中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則nn課件

藥品質(zhì)量標準研究及分析方法驗證等有關(guān)問題探討

四川省食品藥品檢驗所伍丕娥2005年11月30日藥品質(zhì)量標準研究及分析方法驗證等有關(guān)問題探討

四川省食品藥1主要內(nèi)容

一、藥品質(zhì)量標準及標準提高行動計劃二、藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則三、質(zhì)量標準分析方法驗證四、微生物限度檢查的方法驗證五、藥品質(zhì)量標準研究中的常見問題

主要內(nèi)容2一、藥品質(zhì)量標準及標準

提高行動計劃1、我國藥品質(zhì)量標準的沿革及概況●公元659年（唐，新修本草）●公元1151年（宋，太平惠民和劑局方）●公元1930年（中華藥典、化學(xué)藥）●公元1950年至今共出版8版中國藥典：53、63（分為一、二部）、77、85、90、95、2000、2005（分為一、二、三部）●公元1950年至今：局（部）頒標準數(shù)十冊●公元1950年至2002年：省級地方標準一、藥品質(zhì)量標準及標準

提高行動計劃1、我國藥品質(zhì)32、國家藥品標準制定的基本原則●科學(xué)、實用、規(guī)范原則●質(zhì)量可控性原則●標準先進性原則2、國家藥品標準制定的基本原則●科學(xué)、實用、規(guī)范原則43、標準提高行動計劃

背景：2002年12月1日，我國已完成全部上市藥品的國家藥品標準的制定工作，取消了地方標準，實現(xiàn)了《藥品管理法》所規(guī)定的藥品必須符合國家藥品標準這一目標。然而，改革開放二十多年來，隨著醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)和藥品檢測技術(shù)水平的發(fā)展，以及加入WTO所面臨的新形勢，我國早期制定的國家藥品標準已嚴重滯后于藥品生產(chǎn)現(xiàn)狀和藥品檢測技術(shù)水平的發(fā)展，一些藥品標準已不足以控制藥品的質(zhì)量，難以保證人民用藥安全有效，亦給3、標準提高行動計劃背景：2002年125一些假冒偽劣藥品擾亂市場、危害百姓生命健康以可乘之機。因此2004年2月，根據(jù)國務(wù)院“食品藥品放心工程”的總體要求，國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布了國食藥監(jiān)注[2004]35號文，啟動了提高國家藥品標準行動計劃。計劃用3～5年時間，實現(xiàn)國家藥品標準的檢測技術(shù)達到國際先進水平。一些假冒偽劣藥品擾亂市場、危害百姓生命健康以可乘之機。6標準提高行動計劃的總體目標(1)在5年內(nèi)(2004年～2008年)分期、分批地完成中藥1～20冊的4000余個品種，化學(xué)藥品(9冊及歷版藥典遺留品種)500個品種；

(2)早期新藥轉(zhuǎn)正標準（99、2000年前轉(zhuǎn)正）約300種品種的標準提高工作；

(3)常用藥用輔料約50種的標準制定工作；

(4)完成《中國藥典》(2005年版)附錄檢測方法的科研和提高工作；實現(xiàn)國家藥品標準的質(zhì)量可控性及與國際先進標準的接軌。標準提高行動計劃的總體目標(1)在5年內(nèi)(20047二、藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則

為促進我國藥品的研究開發(fā)，指導(dǎo)藥物研究單位用科學(xué)規(guī)范的方法開展藥品研究工作，國家局自2003年啟動了藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則的起草和修訂工作。指導(dǎo)原則的修訂是以《中華人民共和國藥品管理法》和《藥品注冊管理辦法》為依據(jù)，以科學(xué)性、前瞻性、可操作性為指導(dǎo)思想，充分借鑒了ICH等技術(shù)指導(dǎo)原則。

二、藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則

8●今年3月18日國家食品藥品監(jiān)督管理局（國食藥監(jiān)注[2005]106號文）發(fā)布了16個有關(guān)化學(xué)藥物研究的技術(shù)指導(dǎo)原則，其中涉及藥學(xué)研究的有8個，涉及藥品質(zhì)量標準研究與分析方法驗證有2個：化學(xué)藥物質(zhì)量標準建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則

●今年3月18日國家食品藥品監(jiān)督管理局（國9●今年7月1日國家食品藥品監(jiān)督管理局（國食藥監(jiān)注[2005]331號文）發(fā)布了12個有關(guān)中藥、天然藥物研究的技術(shù)指導(dǎo)原則，其中涉及藥學(xué)研究的有4個，目前暫無涉及質(zhì)量標準規(guī)范研究和分析方法驗證技術(shù)的指導(dǎo)原則

●今年7月1日國家食品藥品監(jiān)督管理局（國食10三、質(zhì)量標準分析方法驗證

方法學(xué)研究包含方法的選擇及驗證（一）質(zhì)量標準分析方法驗證的技術(shù)指導(dǎo)文件有：

1、化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則（編號[H]GPH5-1)

三、質(zhì)量標準分析方法驗證112、中國藥典2005年版二部附錄《藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則》3、中國藥典2005年版一部附錄《中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則》4、1999年11月12日國家藥品監(jiān)督管理局（國藥管注[1999]363號文）發(fā)布了《中藥新藥研究的技術(shù)要求》

2、中國藥典2005年版二部附錄《藥品質(zhì)125、《化學(xué)藥物質(zhì)量標準建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則》要求質(zhì)量標準中建立的分析方法必須經(jīng)過驗證

6、藥品注冊的國際技術(shù)要求（ICH)Q2a和Q2b

（1、2、3、5、6中要求驗證的項目和內(nèi)容基本一致）5、《化學(xué)藥物質(zhì)量標準建立的規(guī)范化過程13

（二）關(guān)于ICH的簡介：

?人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（InternationalConferenceonHamonisationTechnicalRequirementsforRejistrationofPharmaceuticalsforHumanUse)（二）關(guān)于ICH的簡介：14?ICH是1990年由美國、日本、歐盟三方的政府藥品管理部門和制藥行業(yè)共同發(fā)起，旨在協(xié)調(diào)各國藥品注冊的技術(shù)要求，制定了一系列有關(guān)藥品質(zhì)量（Q)、療效(E)、安全性(s)的技術(shù)指導(dǎo)原則,迄今已舉行了六次會議，共制定了60多個文件。

?ICH目前共有17個成員國，我國不是，但是WHO要求各非成員國積極推廣應(yīng)用ICH。

?ICH是1990年由美國、日本、歐盟15?我國目前藥品注冊的技術(shù)要求自成體系，國家局要求將ICH作為主要借鑒和參考依據(jù)。

?ICH中的Q2a和Q2b是分析方法驗證的專門章節(jié)。?我國目前藥品注冊的技術(shù)要求自成體系，國16（三）現(xiàn)將中藥新藥質(zhì)量標準研究的技術(shù)要求（1999年11月執(zhí)行）與現(xiàn)行的分析方法驗證的內(nèi)容作一比較（見下表）（三）現(xiàn)將中藥新藥質(zhì)量標準研究的技術(shù)要求（1999年11月執(zhí)1799年中藥標準研究“技術(shù)要求”與現(xiàn)行的分析方法驗證項目比較表

