微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)特點(diǎn)：小簡低微生物病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)物原核生物界原生生物界真菌界病毒界是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。1.分類一、微生物芽孢：細(xì)菌形成的橢圓形的休眠體芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌。放線菌⑴結(jié)構(gòu)：單細(xì)胞原核生物分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）（2）繁殖孢子絲

|孢子菌落單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。

細(xì)菌的菌落特征因種而異菌落菌落單個(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的

重要依據(jù)。C、H、O、N、P、S五大營養(yǎng)物質(zhì)碳源氮源生長因子水無機(jī)鹽微生物化學(xué)元素組成：2.營養(yǎng)及功能二、培培養(yǎng)基基培養(yǎng)基基（培培養(yǎng)液液）是是由人人工方方法配配制而而成的的，專專供微微生物物生長長繁殖殖使用用的混混合營營養(yǎng)基基質(zhì)。。（1））按物物理狀狀態(tài)分分：固體培培養(yǎng)基基和液液體培培養(yǎng)基基、半半固體體培養(yǎng)養(yǎng)基。（2））按功功能分分：選擇培培養(yǎng)基基和鑒鑒別培培養(yǎng)基基。（3））按成成分分分：天然培培養(yǎng)基基和合合成培培養(yǎng)基基。1.培培養(yǎng)基基的類類型固體培培養(yǎng)基基：菌菌落液體培培養(yǎng)基基：表面生生長均勻混混濁生生長沉淀生生長半固體體培養(yǎng)養(yǎng)基：：2.不不同的的微生生物往往往需需要采采用不不同的的培養(yǎng)養(yǎng)基配配方3.不不管哪哪種培培養(yǎng)基基，一一般都都含有有水、碳碳源、、氮源源、無無機(jī)機(jī)鹽等營養(yǎng)養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)，另另外還還需要要滿足足微生生物生生長對(duì)對(duì)pH、特殊殊營養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)以及氧氣氣的要求。1000mL牛肉膏膏蛋白胨培培養(yǎng)基的營營養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10g氮源和維生素NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容在1000mL氫元素、氧元素4.培養(yǎng)基基的用途液體培養(yǎng)基基：增菌、、工業(yè)生產(chǎn)產(chǎn)固體培養(yǎng)基基：純化（（分離），，鑒鑒定、活菌菌計(jì)數(shù)、保保藏藏菌種半固體培養(yǎng)養(yǎng)基：1.無菌技技術(shù)的概念念無菌操作泛泛指在培養(yǎng)養(yǎng)微生物的的操作中，，所有防止止雜菌污染染的方法。。成功地培養(yǎng)養(yǎng)微生物的的關(guān)鍵。三、無菌技技術(shù)（1）消毒毒定義：2.消毒與與滅菌的概概念及兩者者的區(qū)別（2）滅菌菌的定義：：3.常用的的消毒與滅滅菌的方法法1.灼燒滅滅菌滅菌的方法法：2.干熱熱滅菌：160-170℃℃下加熱1-2h。。3.