病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件

第一節(jié)病毒感染的檢查方法第一節(jié)病毒感染的檢查方法1病毒感染的檢查

一般原則：特異、敏感、快速、簡便方法1．根據(jù)流行病學和臨床特點初步判定可能感染的病毒。2．根據(jù)可疑病毒的生物學性狀，機體免疫應答和臨床過程以及病人當前所處的時機，確定實驗診斷方法。

病毒感染的檢查一般原則：特異、敏感、快速、簡便2病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng)病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒電鏡3一、標本的采集與送檢原則基本與細菌相似，但應注意：

1.標本用“雙抗”或兩性霉素B處理

2.低溫保存，盡快送檢

3.血清學診斷采雙份血清一、標本的采集與送檢原則基本與細菌相似，但應注意：4二、病毒的分離與鑒定一般程序：標本無菌處理動物接種雞胚培養(yǎng)細胞培養(yǎng)指標陽性指標陰性

病毒鑒定

盲傳2～3代指標陰性病毒陰性二、病毒的分離與鑒定一般程序：標本無菌處理動物接種指標陽性5（一）病毒的分離培養(yǎng)

1.細胞培養(yǎng)

單層細胞培養(yǎng)

分類懸浮細胞培養(yǎng)原代細胞細胞種類二倍體細胞傳代細胞系（一）病毒的分離培養(yǎng)6病毒的細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)瓶單層細胞病毒的細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)瓶單層細胞7微生物及其代謝產(chǎn)物抗原變異病毒基因的鑒定微生物及其代謝產(chǎn)物干擾素和干擾素誘生劑動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等（三）病毒感染的血清學診斷核酸雜交技術(shù)血清丙種球蛋白基因產(chǎn)物（如乙肝疫苗）免疫細胞羊膜腔（amnioticcavity）可激發(fā)HI，安全、方便；(1)細胞病變效應（cytopathiceffect,CPE）第三節(jié)病毒感染的治療除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。(3)凝膠免疫擴散試驗細胞種類二倍體細胞優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）微生物及其代謝產(chǎn)物8病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件9對一般病毒檢測意義不大病毒性感染的快速診斷方法有哪些？二、人工被動免疫常用生物制品③為證實所分離的病毒的臨床意義治療性疫苗動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等④進行血清流行病學調(diào)查等IFN-α、β、γEBV早期抗原抗體②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。1．根據(jù)流行病學和臨床特點初步判定可能感染的病毒。卵黃囊（yolksac）病毒＋中和抗體病毒失去感染性EBV早期抗原抗體接種部位流感病毒、腮腺炎病毒微生物及其代謝產(chǎn)物2.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒

對一般病毒檢測意義不大2.雞胚培養(yǎng)10病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件112、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復雜2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低12病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件133.動物接種

應用：尚無敏感細胞的病毒培養(yǎng)

動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物體內(nèi)常帶有潛伏病毒3.動物接種141．病毒增殖鑒定

(1)細胞病變效應（cytopathiceffect,

CPE）

①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；

②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

1．病毒增殖鑒定（二）病毒的鑒定15病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件162.病毒形態(tài)學鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復雜，應用受限光學顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對一般病毒檢測意義不大2.病毒形態(tài)學鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復雜，應用受限173.病毒血清學鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細胞＝不凝集

（血凝抑制試驗）

3.病毒血清學鑒定鑒定病毒種、型、亞型18(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴散試驗

——多種病毒鑒定(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA）194.病毒分子生物學鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴增核酸雜交基因芯片基因測序4.病毒分子生物學鑒定抗原變異病毒基因的鑒定20（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗

3.50％組織細胞感染量

感染性病毒量（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死21卵黃囊（yolksac）(3)凝膠免疫擴散試驗如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。接種部位流感病毒、腮腺炎病毒生物制品動物免疫血清可診斷急性感染如食用西紅柿，獲得乙肝疫苗的接種。嗜神經(jīng)病毒痘苗病毒、人類皰疹病毒可診斷急性感染將編碼某一病原體保護性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達，人們食用植物時，就完成了預防接種。四、病毒感染的快速診斷缺點是免疫原性弱、只激發(fā)B細胞引起HI，因為抗病毒依賴CMI）。采用孵化9～14天的雞胚除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。羊膜腔（amnioticcavity）優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低采用孵化9～14天的雞胚③在培養(yǎng)細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定理化性狀的檢測形態(tài)學鑒定血清學鑒定基因測序和生物對比卵黃囊（yolksac）(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定22四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果23（一）形態(tài)學檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學顯微鏡檢查

包涵體（一）形態(tài)學檢查電鏡和免疫電鏡檢查24（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測免疫標記技術(shù)2.病毒核酸檢測核酸擴增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)

基因測序（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測25（三）病毒感染的血清學診斷應用：①采取標本分離病毒為時已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實所分離的病毒的臨床意義④進行血清流行病學調(diào)查等（三）病毒感染的血清學診斷應用：261.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和抗體