標準研究技術(shù)要求（99年11月）現(xiàn)行的方法驗證要求回收率準確度精密度重復(fù)性精密度重復(fù)性（同一個人在較短的間隔時間內(nèi)）中間精密度（不同人、不同設(shè)備、不同時間）重現(xiàn)性（不同實驗室、不同人）空白干擾試驗（專屬性）專屬性檢測限定量限線性和線性范圍線性耐用性范圍穩(wěn)定性99年中藥標準研究“技術(shù)要求”與現(xiàn)行的分析方法驗證項目比181、現(xiàn)行的分析方法“驗證指導(dǎo)原則”，各驗證內(nèi)容更為科學(xué)，方法更為細化，可操作性更強，但仍有難于理解和掌握之處：（1）關(guān)于“范圍”中藥怎樣考察，有待探討（2）中藥樣品的前處理與檢測結(jié)果的準確度、精密度直接相關(guān)，“耐用性”能否完全評價樣品前處理的合理性？應(yīng)怎樣與各項驗證有機結(jié)合，有待探討

2、應(yīng)根據(jù)不同檢測項目的具體情況，有針對性的進行方法驗證（見下表）1、現(xiàn)行的分析方法“驗證指導(dǎo)原則”，各驗證19

檢驗項目和驗證內(nèi)容

項目內(nèi)容鑒別限量檢查含量測定及溶出度測定定量限度準確度－＋－＋重復(fù)性－＋－＋中間精密度－＋①－＋①重現(xiàn)性②＋＋＋＋專屬性③＋＋＋＋檢測限－－＋－定量限－＋－－線性－＋－＋范圍－＋－＋耐用性＋＋＋＋

檢驗項目和驗證內(nèi)容

項目鑒別20▉準確度（真實度）：準確度系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示，準確度應(yīng)在規(guī)定的范圍測試。用于定量測定的分析方法均需做準確度驗證。▉準確度（真實度）：準確度系指用該方法測211、準確度的考察方法中藥含量分析一般用已知純度的對照品做加樣回收測定（化學(xué)藥品作直接回收實驗），即于已知被測成分含量的供試品（化學(xué)藥品為空白樣品）中精密加入一定量的已知純度的被測成分對照品，依法測定。用實測值與供試品中含有量之差，除以加入對照品量計算回收率。1、準確度的考察方法22

在加樣回收實驗中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標準曲線線性范圍之內(nèi)；加入的對照品的量要適當，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實性差。加入對照品的操作過程必須有可操作性。在加樣回收實驗中須注意對照品的加入量與供試品23

式中A為供試品所含被測成分量（化學(xué)藥品A值為零）；

B為加入對照品量；

C為實測值。

回收率%=C-A×100%B式中A為供試品所含被測成分量（化學(xué)藥品A值為零）；242、數(shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個（原至少5個）測定結(jié)果進行評價；或設(shè)計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份（原兩份）供試品溶液進行測定，用9個測定結(jié)果進行評價，一般中間濃度加入量與所取供試品含量之比控制在1：1左右（化學(xué)藥品為100%濃度）。應(yīng)報告供試品取樣量、供試品中含有量（化學(xué)藥品無此項）、對照品加入量、測定結(jié)果和回收率（%）計算值，以及回收率（%）的相對標準偏差（RSD%）。2、數(shù)據(jù)要求25▉精密度：指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。精密度包括：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。用于定量測定的分析方法均應(yīng)考察方法的精密度。▉精密度：指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品261、重復(fù)性（間歇測量精密度）在相同的操作條件下，較短的時間間隔精密度。（1）用100%濃度水平至少測定6次（5次）進行評價，（2）在規(guī)定的范圍內(nèi)，設(shè)計3個不同濃度水平，每個濃度制備3份供試液，每份測定3次，共9個結(jié)果進行評價。

2、中間精密度為考察隨即變動因素對精密度的影響，應(yīng)進行中間精密度試驗。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備等。

(ICH認為中間精密度沒有必要逐個考察每個因素，鼓勵使用較為簡化的矩陣試驗設(shè)計)1、重復(fù)性（間歇測量精密度）在相同的操作條件下，較273、當分析方法將被法定標準采用時，應(yīng)進行重現(xiàn)性試驗。例如，建立藥典分析方法時通過不同實驗室的復(fù)核檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果。

4、數(shù)據(jù)要求重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性均應(yīng)報告標準偏差、相對標準偏差和可信限。目前，分析方法研究中一般只作了“重復(fù)性”，藥檢所的技術(shù)復(fù)核相當于是“重現(xiàn)性”考察，經(jīng)“重現(xiàn)性”驗證的分析方法，可不考察“中間精密度”。3、當分析方法將被法定標準采用時，應(yīng)進行重現(xiàn)性試驗。28▉專屬性：專屬性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能正確測定出被測成分的特性。鑒別實驗、限量檢查、含量測定等方法均應(yīng)考察其專屬性。▉專屬性：專屬性系指在其他成分可能存在下，291、鑒別實驗應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)（如輔料）或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分。不含被測成分的供試品（空白樣品）以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，均不得干擾測定。顯微鑒別、色譜及光譜鑒別等應(yīng)附相應(yīng)的代表性圖象或圖譜。1、鑒別實驗302、含量測定和限量檢查以不含被測成分的供試品（除去含待測成分藥材或不含待測成分的模擬處方）實驗說明方法的專屬性。色譜法、光譜法等應(yīng)附代表性圖譜，并標明相關(guān)成分在圖中的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進行峰純度檢查。2、含量測定和限量檢查31▉檢測限：指供試品中被測物能被檢出的最低量。該指標的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測能力，特別是微量有害雜質(zhì)的檢查應(yīng)證明其方法具有足夠低的檢測限，以保證檢出需控制的雜質(zhì)。如化學(xué)原料藥中的有機溶劑殘留量、中藥中馬兜鈴酸的檢查等，均應(yīng)對檢測限進行考察。確定檢測限有兩種方法：（1）、直觀法用一系列已知濃度的供試品進行分析，試驗出能被可靠檢出的最低濃度或量。儀器或非儀器方法均可使用。▉檢測限：指供試品中被測物能被檢出的最低量。32

（2）、信噪比法僅適用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度供試品測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1或2：1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。（3）、數(shù)據(jù)要求應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。

（2）、信噪比法僅適用于能顯示基33▉定量限：定量限系指供試品中被測成分能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具有一定準確度和精密度。用于限量檢查的定量測定的分析方法（如以5-羥甲基糠醛為對照品測定葡糖糖注射液中5-羥甲基糠醛的量、以馬兜鈴酸A為對照測定含量等）應(yīng)確定定量限。常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10：1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量進行確定。▉定量限：定量限系指供試品中被測成分34▉線性：線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與供試品中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。▉線性：線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試35

應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎靡粌湟航?jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試品的方法進行測定，至少制備5個濃度的供試品。以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進行線性回歸計算（如采用蒸發(fā)光散射檢測器需取響應(yīng)值的對數(shù)）。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系。可用一儲36

數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。▉范圍：范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。

數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性37

范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準確度、精密度結(jié)果及要求確定。一般來說，線性范圍窄、精密度要求高，范圍就相應(yīng)較窄。對于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其范圍應(yīng)大于被限定含量的區(qū)間。溶出度或釋放度中的溶出量測定，范圍應(yīng)為限度的±20%。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準確38