高壓壓蒸氣滅菌菌100kPa、121℃下下維持15-30min.2.請(qǐng)你判判斷以下材材料或用具具是否需要要消毒或滅滅菌。如果果需要，請(qǐng)請(qǐng)選擇合適適的方法。。（1）培培養(yǎng)細(xì)菌用用的培養(yǎng)基基與培養(yǎng)皿皿（2）玻玻棒、試管管、燒瓶和和吸管（3）實(shí)實(shí)驗(yàn)操作者者的雙手2.請(qǐng)你判判斷以下材材料或用具具是否需要要消毒或滅滅菌。如果果需要，請(qǐng)請(qǐng)選擇合適適的方法。。（1）培培養(yǎng)細(xì)菌用用的培養(yǎng)基基與培養(yǎng)皿皿（2）玻玻棒、試管管、燒瓶和和吸管（3）實(shí)實(shí)驗(yàn)操作者者的雙手答：（1））、（2））需要滅菌菌；（3））需要消毒毒。微生物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室培養(yǎng)的的基本操作作程序1.器具具的滅菌2.培養(yǎng)養(yǎng)基的配制制3.培養(yǎng)養(yǎng)基的滅菌菌4.倒平平板5.微生生物接種6.恒溫溫箱中培養(yǎng)養(yǎng)7.菌種種的保存牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g將上述物質(zhì)溶解后，添加自來水，定容至1000mL四、實(shí)驗(yàn)操操作1．計(jì)算、稱量2．溶化3．調(diào)pH：pH7．64．過濾：：這一步可可以省去。。5．分裝：：分裝過程程中注意不不要使培養(yǎng)養(yǎng)基沾在管管口或瓶口口上，以免免沾污棉塞塞而引起污污染。分裝裝三角燒瓶瓶的量以不不超過三角角燒瓶容積積的一半為為宜。6．加塞7．包扎操作步驟8．滅菌:將50ml培養(yǎng)基用用玻棒轉(zhuǎn)移移至三角錐錐瓶中，塞塞上棉花塞塞，包上牛牛皮紙，再再放入高壓壓蒸氣滅菌菌鍋，在壓壓力為100kPa、溫度為為121℃℃，滅菌15～30min。。將培養(yǎng)基基用舊報(bào)紙紙包裹，放放入干熱滅滅菌箱內(nèi)，，在160～170℃下滅滅菌2h。。9．倒平板板:待培養(yǎng)基冷冷卻到50℃左右右時(shí)，在酒酒精燈附近近倒平板。。（倒平板板操作見課課本）2d后觀察平平板，無雜雜菌污染才才可用來接接種。倒平板技術(shù)術(shù)①將滅過菌的的培養(yǎng)皿放放在火焰旁旁的桌面上上，右手拿拿裝有培養(yǎng)養(yǎng)基的錐形形瓶，左手手撥出棉塞塞。1234倒平板技術(shù)術(shù)②右手拿錐形形瓶，使瓶瓶口迅速通通過火焰。。1234倒平板技術(shù)術(shù)1234③用左手拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10~20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。倒平板技術(shù)術(shù)1234④等待平板冷冷卻凝固，，大約需5~10min。然然后，將平平板倒過來來放置，使使皿蓋在下下，皿底在在上。9．倒平板板:待培養(yǎng)基冷冷卻到50℃左右右時(shí)，在酒酒精燈附近近倒平板。。（倒平板板操作見課課本）2d后觀察平平板，無雜雜菌污染才才可用來接接種。10．無菌菌檢查：將滅菌的培培養(yǎng)基放入入37℃的的溫室中培培養(yǎng)24——48小時(shí)時(shí)，以檢查查滅菌是否否徹底。（二）純化化大腸桿菌菌接種方法有有：平板劃線法法和稀釋涂涂布平板法法微生物的接接種技術(shù)：：平板劃線的的操作方法法一旦劃破，，會(huì)造成劃劃線不均勻勻，難以達(dá)達(dá)到分離單單菌落的目目的；二是存留在在劃破處的的單個(gè)細(xì)胞胞無法形成成規(guī)矩的菌菌落，菌落落會(huì)沿著劃劃破處生長長，會(huì)形成成一個(gè)條狀狀的菌落。。