中藥化學(xué)苷類(lèi)2課件

第5節(jié)苷的提取、分離及檢識(shí)苷的提?。喝軇┓ㄜ盏姆蛛x：大孔樹(shù)脂法色譜法苷的檢識(shí)：化學(xué)檢識(shí)色譜檢識(shí)

第5節(jié)苷的提取、分離及檢識(shí)苷的提?。喝軇┓?1.苷的提取溶劑法：用極性由小到大的溶劑依次提取。常用溶劑有沸水、甲(乙)醇、正丁醇、乙酸乙酯等。！注意：苷的水解（酸、酶、堿的影響）。原生苷的提?。浩茐幕蛞种泼傅幕钚?。藥材迅速干燥拌料無(wú)機(jī)鹽如碳酸鈣用沸水、高濃度醇提取次生苷或苷元的提?。豪妹富钚?。發(fā)酵后或水解后，用親脂性有機(jī)溶劑提取。1.苷的提取溶劑法：用極性由小到大的溶劑依次提取。常用溶劑有2中藥化學(xué)苷類(lèi)2課件32.苷的分離純化溶劑處理法：利用溶解度差異分離。提取液濃縮后，用合適的溶劑處理，根據(jù)苷類(lèi)與雜質(zhì)的溶解度不同分離。如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。鉛鹽沉淀法：利用醋酸鉛在水或稀醇中能沉淀某類(lèi)成分的性質(zhì)，進(jìn)行除雜或提純。中性醋酸鉛能沉淀具鄰二酚OH、-COOH的酸性苷；堿式醋酸鉛能沉淀酚性成分。色譜法：利用混合物中各組分與固定相和流動(dòng)相的相互之間的作用不同，使各組分以不同程度分布在固定相和流動(dòng)相中，當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)固定相時(shí)，各組分以不同的速度移動(dòng)，達(dá)到分離。分離效果好，是一種實(shí)驗(yàn)室常規(guī)分離方法。2.苷的分離純化溶劑處理法：利用溶解度差異分離。提取液濃縮后4

按流動(dòng)相分：液相色譜（liquidchromatography）氣相色譜（gaschromatography）按操作方式分：薄層色譜紙色譜柱色譜按分離機(jī)理分：吸附色譜分配色譜離子交換色譜按極性分：正相色譜反相色譜色譜法（Chromatography）分類(lèi)：按流動(dòng)相分：液相色譜（liquidchromatogra52.苷的分離純化大孔樹(shù)脂吸附色譜原理：大孔樹(shù)脂是一類(lèi)具有多孔結(jié)構(gòu)、不溶于水的固體高分子物質(zhì)，可以通過(guò)物理吸附（范德華力）從水溶液中有選擇的吸附成分，達(dá)到分離目的。特點(diǎn)：選擇性、機(jī)械強(qiáng)度高、再生處理方便、吸附速度快等。應(yīng)用廣泛，如苷與糖類(lèi)的分離等。分類(lèi)：非極性、中極性、極性和強(qiáng)極性四類(lèi)。選擇的樹(shù)脂極性與被分離物質(zhì)極性既不能相似（吸附過(guò)強(qiáng)），也不能差太大（無(wú)法分離）。常用的有DA-101、DA-201、AB-8型等。操作：樣品用水溶解，上樣后依次用水、含水醇、濃醇洗脫。收集洗脫液，回收溶劑，濃縮干燥，即得。聚酰胺色譜凝膠色譜苷的分離（有效部位）：2.苷的分離純化大孔樹(shù)脂吸附色譜苷的分離（有效部位）：62.苷的分離純化硅膠、氧化鋁吸附色譜：適用于極性低的苷類(lèi)或苷元的分離。利用被分離組分與吸附劑之間的相互作用（可逆的范德華力）差異進(jìn)行分離。在洗脫過(guò)程中，柱內(nèi)不斷地發(fā)生解吸、吸附，再解吸、再吸附的過(guò)程。即被吸附的物質(zhì)被溶劑解吸而隨溶劑向下移動(dòng)，又遇到新的吸附劑顆粒被再吸附，后面流下的溶劑又再解吸而使其下移動(dòng)。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間以后，該物質(zhì)會(huì)向下移動(dòng)一定距離。此距離的長(zhǎng)短與吸附劑對(duì)該物質(zhì)的吸附力以及溶劑對(duì)該物質(zhì)的解吸(溶解)能力有關(guān)。不同的物質(zhì)由于吸附力和解吸力不同，移動(dòng)速度也不同。吸附力弱而解吸力強(qiáng)的物質(zhì)，移動(dòng)速度就較快。分配色譜：以硅膠、纖維素等為支持劑，水飽和的溶劑為流動(dòng)相進(jìn)行分離，適用于極性較大的苷類(lèi)成分。常用反相色譜，即以鍵合硅膠為固定相，含水的溶劑系統(tǒng)為流動(dòng)相分離。苷的純化（有效成分）：2.苷的分離純化硅膠、氧化鋁吸附色譜：適用于極性低的苷類(lèi)或苷7中藥化學(xué)苷類(lèi)2課件8中藥化學(xué)苷類(lèi)2課件9中藥化學(xué)苷類(lèi)2課件103.苷的檢識(shí)化學(xué)檢識(shí)Molish反應(yīng)（α-萘酚濃硫酸）：糖、苷（＋）紫色環(huán)。糖被氧化成糠醛，糖醛與酚胺縮合生成有色化合物。Fehling或Tollen反應(yīng)：還原糖（＋）。苷、非還原糖(-)。比較水解前后結(jié)果，判斷是糖還是苷。