范圍不是線性關(guān)系考察的濃度范圍，而是測定方法應(yīng)能達到的準確測定的范圍。范圍是規(guī)定值，對于化學(xué)藥品，是根據(jù)測定項目和精密度要求規(guī)定的，如制劑規(guī)定含量為標示量的90%~110%，即方法的范圍考察規(guī)定應(yīng)為80%~120%。對于中藥分析方法，范圍的確定較為困難，但可從以下幾方面考慮：范圍不是線性關(guān)系考察的濃度范圍，而是測定391、含量限度有高、低限時，可參照化學(xué)藥品；

2、中藥往往只規(guī)定下限，限度值為1~10%時，考察范圍建議為低限-30%，高限50%；限度值小于1%時，考察范圍建議為低限-50%，高限在條件允許的情況下盡量做得更寬。1、含量限度有高、低限時，可參照化學(xué)藥品；40▉耐用性：耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。開始研究分析方法時，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。▉耐用性：耐用性系指在測定條件有小的變41

典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)（中藥的提取次數(shù)考察不屬于耐用性）、時間等。液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成比例或pH值，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫，流速及檢測波長等。氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔體，柱溫，進樣口和檢測器溫度等。薄層色譜的變動因素有：不同廠牌的薄層板，點樣方式及薄層展開時溫度及相對濕度的變化等。典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品42

經(jīng)實驗，應(yīng)說明小的變動能否通過設(shè)計的系統(tǒng)適用性實驗，以確保方法有效。▉穩(wěn)定性：為“中藥新藥質(zhì)量標準研究的技術(shù)要求”中對供試品溶液和對照品溶液的要求，可納入新版藥典分析方法驗證指導(dǎo)原則的“耐用性”中。經(jīng)實驗，應(yīng)說明小的變動能否通過設(shè)計的系統(tǒng)43

四、微生物限度或無菌檢查的方法驗證

背景：（1）今年7月1日正式執(zhí)行的中國藥典2005年版附錄規(guī)定：建立微生物限度或無菌檢查方法時必須進行方法驗證。（2）國藥典發(fā)（2005）98號文（10月11日）強調(diào)了驗證實驗的重要性和必要性，同時作出以下規(guī)定：進口檢驗—必須提供方法驗證資料或詳細的SOP資料，經(jīng)審核后在標準正文中要明確檢查方法的關(guān)鍵操作點注冊檢驗—必須提供方法驗證資料，并在標準正文中寫明檢查方法的關(guān)鍵操作點，否則，審核意見中要明確指出“方法學(xué)未經(jīng)驗證，無法檢驗”，并建議重新建立檢查方法。監(jiān)督檢驗—也應(yīng)請企業(yè)提供方法驗證資料，未經(jīng)驗證的品種，決不能給出“符合2005年版《中國藥典》的規(guī)定”的結(jié)論。

四、微生物限度或無菌檢查的方法驗證

背景：（1）今年744

（3）2005年11月14日中國藥品生物制品檢定所對各省市藥檢所發(fā)出《關(guān)于征集2005年版中國藥典“微生物限度檢查法”和“無菌檢查法”方法驗證結(jié)果的通知，要求將完成驗證的品種及所收集的企業(yè)完成的驗證品種按要求于05年11月30日以前以電子文檔的形式寄予中檢所抗生素室，將在抗生素工作網(wǎng)站組建“藥品無菌檢查和微生物限度檢查方法驗證品種信息交流平臺”，目的為減少重復(fù)工作，實現(xiàn)資源共享，加快驗證實驗的進程。（3）2005年11月14日中國藥品生物制品檢定所45有以下建議供參考：

（1）中國藥典2005年版二部附錄通則項下未規(guī)定作微生物限度檢查的化學(xué)藥品的四種普通口服固體制劑即丸劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑不要求作微生物限度檢查，如果發(fā)現(xiàn)問題，可進行檢查，不符合規(guī)定發(fā)不合格報告。有以下建議供參考：（1）中國藥典2005年版二46

（2）除以上四種劑型以外的所有劑型，均應(yīng)要求進行微生物限度檢查，并要求通過方法驗證確立合適的微生物限度檢查法（應(yīng)將確定的方法在標準正文中寫明），若申報單位的申報資料中缺驗證資料，藥檢所按98號文的規(guī)定辦。

（2）除以上四種劑型以外的所有劑型，均應(yīng)要求進行微生47

（3）許多需進行微生物限度檢查和無菌檢查的上市老品種，企業(yè)應(yīng)持積極主動的態(tài)度，有計劃地分期分批完成驗證工作，若是多家生產(chǎn)的老品種企業(yè)可通過共同協(xié)商，合理分工，實行資源共享，在較短時間內(nèi)完成驗證工作。中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則nn課件48

（4）目前注冊檢驗申報資料中的驗證實驗有造假現(xiàn)象，申報單位應(yīng)認真對待，嚴格按藥典的要求進行驗證。造假在經(jīng)藥檢所復(fù)核檢驗，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，藥檢所會提出“方法驗證不符合要求”的意見。是否有抑菌作用，一可通過處方分析，二可通過檢驗結(jié)果判定。

中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則nn課件49

五、藥品質(zhì)量標準研究中的常見問題

近年來，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，高新分析技術(shù)的日益普及，年輕人才的飛速成長，我省新藥（含仿制藥）研究整體水平普遍提高，但由于未有效把握“科學(xué)、合理、規(guī)范”的標準研究的基本原則。出現(xiàn)一些問題值得我們思考并加以重視。針對一些在質(zhì)量標準中常見的共性問題進行以下探討。

五、藥品質(zhì)量標準研究中的常見問題

近年來，50（一）、中藥的常見問題1、質(zhì)量標準控制內(nèi)容不全或定性與定量目標成分重復(fù)控制，致使標準缺乏完整的可控性，非常典型的例子為金剛藤系列制劑，斷血流系列制劑等，標準中僅收載同時以菝葜皂苷元為對照品進行薄層鑒別和高效夜相色譜法測定含量，檢驗方法看似有專屬性，方法驗證也作得很完整，但標準內(nèi)容覆蓋不全，可控性較差，且還提供了絕好的造假機會。趕黃草等單味藥制劑均有類似情況。正確的設(shè)計應(yīng)怎樣做？（一）、中藥的常見問題1、質(zhì)量標準控制內(nèi)容512、關(guān)注05版藥典將部分藥材按不同基源作了分別收載的情況，如五味子南五味子；粉萆薢、綿萆薢；寒水石、北寒水石；大青葉、蓼大青葉；黃柏、關(guān)黃柏；金銀花山銀花；葛根粉葛；土木香藏木香；山楂、南山楂；敗醬草、北敗醬草；劉寄奴、北劉寄奴；板藍根、南板藍根；牛膝、懷牛膝；金錢草、廣金錢草；山豆根、北豆根。

8號資料與申報標準有矛盾，如葛根。2、關(guān)注05版藥典將部分藥材按不同基源作523、關(guān)注國家局有關(guān)牛黃與人工牛黃的替代、麝香與人工麝香的替代的有關(guān)規(guī)定，在處方中應(yīng)明確表示。