一旦劃破，，會(huì)造成劃劃線不均勻勻，難以達(dá)達(dá)到分離單單菌落的目目的；二是存留在在劃破處的的單個(gè)細(xì)胞胞無法形成成規(guī)矩的菌菌落，菌落落會(huì)沿著劃劃破處生長長，會(huì)形成成一個(gè)條狀狀的菌落。。稀釋涂布平平板法1.將分別別盛有9mL水的6支試管滅滅菌，并按按101~106的順序編號(hào)號(hào)。2.用移液液管吸取1mL培養(yǎng)養(yǎng)的菌液，，注入第二二支試管中中。用手指指輕壓移液液管上的橡橡皮頭，吹吹吸三次，，使菌液與與水充分混混勻。3.從101倍稀釋的試試管中吸取取1mL稀稀釋液，注注入102倍稀釋的試試管中，重重復(fù)第2步步的操作。。依次類推推，直到完完成最后一一支試管的的稀釋。注意：移液管需要要經(jīng)過滅菌菌。操作時(shí)時(shí)，試管口口和移液管管離火焰1~2cm處.涂布平板的的所有操作作都應(yīng)在火火焰附近進(jìn)進(jìn)行。結(jié)合合平板劃線線與系列稀稀釋的無菌菌操作要求求，想一想想，第2步步應(yīng)如何進(jìn)進(jìn)行無菌操操作？問題討論涂布平板的所所有操作都應(yīng)應(yīng)在火焰附近近進(jìn)行。結(jié)合合平板劃線與與系列稀釋的的無菌操作要要求，想一想想，第2步應(yīng)應(yīng)如何進(jìn)行無無菌操作？應(yīng)從操作的各各個(gè)細(xì)節(jié)保證證“無菌”。。例如，酒精精燈與培養(yǎng)皿皿的距離要合合適、吸管頭頭不要接觸任任何其他物體體、吸管要在在酒精燈火焰焰周圍等等。。問題討論微生物的恒溫溫培養(yǎng)微生物的恒溫溫培養(yǎng)微生物的恒溫溫培養(yǎng)菌種的保存1.臨時(shí)保藏：接種到固體斜斜面培養(yǎng)基，，菌落長成后后置于4℃冰冰箱保存。2.長期保存：甘油冷凍管藏藏法四、課題成果果評(píng)價(jià)（一）培養(yǎng)基基的制作是否否合格如果未接種的的培養(yǎng)基在恒恒溫箱中保溫溫1～2d后無菌落生生長，說明培培養(yǎng)基的制備備是成功的，，否則需要重重新制備。（二）接種操操作是否符合合無菌要求如果培養(yǎng)基上上生長的菌落落的顏色、形形狀、大小基基本一致，并并符合大腸桿桿菌菌落的特特點(diǎn)，則說明明接種操作是是符合要求的的；如果培養(yǎng)養(yǎng)基上出現(xiàn)了了其他菌落，，則說明接種種過程中，無無菌操作還未未達(dá)到要求，，需要分析原原因，再次練練習(xí)。（三）是否進(jìn)進(jìn)行了及時(shí)細(xì)細(xì)致的觀察與與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿桿菌菌落的大大小會(huì)有明顯顯不同，及時(shí)時(shí)觀察記錄的的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)這一點(diǎn)，并并能觀察到其其他一些細(xì)微微的變化。這這一步的要求求主要是培養(yǎng)養(yǎng)學(xué)生良好的的科學(xué)態(tài)度與與習(xí)慣。從細(xì)胞的化學(xué)學(xué)元素組成來來看，培養(yǎng)基基中為什么都都含有這些營營養(yǎng)成分？C、H、O、、N、P、S五大營養(yǎng)物質(zhì)質(zhì)碳源氮源生長因子水無機(jī)鹽微生物化學(xué)元元素組成：思考1無菌技術(shù)除了了用來防止實(shí)實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)養(yǎng)物被其他外外來微生物污污染外，還有有什么目的？？