RCHO+2Ag(NH3)2+OH－→RCOONH4+2Ag↓+3NH3+H2ORCHO+2Cu(OH)2+NaOH→RCOONa+Cu2O↓+3H2O3.苷的檢識(shí)化學(xué)檢識(shí)11第6節(jié)苷的結(jié)構(gòu)研究純度鑒定分子式的測(cè)定苷的水解苷元的結(jié)構(gòu)鑒定糖的結(jié)構(gòu)鑒定第6節(jié)苷的結(jié)構(gòu)研究純度鑒定12糖的結(jié)構(gòu)鑒定糖的種類(lèi)糖的數(shù)目糖鏈的結(jié)構(gòu)位置：苷元-糖、糖-糖順序：糖-糖構(gòu)型：苷鍵糖的結(jié)構(gòu)鑒定糖的種類(lèi)131.糖的種類(lèi)的確定色譜法—測(cè)定水解液中的單糖，與對(duì)照品比較。PC：最常用。TLC：點(diǎn)樣量較少≤5μg。可用無(wú)機(jī)鹽（強(qiáng)堿弱酸）的水溶液制板，增加樣品承載量，改善分離效果。如0.3mol/LNa2HPO4、0.03mol/LH3BO3等。HPLC：直接進(jìn)樣，但靈敏度不及GC。GC：靈敏度高，但需水解、制備衍生物。NMR法—直接測(cè)定苷，與標(biāo)準(zhǔn)品的糖數(shù)據(jù)比較。1HNMR、13CNMR二維NMR1.糖的種類(lèi)的確定色譜法—測(cè)定水解液中的單糖，與對(duì)照品比較。14常見(jiàn)單糖紙色譜hRfBAW：正丁醇－醋酸－水（4:1:5,上層）BEW：正丁醇－乙醇－水（4:1:2）BBPW：正丁醇－苯－吡啶－水（5:1:3:3）PhOH：水飽和苯酚

常見(jiàn)單糖紙色譜hRfBAW：正丁醇－醋酸－水（4:1:5,152.糖的數(shù)目的確定MS法測(cè)定苷和苷元分子量，根據(jù)差值或碎片質(zhì)荷比差值計(jì)算。色譜法—測(cè)定水解液中的單糖TLC-Scan、HPLC-定量，以單糖對(duì)照品為標(biāo)準(zhǔn)。NMR法1HNMR：根據(jù)糖端基質(zhì)子信號(hào)數(shù)目確定；或全乙?；?、全甲基化數(shù)目推測(cè)。13CNMR：根據(jù)糖端基碳信號(hào)數(shù)目（90-112ppm）確定；或苷和苷元碳信號(hào)差值推斷。二維NMR

2.糖的數(shù)目的確定MS法163.糖的連接位置—苷元與糖13CNMR苷化位移（glycosylationshift,GS）：苷元與糖結(jié)合成苷后，苷元的成苷碳原子（α-C）與相鄰的碳原子（β-C）信號(hào)會(huì)發(fā)生位移，其他碳信號(hào)不變；糖端基碳原子與游離單糖信號(hào)相比也發(fā)生了位移。苷元：醇苷，α-C低場(chǎng)位移4-10ppm