4、關(guān)注國家局關(guān)于含馬兜鈴酸藥材的有關(guān)規(guī)定，該替換的必須替換。

5、地方標準收載的藥材與國家標準同名必須使用國家標準，如黃芪、柴胡等。

3、關(guān)注國家局有關(guān)牛黃與人工牛黃的替代、麝香536、改變劑型的新藥或仿制藥中的提取物不能等同于單一化學(xué)成分，如某中成藥用黃芩提取物（以黃芩苷計）投料，此處的“以黃芩苷計”在原標準中，用的是紫外-可見分光光度法測定黃芩苷的含量，而申報單位所附的標準為采用高效液相色譜法測定黃芩苷含量，這兩種方法提供的測定信息是有差異的。6、改變劑型的新藥或仿制藥中的提取物不能等同于547、樣品的前處理設(shè)計不盡合理，特別復(fù)雜樣品的前處理申報單位往往設(shè)計不合理。操作也不具可操作性。一個科學(xué)合理的復(fù)雜樣品的前處理方法需設(shè)計者具有扎實的理論基礎(chǔ)知識和豐富的工作經(jīng)驗，應(yīng)在盡可能排除雜質(zhì)的干擾同時，確保待測成分在每一部操作環(huán)節(jié)中均不能丟失，而每一個操作細節(jié)均應(yīng)有可操作性，要注意整體的合理適用。7、樣品的前處理設(shè)計不盡合理，特別復(fù)雜樣558、由于中藥的特殊情況，含量測定往往只規(guī)定下限，導(dǎo)致個別研究者錯誤地將中藥的含量測定看作是一種限度檢查，在實驗設(shè)計上缺乏“量”的意識，對照品的取用量小于10mg是其通病，所制定的操作步驟極為粗放，完全無微量分析的概念。8、由于中藥的特殊情況，含量測定往往只規(guī)定569、含量測定選擇的對象應(yīng)首先為有效成分，且此成分應(yīng)具有專屬性，如山茱萸應(yīng)測定馬錢苷、丹參除測定丹參同酮ⅡA還應(yīng)測定丹參酚酸B、黃連或黃柏若選擇鹽酸小檗堿為測定對象，薄層色譜必須以對照藥材為對照，以使標準整體可控。

9、含量測定選擇的對象應(yīng)首先為有效成分，且5710、若中藥的有效成分不明，應(yīng)對所采用的指標成分作初步的論證，即選擇該成分的意義何在等等。

11、同一色譜條件下若能同時測定多個成分，應(yīng)盡可能多測，如大黃、人參等，若有干擾應(yīng)提供排除干擾但仍不成功的研究資料。

10、若中藥的有效成分不明，應(yīng)對所采用的指5812、關(guān)于大類化學(xué)成分（如總黃酮、總皂苷、總氨基酸等）的含量測定存在的有關(guān)問題

（1）一般來說，大類化學(xué)成分（如總黃酮、總皂苷等）的含量測定不具專屬性，但如果薄層鑒別使用的是對照藥材，所建立的定量方法經(jīng)過驗證，可以認為標準基本可控，無必要再采用高效液相色譜法對單一化學(xué)成分進行含量測定（同時采用“總”和“單”當然提倡，但應(yīng)該考慮其必要性）。

12、關(guān)于大類化學(xué)成分（如總黃酮、總皂苷、總氨基59

（2）在諸多的藥品注冊申報標準經(jīng)?？梢姡偟拇箢惢瘜W(xué)成分含量高，而單一組分含量低，如果為黃酮類成分，單一化學(xué)成分含量測定的色譜圖僅呈現(xiàn)較為單一的色譜峰，說明為“大類化學(xué)成分含量高”作出貢獻的還有其他類成分，但申報資料所附的空白樣品圖譜顯示，空白樣品無干擾，這樣的研究資料水分太重，應(yīng)加強樣品的前處理，有效排除干擾，最大限度地富集待測成分。（3）樣品的光譜圖與對照品無相似性，最大吸收波長（或波長范圍）相差2nm以上，除考慮前處理是否合理外，有時還應(yīng)考慮所選用的對照品是否合適？（2）在諸多的藥品注冊申報標準經(jīng)常可見，總的大60

（4）個別情況下，總的大類成分的定量測定比單一成分的定量測定更具專屬性，如有一以某藥材為原料生產(chǎn)的單味制劑，質(zhì)量標準同時收有總的大類成分的含量測定和兩個單一化學(xué)成分的含量測定，如果投料的藥材中混有與該藥材同科同屬但不同種的藥材，兩種單一化學(xué)成分的含量測定符合規(guī)定，但采用紫外-可見分光光度法測定總的大類成分時，對照品與樣品的最大吸收波長相差非常大，光譜圖的相似度也較差，在此情況下，總的大類成分的含量測定是不可替代的。（4）個別情況下，總的大類成分的定量測定比單6113、多糖的含量測定方法普遍無專屬性，有以下建議加以彌補

（1）加強薄層色譜研究，設(shè)置相應(yīng)特征糖對照品，將經(jīng)水解和未水解的樣品點于同一張板上；（2）多糖的分子量及其分布檢測能較大程度地反映專屬性的信息，應(yīng)對其研究，并納入標準正文；（3）有條件的情況下，可采取HPCE測定法。

13、多糖的含量測定方法普遍無專屬性，有以下建議加6214、應(yīng)提倡大量使用對照藥材及對照提取物作為薄層鑒別的對照物質(zhì)。因為其信息量更為豐富，使用成本也較低。但需注意：僅用“與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點”進行描述，缺乏完整性與嚴謹性，應(yīng)描述個數(shù)或描述為“主斑點”。14、應(yīng)提倡大量使用對照藥材及對照提取物作為6315、薄層鑒別所用的另一展開系統(tǒng)驗證與前面講的方法“驗證”的含義完全不同，采用另一展開系統(tǒng)，實際上屬于方法選擇，而且有時還不止選擇一個展開系統(tǒng)。薄層鑒別的方法驗證應(yīng)對選定的色譜條件，進行驗證。

15、薄層鑒別所用的另一展開系統(tǒng)驗證與前面講的6416、在雜質(zhì)控制方面，與國外藥典相比我們存在理念上的差異，如英國藥典收載的大黃，含量測定采用紫外-可見分光光度法（以大黃酸作對照）測定總蒽醌的含量，但對酸不溶性灰份的控制非常嚴格，我國目前上市的含原藥粉的中藥制劑極少見對酸不溶性灰份進行控制，這是極為不妥的！有害雜質(zhì)（如農(nóng)殘、有害金屬、生物毒素等）的控制更是空白！16、在雜質(zhì)控制方面，與國外藥典相比我們存在理6517、采用高效液相色譜法測定含量時，不能將色譜條件的選擇與方法耐用性驗證相混淆。實際上我們目前研發(fā)的新藥大多為低水平重復(fù)，有許多可借鑒的成熟方法，是否有必要走過場似地選擇多種流動相，值得考慮。若色譜條件一經(jīng)選定，應(yīng)對多色譜柱的變更、流動相各組分比例的小變化、柱溫及流速的小變化做耐用性驗證。17、采用高效液相色譜法測定含量時，不能將色譜6618、制劑浸出物的含量限度用百分含量表示，合理嗎？