答：無菌技術(shù)術(shù)還能有效避避免操作者自自身被微生物物感染。思考21.培養(yǎng)基滅滅菌后，需要要冷卻到50℃左右時(shí)時(shí)，才能用來來倒平板。你你用什么辦法法來估計(jì)培養(yǎng)養(yǎng)基的溫度？？答：可以用手手觸摸盛有培培養(yǎng)基的錐形形瓶，感覺錐錐形瓶的溫度度下降到剛剛剛不燙手時(shí)，，就可以進(jìn)行行倒平板了。。問題討論需要使錐形瓶瓶的瓶口通過過火焰的目的的是什么？思考3答：通過灼燒燒滅菌，防止止瓶口的微生生物污染培養(yǎng)養(yǎng)基。平板冷凝后，，為什么要將將平板倒置？？答：平板冷凝凝后，皿蓋上上會(huì)凝結(jié)水珠珠，凝固后的的培養(yǎng)基表面面的濕度也比比較高，將平平板倒置，既既可以使培養(yǎng)養(yǎng)基表面的水水分更好地?fù)]揮發(fā)，又可以以防止皿蓋上上的水珠落入入培養(yǎng)基，造造成污染。思考4在倒平板的過過程中，如果果不小心將培培養(yǎng)基濺在皿皿蓋與皿底之之間的部位，，這個(gè)平板還還能用來培養(yǎng)養(yǎng)微生物嗎？？為什么？思考5答：空氣中的的微生物可能能在皿蓋與皿皿底之間的培培養(yǎng)基上滋生生，因此最好好不要用這個(gè)個(gè)平板培養(yǎng)微微生物。1.為什么在在操作的第一一步以及每次次劃線之前都都要灼燒接種種環(huán)？在劃線線操作結(jié)束時(shí)時(shí),仍然需要要灼燒接種環(huán)環(huán)嗎？為什么么？思考6答：第一步灼灼燒是為了避避免接種環(huán)上上可能存在的的微生物污染染培養(yǎng)物；每每次劃線前灼灼燒是為了殺殺死上次劃線線結(jié)束后，接接種環(huán)上殘留留的菌種，使使下一次劃線線時(shí)，接種環(huán)環(huán)上的菌種直直接來源上次次劃線的末端端，從而通過過劃線次數(shù)的的增加，使每每次劃線時(shí)菌菌種的數(shù)目逐逐漸減少，以以便得到菌落落。劃線結(jié)束束后灼燒，能能及時(shí)殺死接接種環(huán)上殘留留的菌種，避避免細(xì)菌污染染環(huán)境和感染染操作者。2.在灼燒接接種環(huán)之后，，為什么要等等其冷卻后再再進(jìn)行劃線？？答：以免接種種環(huán)溫度太高高，殺死菌種種。思考7答：劃線后，，線條末端細(xì)細(xì)菌的數(shù)目比比線條起始處處要少，每次次從上一次劃劃線的末端開開始，能使細(xì)細(xì)菌的數(shù)目隨隨著劃線次數(shù)數(shù)的增加而逐逐步減少，最最終能得到由由單個(gè)細(xì)菌繁繁殖而來的菌菌落。在作第二次以以及其后的劃劃線操作時(shí)，，為什么總是是從上一次劃劃線的末端開開始劃線？思考8配制斜面培養(yǎng)養(yǎng)基的作用是是什么？試管管為什么要加加棉塞？思考9增大接種面積積。棉塞保持通氣氣并防止雜菌菌感染等例1.有關(guān)關(guān)微生物營養(yǎng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述述中，正確確的()A.是碳源的的物質(zhì)不可能能同時(shí)是氮源源B.凡碳源都都提供能量C.除水以外外的無機(jī)物只只提供無機(jī)鹽鹽D.無機(jī)氮源源也能提供能能量典例解析例1.有關(guān)關(guān)微生物營養(yǎng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述述中，正確確的()A.是碳源的的物質(zhì)不可能能同時(shí)是氮源源B.凡碳源都都提供能量C.除水以外外的無機(jī)物只只提供無機(jī)鹽鹽D.無機(jī)氮源源也能提供能能量典例解析D例2.下面面對(duì)滅菌的理理解不正確的的是()A.防止雜雜菌污染B.消滅雜雜菌C.培養(yǎng)基