α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性檢測試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4223

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁α-半乳糖苷酶（α-GAL）活性檢測試劑盒說明書微量法UPLC-MS-4223100T/48S試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體100mL×1瓶2-8℃保存試劑一粉劑×2支-20℃保存試劑二液體4mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體15mL×1瓶2-8℃保存標準品液體1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：111.25mL-20℃41001；2、標準品：5μmol/mL的對硝基苯酚溶液。α-GAL(EC2)α-α-GALD-α-GAL分解對-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成對-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算α-GAL活性。p-Nitrophenylα-D-Galactopyranoside

α-GAL

p-Nitrophenol(400nm)注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。//96一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）15001mL（003100次，500g，20n20.1g1mL二、測定步驟1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。2、標準液的稀釋：將標準液用蒸餾水稀釋至200、100、50、25、12.5、6.25、0nmol/mL標準溶液待測。3、標準液稀釋可參考下表：序號（nmol/mL）標準液體積（μL）蒸餾水體積（μL）（nmol/mL）150008019202002200100010001003100100010005045010001000255251000100012.5612.5100010006.2576.25010000（空白管）備注：實驗中每個標準管需70μL標準溶液。4、樣本測定（在EP管或96孔板中依次加入下列試劑）：試劑名稱（μL）測定管對照管標準管試劑一25蒸餾水25試劑二3535樣本1010迅速混勻，放入37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準確反應30min標準品70試劑三130130130充分混勻，室溫靜置2min后，于400nm處測定吸光值A(chǔ)，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、AΔA=A-A=A標準管1-2三、α-GAL活性計算1、標準曲線的建立：根據(jù)標準管的吸光度（y，ΔA標準）和濃度（x，nmol/mL）建立標準曲線，將ΔA（y，ΔA測定）帶入標準曲線中，計算樣本生成的產(chǎn)物量x（nmol/mL）。2、α-GAL活性計算單位的定義：每mg組織蛋白每小時產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。α-GAL活力(U/mgprot)=(x×V反總)÷(V樣×Cpr)÷T=14x÷Cpr單位的定義：每g組織每小時產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。α-GAL活力(U/g質(zhì)量)=(x×V反總)÷(W×V樣÷V樣總)÷T=14x÷W單位的定義：每1萬個細菌或細胞每小時產(chǎn)生1nmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。α-GAL活力(U/104cell)=(x×V反總)÷(500×V樣÷V