19、標準研究中，應(yīng)盡量避免使用苯、三氯甲烷等有害溶劑。

20、標準正文的書寫極不規(guī)范，特別是制法。建議最好不必寫出藥材的炮制過程、制搖設(shè)備的名稱、噴霧干燥的壓力及溫度等，簡單扼要描述主要工藝步驟、關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)即可。

21、建議性狀項下的描述最好顏色有一個幅度，膠囊若有制粒過程，最好描述為顆粒及粉末。

18、制劑浸出物的含量限度用百分含量表示67（二）化學(xué)藥品的常見問題1、有關(guān)物質(zhì)的研究不到位，所建立的檢測方法不能真實反映雜質(zhì)的存在情況，應(yīng)按有關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則進行，并對方法進行驗證。

2、氣相色譜法檢測有機溶劑殘留量、氨基酸分析儀測定氨基酸含量、原子吸收分光光度法測定金屬離子含量、分子排阻色譜法（凝膠柱）測定分子量及其分布等，缺乏方法學(xué)研究資料，往往以某個單位的委托檢驗（或代測）報告代替。

（二）化學(xué)藥品的常見問題1、有關(guān)物質(zhì)683、溶出度檢查方法的研究不到位，缺乏方法選擇和驗證資料，應(yīng)按有關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則進行，并對方法進行驗證。

4、抗生素類藥品需按毫克效價單位投料的，按重量單位投料，特別是青霉素V鉀類系列制劑，沒有認真研究藥典的相關(guān)規(guī)定。

5、細菌類毒素檢查缺乏干擾實驗。

3、溶出度檢查方法的研究不到位，缺乏696、供靜脈注射的100ml以下注射劑，研究資料缺乏不溶性微粒的考察。

7、生化藥品的命名不規(guī)范，特別是一些仿制進口生化藥品的名稱不規(guī)范。

8、pH值、溶液的顏色等項目缺乏所配置濃度的依據(jù)。

9、“無水物”與“干燥品”的概念混淆。

6、供靜脈注射的100ml以下注射劑，研究7010、雜質(zhì)控制項目設(shè)置不全，應(yīng)根據(jù)工藝過程中可能引入的雜質(zhì)設(shè)置控制項目。

11、標準正文的書寫極不規(guī)范，特別是有機殘留溶劑的書寫五花八門，建議參照中國藥典（頂空進樣、程序升溫）書寫。熱原的檢查標準正文中往往無家兔的每公斤注射量。10、雜質(zhì)控制項目設(shè)置不全，應(yīng)根據(jù)工藝過程中可71

實際上，在藥品標準研究中，遠不止存在上述問題，希望大家在今后的研究工作中，認真學(xué)習藥品研究的各種政策法規(guī)、技術(shù)指導(dǎo)原則、中國藥典、標準工作手冊等，關(guān)注和研究藥品研究的新問題和新情況，全方位提高藥品研發(fā)的技術(shù)水平，以滿足新形勢下對藥品研究的要求。實際上，在藥品標準研究中，遠不止存在上述問題72謝謝大家謝謝大家73藥品質(zhì)量標準研究及分析方法驗證等有關(guān)問題探討

四川省食品藥品檢驗所伍丕娥2005年11月30日藥品質(zhì)量標準研究及分析方法驗證等有關(guān)問題探討

四川省食品藥74主要內(nèi)容

一、藥品質(zhì)量標準及標準提高行動計劃二、藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則三、質(zhì)量標準分析方法驗證四、微生物限度檢查的方法驗證五、藥品質(zhì)量標準研究中的常見問題

主要內(nèi)容75一、藥品質(zhì)量標準及標準

提高行動計劃1、我國藥品質(zhì)量標準的沿革及概況●公元659年（唐，新修本草）●公元1151年（宋，太平惠民和劑局方）●公元1930年（中華藥典、化學(xué)藥）●公元1950年至今共出版8版中國藥典：53、63（分為一、二部）、77、85、90、95、2000、2005（分為一、二、三部）●公元1950年至今：局（部）頒標準數(shù)十冊●公元1950年至2002年：省級地方標準一、藥品質(zhì)量標準及標準

提高行動計劃1、我國藥品質(zhì)762、國家藥品標準制定的基本原則●科學(xué)、實用、規(guī)范原則●質(zhì)量可控性原則●標準先進性原則2、國家藥品標準制定的基本原則●科學(xué)、實用、規(guī)范原則773、標準提高行動計劃

背景：2002年12月1日，我國已完成全部上市藥品的國家藥品標準的制定工作，取消了地方標準，實現(xiàn)了《藥品管理法》所規(guī)定的藥品必須符合國家藥品標準這一目標。然而，改革開放二十多年來，隨著醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)和藥品檢測技術(shù)水平的發(fā)展，以及加入WTO所面臨的新形勢，我國早期制定的國家藥品標準已嚴重滯后于藥品生產(chǎn)現(xiàn)狀和藥品檢測技術(shù)水平的發(fā)展，一些藥品標準已不足以控制藥品的質(zhì)量，難以保證人民用藥安全有效，亦給3、標準提高行動計劃背景：2002年1278一些假冒偽劣藥品擾亂市場、危害百姓生命健康以可乘之機。因此2004年2月，根據(jù)國務(wù)院“食品藥品放心工程”的總體要求，國家食品藥品監(jiān)督管理局頒布了國食藥監(jiān)注[2004]35號文，啟動了提高國家藥品標準行動計劃。計劃用3～5年時間，實現(xiàn)國家藥品標準的檢測技術(shù)達到國際先進水平。一些假冒偽劣藥品擾亂市場、危害百姓生命健康以可乘之機。79標準提高行動計劃的總體目標(1)在5年內(nèi)(2004年～2008年)分期、分批地完成中藥1～20冊的4000余個品種，化學(xué)藥品(9冊及歷版藥典遺留品種)500個品種；

(2)早期新藥轉(zhuǎn)正標準（99、2000年前轉(zhuǎn)正）約300種品種的標準提高工作；

(3)常用藥用輔料約50種的標準制定工作；

(4)完成《中國藥典》(2005年版)附錄檢測方法的科研和提高工作；實現(xiàn)國家藥品標準的質(zhì)量可控性及與國際先進標準的接軌。標準提高行動計劃的總體目標(1)在5年內(nèi)(200480二、藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則

為促進我國藥品的研究開發(fā)，指導(dǎo)藥物研究單位用科學(xué)規(guī)范的方法開展藥品研究工作，國家局自2003年啟動了藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則的起草和修訂工作。指導(dǎo)原則的修訂是以《中華人民共和國藥品管理法》和《藥品注冊管理辦法》為依據(jù)，以科學(xué)性、前瞻性、可操作性為指導(dǎo)思想，充分借鑒了ICH等技術(shù)指導(dǎo)原則。

二、藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則

81●今年3月18日國家食品藥品監(jiān)督管理局（國食藥監(jiān)注[2005]106號文）發(fā)布了16個有關(guān)化學(xué)藥物研究的技術(shù)指導(dǎo)原則，其中涉及藥學(xué)研究的有8個，涉及藥品質(zhì)量標準研究與分析方法驗證有2個：化學(xué)藥物質(zhì)量標準建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則

