(shù)、計算各組劑量：組數(shù)（G）：5-8組各組劑量：各組劑量要按等比級數(shù)排列，按下列公式求出公比r:按公比求各組劑量：D1，D2，D3，D4，D5，……，Dm其中D1=Dn=最小劑量，D2=D1·r，D3=D2·r，……Dm=Dn-1·r③配制等比稀釋溶液：要求各小鼠給藥容積一樣，0.1ml/10g∽0.2ml/10g，按下列公式計算濃度：2、正式實驗①分組編號：隨機將小鼠分為五組，每組10只，♀♂各半。②給藥：分別將配制好的等比稀釋液按0.2ml/10g由ip給藥。③觀察記錄：給藥后觀察并記錄中毒癥狀，30分鐘后記錄各組的死亡小鼠數(shù)。[實驗結(jié)果]

全班結(jié)果匯總，計算硝酸士的寧的LD50、LD50的可信限和可信限率。①結(jié)果處理實驗資料按下表列出：

受試物劑量對數(shù)劑量動物數(shù)死亡率概率單位LD50（mg/kg）(X)(只)(%)(Y)及置信限(95%)

12345②計算方法計算LD50及95%可信限：LD50=lg–1[Xm－i(∑P－0.5)]Xm=最大劑量的對數(shù)值i=相鄰兩組比值的對數(shù)（lgr）P=各組死亡率∑P=各組死亡率總和LD50的95%平均可信限=LD50±4.5LD50·SX50其中SX50為LD50的標準誤其中n=各組動物數(shù)ΣP2=各組死亡率平方的總和[注意事項]藥物稱量、配制及給藥的準確程度是本實驗成功與否的關(guān)鍵。1.實驗過程中給藥劑量一定要準確。2.注意觀察中毒癥狀及其發(fā)生時間、死亡時間。［討論題］什么叫ＬＤ５０？測定ＬＤ５０的意義和根據(jù)是什么？實驗五利尿藥對家兔尿量的影響一、利尿藥1.定義：是作用于腎臟，增加電解質(zhì)和水的排出，使尿量增多的藥物。2.分類：根據(jù)利尿藥的作用部位，可分為高效、中效和低效利尿藥3.呋塞米為高效利尿藥⑴利尿作用特點⑵作用機制⑶臨床應用⑷不良反應二、利尿藥的實驗方法1.動物選擇可用大白鼠、小白鼠、家兔、貓和狗，其中以大白鼠較為常用。2.實驗方法⑴代謝籠實驗法：適用于大、小白鼠；⑵直接自輸尿管或膀胱收集尿液：適用于較大動物（家兔、貓、狗）。三、具體實驗[目的]1.了解急性利尿的實驗方法；2.觀察速尿?qū)β樽硗玫睦蜃饔?。[材料]1.動物：家兔2.器材：兔手術(shù)臺、量筒、注射器、手術(shù)器械3.藥品：25％烏拉坦，1％速尿[方法]1.麻醉：取家兔一只，稱重，耳緣i.v.25％烏拉坦4ml/kg；注意：注射速度要緩慢，隨時觀察角膜反射，反射消失即停止注射。2.水負荷：麻醉后i.g.給自來水40ml/kg；注意：避免灌至氣管，將灌胃管外端浸入水中，若有氣泡立即拔出。3.手術(shù)：背位固定后剪去下腹部毛，于恥骨聯(lián)合上方切開皮膚約4~5cm，并沿腹白線剪開肌肉，暴露膀胱，在少血管區(qū)做荷包縫合后行膀胱插管；注意：膀胱插管需注滿生理鹽水4.記錄正常尿量(ml／2分鐘)，連續(xù)記錄10min；5.耳緣i.v.1％速尿4mg/0.4ml/kg，記錄給藥后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20min尿量毫升數(shù)(ml／2分鐘)。[結(jié)果]結(jié)果匯總，計算不同時間尿量的均值，以尿量毫升數(shù)(ml／2分鐘)為縱坐標，給藥后不同時間為橫坐標作直方圖。解熱鎮(zhèn)痛藥對發(fā)熱家兔體溫的影響［目的］觀察解熱鎮(zhèn)痛藥的解熱作用。［材料］兔、１０％復方氨基比林溶液、10％蛋白胨、電子秤、體溫表、注射器。［