β-C高場(chǎng)位移1-4.6ppm酚苷，α-C高場(chǎng)位移β-C低場(chǎng)位移糖：端基C低場(chǎng)位移4-7ppm相鄰C高場(chǎng)位移1-4ppm

二維NMR

3.糖的連接位置—苷元與糖13CNMR1713CNMR

法：苷的碳譜數(shù)據(jù)與單糖的碳譜數(shù)據(jù)比較，根據(jù)苷化位移規(guī)律可確定單糖的連接位置。若內(nèi)側(cè)糖的某碳原子向低場(chǎng)移動(dòng)（4-7ppm），而相鄰兩個(gè)碳原子又略向高場(chǎng)移動(dòng)（1-4ppm），確定內(nèi)側(cè)糖的碳原子是連接糖的位置。4.糖的連接位置—糖與糖13CNMR法：苷的碳譜數(shù)據(jù)與單糖的碳譜數(shù)據(jù)比較，根據(jù)苷化186.苷鍵構(gòu)型的確定酶水解法麥芽糖酶水解α-苷鍵苦杏仁苷酶水解β-苷鍵NMR6.苷鍵構(gòu)型的確定酶水解法191HNMR：糖成苷后，端基質(zhì)子常位于較低場(chǎng)。H-2’為a鍵的糖，如葡萄糖，形成α-苷或β-苷時(shí)，偶合常數(shù)J不同，由此可判斷苷鍵構(gòu)型。H-2’為e鍵的糖，如鼠李糖，形成不同構(gòu)型苷的J值相近，無(wú)法判斷。ａ-L-鼠李糖苷J(rèn)1’2=Jae=2-3Hzβ-L-鼠李糖苷J(rèn)1’2=Jae=2-3Hz1HNMR：糖成苷后，端基質(zhì)子常位于較低場(chǎng)。ａ-L-鼠李糖苷2013CNMR：糖成苷后端基碳原子δ向低場(chǎng)位移，而其他碳變化不大。2D-NMR（NOE）α-D-葡萄糖苷，H1~H2

β-D-葡萄糖苷，H1~H3、H1~H513CNMR：糖成苷后端基碳原子δ向低場(chǎng)位移，而其他碳變化不21復(fù)習(xí)思考題：1.名詞解釋苷原生苷次生苷乙酰解反應(yīng)酶解反應(yīng)Smith降解Molish反應(yīng)α與β構(gòu)型全甲基化甲醇解苷化位移端基碳氧苷

2.比較以下各化合物水解難易，并說(shuō)明理由。A>B>D>C復(fù)習(xí)思考題：1.名詞解釋223.完成反應(yīng)式（1）寫(xiě)出苦杏仁苷在不同條件下的水解產(chǎn)物：a.稀酸；b.苦杏仁酶（2）寫(xiě)出碳苷的Smith降解產(chǎn)物。

4.問(wèn)答題（1）簡(jiǎn)述苷鍵裂解的方法、使用范圍及優(yōu)缺點(diǎn)。（2）如何從中藥材中提取分離苷類(lèi)成分，要注意哪些問(wèn)題？（3）簡(jiǎn)述開(kāi)展苷的結(jié)構(gòu)研究的程序及方法。（4）確定苷鍵構(gòu)型的方法有哪些？3.完成反應(yīng)式23第5節(jié)苷的提取、分離及檢識(shí)苷的提?。喝軇┓ㄜ盏姆蛛x：大孔樹(shù)脂法色譜法苷的檢識(shí)：化學(xué)檢識(shí)色譜檢識(shí)