●今年3月18日國家食品藥品監(jiān)督管理局（國82●今年7月1日國家食品藥品監(jiān)督管理局（國食藥監(jiān)注[2005]331號文）發(fā)布了12個有關(guān)中藥、天然藥物研究的技術(shù)指導(dǎo)原則，其中涉及藥學(xué)研究的有4個，目前暫無涉及質(zhì)量標準規(guī)范研究和分析方法驗證技術(shù)的指導(dǎo)原則

●今年7月1日國家食品藥品監(jiān)督管理局（國食83三、質(zhì)量標準分析方法驗證

方法學(xué)研究包含方法的選擇及驗證（一）質(zhì)量標準分析方法驗證的技術(shù)指導(dǎo)文件有：

1、化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)指導(dǎo)原則（編號[H]GPH5-1)

三、質(zhì)量標準分析方法驗證842、中國藥典2005年版二部附錄《藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則》3、中國藥典2005年版一部附錄《中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則》4、1999年11月12日國家藥品監(jiān)督管理局（國藥管注[1999]363號文）發(fā)布了《中藥新藥研究的技術(shù)要求》

2、中國藥典2005年版二部附錄《藥品質(zhì)855、《化學(xué)藥物質(zhì)量標準建立的規(guī)范化過程技術(shù)指導(dǎo)原則》要求質(zhì)量標準中建立的分析方法必須經(jīng)過驗證

6、藥品注冊的國際技術(shù)要求（ICH)Q2a和Q2b

（1、2、3、5、6中要求驗證的項目和內(nèi)容基本一致）5、《化學(xué)藥物質(zhì)量標準建立的規(guī)范化過程86

（二）關(guān)于ICH的簡介：

?人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（InternationalConferenceonHamonisationTechnicalRequirementsforRejistrationofPharmaceuticalsforHumanUse)（二）關(guān)于ICH的簡介：87?ICH是1990年由美國、日本、歐盟三方的政府藥品管理部門和制藥行業(yè)共同發(fā)起，旨在協(xié)調(diào)各國藥品注冊的技術(shù)要求，制定了一系列有關(guān)藥品質(zhì)量（Q)、療效(E)、安全性(s)的技術(shù)指導(dǎo)原則,迄今已舉行了六次會議，共制定了60多個文件。

?ICH目前共有17個成員國，我國不是，但是WHO要求各非成員國積極推廣應(yīng)用ICH。

?ICH是1990年由美國、日本、歐盟88?我國目前藥品注冊的技術(shù)要求自成體系，國家局要求將ICH作為主要借鑒和參考依據(jù)。

?ICH中的Q2a和Q2b是分析方法驗證的專門章節(jié)。?我國目前藥品注冊的技術(shù)要求自成體系，國89（三）現(xiàn)將中藥新藥質(zhì)量標準研究的技術(shù)要求（1999年11月執(zhí)行）與現(xiàn)行的分析方法驗證的內(nèi)容作一比較（見下表）（三）現(xiàn)將中藥新藥質(zhì)量標準研究的技術(shù)要求（1999年11月執(zhí)9099年中藥標準研究“技術(shù)要求”與現(xiàn)行的分析方法驗證項目比較表

標準研究技術(shù)要求（99年11月）現(xiàn)行的方法驗證要求回收率準確度精密度重復(fù)性精密度重復(fù)性（同一個人在較短的間隔時間內(nèi)）中間精密度（不同人、不同設(shè)備、不同時間）重現(xiàn)性（不同實驗室、不同人）空白干擾試驗（專屬性）專屬性檢測限定量限線性和線性范圍線性耐用性范圍穩(wěn)定性99年中藥標準研究“技術(shù)要求”與現(xiàn)行的分析方法驗證項目比911、現(xiàn)行的分析方法“驗證指導(dǎo)原則”，各驗證內(nèi)容更為科學(xué)，方法更為細化，可操作性更強，但仍有難于理解和掌握之處：（1）關(guān)于“范圍”中藥怎樣考察，有待探討（2）中藥樣品的前處理與檢測結(jié)果的準確度、精密度直接相關(guān)，“耐用性”能否完全評價樣品前處理的合理性？應(yīng)怎樣與各項驗證有機結(jié)合，有待探討

2、應(yīng)根據(jù)不同檢測項目的具體情況，有針對性的進行方法驗證（見下表）1、現(xiàn)行的分析方法“驗證指導(dǎo)原則”，各驗證92

檢驗項目和驗證內(nèi)容

項目內(nèi)容鑒別限量檢查含量測定及溶出度測定定量限度準確度－＋－＋重復(fù)性－＋－＋中間精密度－＋①－＋①重現(xiàn)性②＋＋＋＋專屬性③＋＋＋＋檢測限－－＋－定量限－＋－－線性－＋－＋范圍－＋－＋耐用性＋＋＋＋

檢驗項目和驗證內(nèi)容

項目鑒別93▉準確度（真實度）：準確度系指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般用回收率（%）表示，準確度應(yīng)在規(guī)定的范圍測試。用于定量測定的分析方法均需做準確度驗證。▉準確度（真實度）：準確度系指用該方法測941、準確度的考察方法中藥含量分析一般用已知純度的對照品做加樣回收測定（化學(xué)藥品作直接回收實驗），即于已知被測成分含量的供試品（化學(xué)藥品為空白樣品）中精密加入一定量的已知純度的被測成分對照品，依法測定。用實測值與供試品中含有量之差，除以加入對照品量計算回收率。1、準確度的考察方法95

在加樣回收實驗中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標準曲線線性范圍之內(nèi)；加入的對照品的量要適當，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實性差。加入對照品的操作過程必須有可操作性。在加樣回收實驗中須注意對照品的加入量與供試品96

式中A為供試品所含被測成分量（化學(xué)藥品A值為零）；

B為加入對照品量；

C為實測值。

回收率%=C-A×100%B式中A為供試品所含被測成分量（化學(xué)藥品A值為零）；972、數(shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用6個（原至少5個）測定結(jié)果進行評價；或設(shè)計3個不同濃度，每個濃度各分別制備3份（原兩份）供試品溶液進行測定，用9個測定結(jié)果進行評價，一般中間濃度加入量與所取供試品含量之比控制在1：1左右（化學(xué)藥品為100%濃度）。應(yīng)報告供試品取樣量、供試品中含有量（化學(xué)藥品無此項）、對照品加入量、測定結(jié)果和回收率（%）計算值，以及回收率（%）的相對標準偏差（RSD%）。2、數(shù)據(jù)要求98▉精密度：指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差表示。精密度包括：重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性。用于定量測定的分析方法均應(yīng)考察方法的精密度。▉精密度：指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻供試品991、重復(fù)性（間歇測量精密度）在相同的操作條件下，較短的時間間隔精密度。（1）用100%濃度水平至少測定6次（5次）進行評價，（2）在規(guī)定的范圍內(nèi)，設(shè)計3個不同濃度水平，每個濃度制備3份供試液，每份測定3次，共9個結(jié)果進行評價。

2、中間精密度為考察隨即變動因素對精密度的影響，應(yīng)進行中間精密度試驗。變動因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備等。

