結核桿菌特異性細胞免疫反應監(jiān)測2014.6.5楊峻山科室講課課件

結核桿菌特異性細胞免疫反應檢測A.TBTM（瑅碧）——準確、快速、簡便的結核感染檢測2結核病疫情感染人數(shù)：全球人口的1/3，中國的感染率為44.5%；感染者一生中會有約10%的風險發(fā)展成為結核病；年新發(fā)病例數(shù)：全球每年報告新病例約800-1000萬；中國每年報告新病例約150萬；死亡人數(shù)：全球每年死亡病例約300萬；其中中國約13萬；中國是全球22個結核病高負擔國家之一。3影像學方法：特異性較差，與醫(yī)師的經驗有關，主觀性強。培養(yǎng)：結核病診斷金標準，敏感性為30-50%且耗時2-8周；抗酸染色法（俗稱涂片）：敏感性為30-40%；血清結核抗體定性檢測：敏感性在0-100%，特異性約為47-100%；分子診斷方法（如PCR）：重復性較差，需要痰標本；結核菌素試驗（TST）：受卡介苗干擾，特異性差，在肺結核病人中存在10-25%的假陰性。結核病診斷和輔助診斷方法現(xiàn)狀5全球現(xiàn)有的三個IGRA產品T.SPOT-TB

細胞IGRA；QuantiFERONTBGold(intube)：簡稱QFT-IT

全血IGRA；

尚未獲得中國SFDA批準進入中國；A.TB：國內第一家

全血IGRA；結核桿菌特異性細胞免疫反應檢測2011年7月6日，獲中華人民共和國食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）批準上市生產企業(yè)：?？诰S瑅璦生物研究院注冊號：國食藥監(jiān)械（準）字2011第3400801；產品標準編號：YZB/國2442-2011，項目類別：體外三類診斷試劑

原理與技術背景γ-干擾素釋放實驗（IGRA）

（IGRA，interferon-gammareleaseassay）酶聯(lián)免疫技術（ELISA）

（ELISA，Enzyme-LinkedImmunoAssay）結核桿菌特異抗原

早期抗原靶6（ESAT-6）

earlysecretedantigenictarget6

培養(yǎng)濾液蛋白10（CFP10）（culturefiltrateprotein10）基本原理1

機體感染結核桿菌后產生的T淋巴細胞在體外受到特異性抗原刺激時會釋放γ-干擾素，通過對γ-干擾素的定量分析可判斷是否具有結核桿菌的特異性T細胞反應。γ-干擾素釋放實驗（IGRA）Proteosome蛋白酶體exocytosis-干擾素結核桿菌特異性T細胞抗原呈遞細胞脫毒的炭疽毒素致死因子片段LFn，可以起到分子注射器的作用LFnESAT6/LFnCFP10A.TB臨床性能指標國內臨床數(shù)據(jù)——1085例樣本

●

試驗組472例：

菌陽結核菌陰結核

●對照組613例：

健康志愿者非結核其它肺部疾病

疾病類型例數(shù)A.TB

陽性陰性艾滋病感染者合并活動性結核88(100%)

0(0%)

糖尿病合并活動性結核1312(92.3%)

1(7.7%)

類風濕合并活動性結核54(80%)

1(20%)

結核性胸膜炎同時服用免疫抑制劑97(77.8%)

2(22.2%)

合計3531(88.6%)

4(11.4%)

A.TB臨床診斷數(shù)據(jù)-2A.TBTM操作過程陰性刺激劑陽性刺激劑A.TB刺激劑樣本采集：3ml新鮮全血，肝素鈉抗凝37℃16小時內運輸常溫22-24小時血漿收獲標準曲線制備、樣品檢測450nm讀數(shù)37℃第一步：樣本的刺激第二步：ELISA定量IFN-γNPTNPT0.5小時約3小時樣本的刺激和孵育A.TBTM報告單姓名年齡性別ID號科別診斷樣本

樣本號檢測項目測定結果單位計算公式T/P參考范圍提示混合淋巴細胞培養(yǎng)+干擾素（P）9.86IU/ml0.24

＜0.6陰性（-）混合淋巴細胞培養(yǎng)+干擾素（T）2.34IU/ml備注：患者樣本經結核分枝桿菌RD1區(qū)編碼的全抗原刺激后，特異性釋放的γ-干擾素水平為

2.34IU/ml；非特異釋放的γ-干擾素水平為

9.86IU/ml；兩者的比值為：

0.24；是否為活動性結核，請結合臨床進行判斷。N值體現(xiàn)的是機體的本底干擾素水平P值體現(xiàn)的是整體的機體免疫水平是否正常T值體現(xiàn)的是機體內T淋巴細胞對結核桿菌特異性抗原刺激的反應

交叉反應性

以IL-1β，IL-2，IL-4，IL-5，IL-6，IL-8，IL-10，TNF-α，GM-CSF等9種細胞因子作為干擾物在反應體系中的濃度與-干擾素的濃度相當或為-干擾素濃度的2-4倍時，無明顯交叉反應性。

20應用前景公共衛(wèi)生突發(fā)事件結核病集團感染：現(xiàn)階段一般應用方案為：胸透和結核菌素試驗。結核病輔助診斷，尤其對菌