第5節(jié)苷的提取、分離及檢識(shí)苷的提取：溶劑法241.苷的提取溶劑法：用極性由小到大的溶劑依次提取。常用溶劑有沸水、甲(乙)醇、正丁醇、乙酸乙酯等。！注意：苷的水解（酸、酶、堿的影響）。原生苷的提?。浩茐幕蛞种泼傅幕钚?。藥材迅速干燥拌料無(wú)機(jī)鹽如碳酸鈣用沸水、高濃度醇提取次生苷或苷元的提?。豪妹富钚?。發(fā)酵后或水解后，用親脂性有機(jī)溶劑提取。1.苷的提取溶劑法：用極性由小到大的溶劑依次提取。常用溶劑有25中藥化學(xué)苷類(lèi)2課件262.苷的分離純化溶劑處理法：利用溶解度差異分離。提取液濃縮后，用合適的溶劑處理，根據(jù)苷類(lèi)與雜質(zhì)的溶解度不同分離。如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。鉛鹽沉淀法：利用醋酸鉛在水或稀醇中能沉淀某類(lèi)成分的性質(zhì)，進(jìn)行除雜或提純。中性醋酸鉛能沉淀具鄰二酚OH、-COOH的酸性苷；堿式醋酸鉛能沉淀酚性成分。色譜法：利用混合物中各組分與固定相和流動(dòng)相的相互之間的作用不同，使各組分以不同程度分布在固定相和流動(dòng)相中，當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)固定相時(shí)，各組分以不同的速度移動(dòng)，達(dá)到分離。分離效果好，是一種實(shí)驗(yàn)室常規(guī)分離方法。2.苷的分離純化溶劑處理法：利用溶解度差異分離。提取液濃縮后27

按流動(dòng)相分：液相色譜（liquidchromatography）氣相色譜（gaschromatography）按操作方式分：薄層色譜紙色譜柱色譜按分離機(jī)理分：吸附色譜分配色譜離子交換色譜按極性分：正相色譜反相色譜色譜法（Chromatography）分類(lèi)：按流動(dòng)相分：液相色譜（liquidchromatogra282.苷的分離純化大孔樹(shù)脂吸附色譜原理：大孔樹(shù)脂是一類(lèi)具有多孔結(jié)構(gòu)、不溶于水的固體高分子物質(zhì)，可以通過(guò)物理吸附（范德華力）從水溶液中有選擇的吸附成分，達(dá)到分離目的。特點(diǎn)：選擇性、機(jī)械強(qiáng)度高、再生處理方便、吸附速度快等。應(yīng)用廣泛，如苷與糖類(lèi)的分離等。分類(lèi)：非極性、中極性、極性和強(qiáng)極性四類(lèi)。選擇的樹(shù)脂極性與被分離物質(zhì)極性既不能相似（吸附過(guò)強(qiáng)），也不能差太大（無(wú)法分離）。常用的有DA-101、DA-201、AB-8型等。操作：樣品用水溶解，上樣后依次用水、含水醇、濃醇洗脫。收集洗脫液，回收溶劑，濃縮干燥，即得。聚酰胺色譜凝膠色譜苷的分離（有效部位）：2.苷的分離純化大孔樹(shù)脂吸附色譜苷的分離（有效部位）：292.苷的分離純化硅膠、氧化鋁吸附色譜：適用于極性低的苷類(lèi)或苷元的分離。利用被分離組分與吸附劑之間的相互作用（可逆的范德華力）差異進(jìn)行分離。在洗脫過(guò)程中，柱內(nèi)不斷地發(fā)生解吸、吸附，再解吸、再吸附的過(guò)程。即被吸附的物質(zhì)被溶劑解吸而隨溶劑向下移動(dòng)，又遇到新的吸附劑顆粒被再吸附，后面流下的溶劑又再解吸而使其下移動(dòng)。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間以后，該物質(zhì)會(huì)向下移動(dòng)一定距離。此距離的長(zhǎng)短與吸附劑對(duì)該物質(zhì)的吸附力以及溶劑對(duì)該物質(zhì)的解吸(溶解)能力有關(guān)。不同的物質(zhì)由于吸附力和解吸力不同，移動(dòng)速度也不同。吸附力弱而解吸力強(qiáng)的物質(zhì)，移動(dòng)速度就較快。分配色譜：以硅膠、纖維素等為支持劑，水飽和的溶劑為流動(dòng)相進(jìn)行分離，適用于極性較大的苷類(lèi)成分。常用反相色譜，即以鍵合硅膠為固定相，含水的溶劑系統(tǒng)為流動(dòng)相分離。苷的純化（有效成分）：2.苷的分離純化硅膠、氧化鋁吸附色譜：適用于極性低的苷類(lèi)或苷30中藥化學(xué)苷類(lèi)2課件31中藥化學(xué)苷類(lèi)2課件32中藥化學(xué)苷類(lèi)2課件333.苷的檢識(shí)化學(xué)檢識(shí)Molish反應(yīng)（α-萘酚濃硫酸）：糖、苷（＋）紫色環(huán)。糖被氧化成糠醛，糖醛與酚胺縮合生成有色化合物。Fehling或Tollen反應(yīng)：還原糖（＋）。苷、非還原糖(-)。比較水解前后結(jié)果，判斷是糖還是苷。