(ICH認為中間精密度沒有必要逐個考察每個因素，鼓勵使用較為簡化的矩陣試驗設(shè)計)1、重復(fù)性（間歇測量精密度）在相同的操作條件下，較1003、當分析方法將被法定標準采用時，應(yīng)進行重現(xiàn)性試驗。例如，建立藥典分析方法時通過不同實驗室的復(fù)核檢驗得出重現(xiàn)性結(jié)果。

4、數(shù)據(jù)要求重復(fù)性、中間精密度、重現(xiàn)性均應(yīng)報告標準偏差、相對標準偏差和可信限。目前，分析方法研究中一般只作了“重復(fù)性”，藥檢所的技術(shù)復(fù)核相當于是“重現(xiàn)性”考察，經(jīng)“重現(xiàn)性”驗證的分析方法，可不考察“中間精密度”。3、當分析方法將被法定標準采用時，應(yīng)進行重現(xiàn)性試驗。101▉專屬性：專屬性系指在其他成分可能存在下，采用的方法能正確測定出被測成分的特性。鑒別實驗、限量檢查、含量測定等方法均應(yīng)考察其專屬性。▉專屬性：專屬性系指在其他成分可能存在下，1021、鑒別實驗應(yīng)能與可能共存的物質(zhì)（如輔料）或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分。不含被測成分的供試品（空白樣品）以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，均不得干擾測定。顯微鑒別、色譜及光譜鑒別等應(yīng)附相應(yīng)的代表性圖象或圖譜。1、鑒別實驗1032、含量測定和限量檢查以不含被測成分的供試品（除去含待測成分藥材或不含待測成分的模擬處方）實驗說明方法的專屬性。色譜法、光譜法等應(yīng)附代表性圖譜，并標明相關(guān)成分在圖中的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求。必要時可采用二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進行峰純度檢查。2、含量測定和限量檢查104▉檢測限：指供試品中被測物能被檢出的最低量。該指標的意義在于考察方法是否具備靈敏的檢測能力，特別是微量有害雜質(zhì)的檢查應(yīng)證明其方法具有足夠低的檢測限，以保證檢出需控制的雜質(zhì)。如化學(xué)原料藥中的有機溶劑殘留量、中藥中馬兜鈴酸的檢查等，均應(yīng)對檢測限進行考察。確定檢測限有兩種方法：（1）、直觀法用一系列已知濃度的供試品進行分析，試驗出能被可靠檢出的最低濃度或量。儀器或非儀器方法均可使用。▉檢測限：指供試品中被測物能被檢出的最低量。105

（2）、信噪比法僅適用于能顯示基線噪音的分析方法，即把已知低濃度供試品測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比為3：1或2：1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。（3）、數(shù)據(jù)要求應(yīng)附測試圖譜，說明測試過程和檢測限結(jié)果。

（2）、信噪比法僅適用于能顯示基106▉定量限：定量限系指供試品中被測成分能被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應(yīng)具有一定準確度和精密度。用于限量檢查的定量測定的分析方法（如以5-羥甲基糠醛為對照品測定葡糖糖注射液中5-羥甲基糠醛的量、以馬兜鈴酸A為對照測定含量等）應(yīng)確定定量限。常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10：1時相應(yīng)濃度或注入儀器的量進行確定。▉定量限：定量限系指供試品中被測成分107▉線性：線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與供試品中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。▉線性：線性系指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試108

應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系。可用一儲備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列供試品的方法進行測定，至少制備5個濃度的供試品。以測得的響應(yīng)信號作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進行線性回歸。必要時，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進行線性回歸計算（如采用蒸發(fā)光散射檢測器需取響應(yīng)值的對數(shù)）。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎靡粌?09

數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。▉范圍：范圍系指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。

數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性110

范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準確度、精密度結(jié)果及要求確定。一般來說，線性范圍窄、精密度要求高，范圍就相應(yīng)較窄。對于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其范圍應(yīng)大于被限定含量的區(qū)間。溶出度或釋放度中的溶出量測定，范圍應(yīng)為限度的±20%。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準確111

范圍不是線性關(guān)系考察的濃度范圍，而是測定方法應(yīng)能達到的準確測定的范圍。范圍是規(guī)定值，對于化學(xué)藥品，是根據(jù)測定項目和精密度要求規(guī)定的，如制劑規(guī)定含量為標示量的90%~110%，即方法的范圍考察規(guī)定應(yīng)為80%~120%。對于中藥分析方法，范圍的確定較為困難，但可從以下幾方面考慮：范圍不是線性關(guān)系考察的濃度范圍，而是測定1121、含量限度有高、低限時，可參照化學(xué)藥品；

2、中藥往往只規(guī)定下限，限度值為1~10%時，考察范圍建議為低限-30%，高限50%；限度值小于1%時，考察范圍建議為低限-50%，高限在條件允許的情況下盡量做得更寬。1、含量限度有高、低限時，可參照化學(xué)藥品；113▉耐用性：耐用性系指在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為使方法用于常規(guī)檢驗提供依據(jù)。開始研究分析方法時，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測試條件要求苛刻，則應(yīng)在方法中寫明。▉耐用性：耐用性系指在測定條件有小的變114

典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)（中藥的提取次數(shù)考察不屬于耐用性）、時間等。液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成比例或pH值，不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫，流速及檢測波長等。氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相，不同類型的擔體，柱溫，進樣口和檢測器溫度等。薄層色譜的變動因素有：不同廠牌的薄層板，點樣方式及薄層展開時溫度及相對濕度的變化等。典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品115

經(jīng)實驗，應(yīng)說明小的變動能否通過設(shè)計的系統(tǒng)適用性實驗，以確保方法有效。▉穩(wěn)定性：為“中藥新藥質(zhì)量標準研究的技術(shù)要求”中對供試品溶液和對照品溶液的要求，可納入新版藥典分析方法驗證指導(dǎo)原則的“耐用性”中。經(jīng)實驗，應(yīng)說明小的變動能否通過設(shè)計的系統(tǒng)116

四、微生物限度或無菌檢查的方法驗證

背景：（1）今年7月1日正式執(zhí)行的中國藥典2005年版附錄規(guī)定：建立微生物限度或無菌檢查方法時必須進行方法驗證。（2）國藥典發(fā)（2005）98號文（10月11日）強調(diào)了驗證實驗的重要性和必要性，同時作出以下規(guī)定：進口檢驗—必須提供方法驗證資料或詳細的SOP資料，經(jīng)審核后在標準正文中要明確檢查方法的關(guān)鍵操作點注冊檢驗—必須提供方法驗證資料，并在標準正文中寫明檢查方法的關(guān)鍵操作點，否則，審核意見中要明確指出“方法學(xué)未經(jīng)驗證，無法檢驗”，并建議重新建立檢查方法。監(jiān)督檢驗—也應(yīng)請企業(yè)提供方法驗證資料，未經(jīng)驗證的品種，決不能給出“符合2005年版《中國藥典》的規(guī)定”的結(jié)論。

四、微生物限度或無菌檢查的方法驗證

背景：（1）今年7117

（3）2005年11月14日中國藥品生物制品檢定所對各省市藥檢所發(fā)出《關(guān)于征集2005年版中國藥典“微生物限度檢查法”和“無菌檢查法”方法驗證結(jié)果的通知，要求將完成驗證的品種及所收集的企業(yè)完成的驗證品種按要求于05年11月30日以前以電子文檔的形式寄予中檢所抗生素室，將在抗生素工作網(wǎng)站組建“藥品無菌檢查和微生物限度檢查方法驗證品種信息交流平臺”，目的為減少重復(fù)工作，實現(xiàn)資源共享，加快驗證實驗的進程。（3）2005年11月14日中國藥品生物制品檢定所118有以下建議供參考：

（1）中國藥典2005年版二部附錄通則項下未規(guī)定作微生物限度檢查的化學(xué)藥品的四種普通口服固體制劑即丸劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑不要求作微生物限度檢查，如果發(fā)現(xiàn)問題，可進行檢查，不符合規(guī)定發(fā)不合格報告。有以下建議供參考：（1）中國藥典2005年版二119

（2）除以上四種劑型以外的所有劑型，均應(yīng)要求進行微生物限度檢查，并要求通過方法驗證確立合適的微生物限度檢查法（應(yīng)將確定的方法在標準正文中寫明），若申報單位的申報資料中缺驗證資料，藥檢所按98號文的規(guī)定辦。

（2）除以上四種劑型以外的所有劑型，均應(yīng)要求進行微生120

（3）許多需進行微生物限度檢查和無菌檢查的上市老品種，企業(yè)應(yīng)持積極主動的態(tài)度，有計劃地分期分批完成驗證工作，若是多家生產(chǎn)的老品種企業(yè)可通過共同協(xié)商，合理分工，實行資源共享，在較短時間內(nèi)完成驗證工作。中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則nn課件121

（4）目前注冊檢驗申報資料中的驗證實驗有造假現(xiàn)象，申報單位應(yīng)認真對待，嚴格按藥典的要求進行驗證。造假在經(jīng)藥檢所復(fù)核檢驗，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，藥檢所會提出“方法驗證不符合要求”的意見。是否有抑菌作用，一可通過處方分析，二可通過檢驗結(jié)果判定。

中藥質(zhì)量標準分析方法驗證指導(dǎo)原則nn課件122

五、藥品質(zhì)量標準研究中的常見問題

近年來，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，高新分析技術(shù)的日益普及，年輕人才的飛速成長，我省新藥（含仿制藥）研究整體水平普遍提高，但由于未有效把握“科學(xué)、合理、規(guī)范”的標準研究的基本原則。出現(xiàn)一些問題值得我們思考并加以重視。針對一些在質(zhì)量標準中常見的共性問題進行以下探討。

五、藥品質(zhì)量標準研究中的常見問題

近年來，123（一）、中藥的常見問題1、質(zhì)量標準控制內(nèi)容不全或定性與定量目標成分重復(fù)控制，致使標準缺乏完整的可控性，非常典型的例子為金剛藤系列制劑，斷血流系列制劑等，標準中僅收載同時以菝葜皂苷元為對照品進行薄層鑒別和高效夜相色譜法測定含量，檢驗方法看似有專屬性，方法驗證也作得很完整，但標準內(nèi)容覆蓋不全，可控性較差，且還提供了絕好的造假機會。趕黃草等單味藥制劑均有類似情況。正確的設(shè)計應(yīng)怎樣做？（一）、中藥的常見問題1、質(zhì)量標準控制內(nèi)容1242、關(guān)注05版藥典將部分藥材按不同基源作了分別收載的情況，如五味子南五味子；粉萆薢、綿萆薢；寒水石、北寒水石；大青葉、蓼大青葉；黃柏、關(guān)黃柏；金銀花山銀花；葛根粉葛；土木香藏木香；山楂、南山楂；敗醬草、北敗醬草；劉寄奴、北劉寄奴；板藍根、南板藍根；牛膝、懷牛膝；金錢草、廣金錢草；山豆根、北豆根。

8號資料與申報標準有矛盾，如葛根。2、關(guān)注05版藥典將部分藥材按不同基源作1253、關(guān)注國家局有關(guān)牛黃與人工牛黃的替代、麝香與人工麝香的替代的有關(guān)規(guī)定，在處方中應(yīng)明確表示。

4、關(guān)注國家局關(guān)于含馬兜鈴酸藥材的有關(guān)規(guī)定，該替換的必須替換。

5、地方標準收載的藥材與國家標準同名必須使用國家標準，如黃芪、柴胡等。

3、關(guān)注國家局有關(guān)牛黃與人工牛黃的替代、麝香1266、改變劑型的新藥或仿制藥中的提取物不能等同于單一化學(xué)成分，如某中成藥用黃芩提取物（以黃芩苷計）投料，此處的“以黃芩苷計”在原標準中，用的是紫外-可見分光光度法測定黃芩苷的含量，而申報單位所附的標準為采用高效液相色譜法測定黃芩苷含量，這兩種方法提供的測定信息是有差異的。6、改變劑型的新藥或仿制藥中的提取物不能等同于1277、樣品的前處理設(shè)計不盡合理，特別復(fù)雜樣品的前處理申報單位往往設(shè)計不合理。操作也不具可操作性。一個科學(xué)合理的復(fù)雜樣品的前處理方法需設(shè)計者具有扎實的理論基礎(chǔ)知識和豐富的工作經(jīng)驗，應(yīng)在盡可能排除雜質(zhì)的干擾同時，確保待測成分在每一部操作環(huán)節(jié)中均不能丟失，而每一個操作細節(jié)均應(yīng)有可操作性，要注意整體的合理適用。7、樣品的前處理設(shè)計不盡合理，特別復(fù)雜樣1288、由于中藥的特殊情況，含量測定往往只規(guī)定下限，導(dǎo)致個別研究者錯誤地將中藥的含量測定看作是一種限度檢查，在實驗設(shè)計上缺乏“量”的意識，對照品的取用量小于10mg是其通病，所制定的操作步驟極為粗放，完全無微量分析的概念。8、由于中藥的特殊情況，含量測定往往只規(guī)定1299、含量測定選擇的對象應(yīng)首先為有效成分，且此成分應(yīng)具有專屬性，如山茱萸應(yīng)測定馬錢苷、丹參除測定丹參同酮ⅡA還應(yīng)測定丹參酚酸B、黃連或黃柏若選擇鹽酸小檗堿為測定對象，薄層色譜必須以對照藥材為對照，以使標準整體可控。

9、含量測定選擇的對象應(yīng)首先為有效成分，且13010、若中藥的有效成分不明，應(yīng)對所采用的指標成分作初步的論證，即選擇該成分的意義何在等等。

11、同一色譜條件下若能同時測定多個成分，應(yīng)盡可能多測，如大黃、人參等，若有干擾應(yīng)提供排除干擾但仍不成功的研究資料。

10、若中藥的有效成分不明，應(yīng)對所采用的指13112、關(guān)于大類化學(xué)成分（如總黃酮、總皂苷、總氨基酸等）的含量測定存在的有關(guān)問題

（1）一般來說，大類化學(xué)成分（如總黃酮、總皂苷等）的含量測定不具專屬性，但如果薄層鑒別使用的是對照藥材，所建立的定量方法經(jīng)過驗證，可以認為標準基本可控，無必要再采用高效液相色譜法對單一化學(xué)成分進行含量測定（同時采用“總”和“單”當然提倡，