RCHO+2Ag(NH3)2+OH－→RCOONH4+2Ag↓+3NH3+H2ORCHO+2Cu(OH)2+NaOH→RCOONa+Cu2O↓+3H2O3.苷的檢識(shí)化學(xué)檢識(shí)34第6節(jié)苷的結(jié)構(gòu)研究純度鑒定分子式的測(cè)定苷的水解苷元的結(jié)構(gòu)鑒定糖的結(jié)構(gòu)鑒定第6節(jié)苷的結(jié)構(gòu)研究純度鑒定35糖的結(jié)構(gòu)鑒定糖的種類(lèi)糖的數(shù)目糖鏈的結(jié)構(gòu)位置：苷元-糖、糖-糖順序：糖-糖構(gòu)型：苷鍵糖的結(jié)構(gòu)鑒定糖的種類(lèi)361.糖的種類(lèi)的確定色譜法—測(cè)定水解液中的單糖，與對(duì)照品比較。PC：最常用。TLC：點(diǎn)樣量較少≤5μg?？捎脽o(wú)機(jī)鹽（強(qiáng)堿弱酸）的水溶液制板，增加樣品承載量，改善分離效果。如0.3mol/LNa2HPO4、0.03mol/LH3BO3等。HPLC：直接進(jìn)樣，但靈敏度不及GC。GC：靈敏度高，但需水解、制備衍生物。NMR法—直接測(cè)定苷，與標(biāo)準(zhǔn)品的糖數(shù)據(jù)比較。1HNMR、13CNMR二維NMR1.糖的種類(lèi)的確定色譜法—測(cè)定水解液中的單糖，與對(duì)照品比較。37常見(jiàn)單糖紙色譜hRfBAW：正丁醇－醋酸－水（4:1:5,上層）BEW：正丁醇－乙醇－水（4:1:2）BBPW：正丁醇－苯－吡啶－水（5:1:3:3）PhOH：水飽和苯酚

常見(jiàn)單糖紙色譜hRfBAW：正丁醇－醋酸－水（4:1:5,382.糖的數(shù)目的確定MS法測(cè)定苷和苷元分子量，根據(jù)差值或碎片質(zhì)荷比差值計(jì)算。色譜法—測(cè)定水解液中的單糖TLC-Scan、HPLC-定量，以單糖對(duì)照品為標(biāo)準(zhǔn)。NMR法1HNMR：根據(jù)糖端基質(zhì)子信號(hào)數(shù)目確定；或全乙?；⑷谆瘮?shù)目推測(cè)。13CNMR：根據(jù)糖端基碳信號(hào)數(shù)目（90-112ppm）確定；或苷和苷元碳信號(hào)差值推斷。二維NMR

2.糖的數(shù)目的確定MS法393.糖的連接位置—苷元與糖13CNMR苷化位移（glycosylationshift,GS）：苷元與糖結(jié)合成苷后，苷元的成苷碳原子（α-C）與相鄰的碳原子（β-C）信號(hào)會(huì)發(fā)生位移，其他碳信號(hào)不變；糖端基碳原子與游離單糖信號(hào)相比也發(fā)生了位移。苷元：醇苷，α-C低場(chǎng)位移4-10ppm

β-C高場(chǎng)位移1-4.6ppm酚苷，α-C高場(chǎng)位移β-C低場(chǎng)位移糖：端基C低場(chǎng)位移4-7ppm相鄰C高場(chǎng)位移1-4ppm

二維NMR

3.糖的連接位置—苷元與糖13CNMR4013CNMR

法：苷的碳譜數(shù)據(jù)與單糖的碳譜數(shù)據(jù)比較，根據(jù)苷化位移規(guī)律可確定單糖的連接位置。若內(nèi)側(cè)糖的某碳原子向低場(chǎng)移動(dòng)（4-7ppm），而相鄰兩個(gè)碳原子又略向高場(chǎng)移動(dòng)（1-4ppm），確定內(nèi)側(cè)糖的碳原子是連接糖的位置。4.糖的連接位置—糖與糖13CNM