病毒失去感染性

特點：特異性高，抗體維持時間長應用：人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用1.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和272.補體結(jié)合試驗

用已知病毒可溶性補體抗原檢測病人血清中相應的補體抗體

特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快

應用：近期感染指標。3.血凝抑制試驗

流感疫苗接種后效果觀察及流感流行病學調(diào)查2.補體結(jié)合試驗用已知病毒可溶性補體抗原檢測病人28早期抗體檢測（IgM）特點：特異性高，抗體維持時間長可激發(fā)HI，安全、方便；二、人工被動免疫常用生物制品對一般病毒檢測意義不大可激發(fā)HI，安全、方便；①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；分離培養(yǎng)病毒的方法有那些?除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；基因芯片技術(shù)二、人工被動免疫常用生物制品基因整合基因產(chǎn)物疫苗中草藥血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）四、病毒感染的快速診斷病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）嗜神經(jīng)病毒4、早期抗體檢測可診斷急性感染

特異性IgM抗體：孕婦感染風疹病毒

EBV早期抗原抗體

EAV核心抗原抗體

早期抗原的抗體

EAV衣殼抗原抗體早期抗體檢測（IgM）4、早期抗體檢測可診斷急29(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA）細胞因子IL-2、IL-6、IL-12葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。臨床診斷少用尿囊腔（allantoiccavity）流感病毒的初次分離①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快基因產(chǎn)物（如乙肝疫苗）除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。多由減毒病原菌制成；基因芯片技術(shù)如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。偶可發(fā)生回復突變，毒力回升，接種后發(fā)病。二、人工被動免疫常用生物制品蛋白質(zhì)抗原基因減毒的病毒或細菌第一節(jié)病毒感染的檢查方法懸浮細胞培養(yǎng)1．根據(jù)流行病學和臨床特點初步判定可能感染的病毒。②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒第二節(jié)病毒感染的特異性預防微生物及其代謝產(chǎn)物生物制品動物免疫血清

免疫細胞細胞因子

防治和診斷感染性疾病(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA）第二節(jié)病毒感染的30疫苗:死疫苗(killedvaccine)如白百破、傷寒、流腦、乙腦、流感、鉤端螺旋體等?？杉ぐl(fā)HI，安全、方便；但抗原性改變，效果差，需多次注射；反應重）。

活疫苗（livingvaccine）如BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰質(zhì)炎和麻疹疫苗等。可激發(fā)HI、CMI；多由減毒病原菌制成；偶可發(fā)生回復突變，毒力回升，接種后發(fā)病。聯(lián)合疫苗在試用中。

基因工程疫苗：目的基因原核或真核細胞

基因產(chǎn)物（如乙肝疫苗）

導入

人工培養(yǎng)一、人工主動免疫常用生物制品疫苗:死疫苗(killedvaccine)如白百破31重組載體疫苗：蛋白質(zhì)抗原基因減毒的病毒或細菌基因整合基因產(chǎn)物疫苗合成疫苗：

根據(jù)病原體抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作為疫苗。如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。

缺點是免疫原性弱、只激發(fā)B細胞引起HI，因為抗病毒依賴CMI）。轉(zhuǎn)入

培養(yǎng)

表達重組載體疫苗：轉(zhuǎn)入培養(yǎng)表達32亞單位疫苗：

除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。如腦膜炎球菌和流感桿菌表面的特異性多糖+吸附劑制成疫苗（不含類脂、無毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，這種疫苗防止減毒活疫苗回復突變和腫瘤病毒潛在的致癌作用。DNA疫苗：

即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），這種核酸既是載體又能在真核細胞中表達抗原，誘導產(chǎn)生細胞毒殺傷功能的T細胞，有效預防病毒、胞內(nèi)寄生菌及寄生蟲引起的傳染。亞單位疫苗：33轉(zhuǎn)基因植物疫苗：

將編碼某一病原體保護性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達，人們食用植物時，就完成了預防接種。如食用西紅柿，獲得乙肝疫苗的接種。治療疫苗：

葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。可能的機制是前者是脫敏作用，后者是打破免疫耐受。

類毒素：

細菌外毒素+0.3%~0.4%甲醛類毒素(毒性消失,保留抗原性).如白百破疫苗.轉(zhuǎn)基因植物疫苗：34絨毛尿囊膜（allantocherion）病毒＋特異性抗體＋雞紅細胞＝不凝集如腦膜炎球菌和流感桿菌表面的特異性多糖+吸附劑制成疫苗（不含類脂、無毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，這種疫苗防止減毒活疫苗回復突變和腫瘤病毒潛在的致癌作用。核酶（ribozyme）對一般病毒檢測意義不大①采取標本分離病毒為時已晚絨毛尿囊膜（allantocherion）EAV核心抗原抗體(1)血凝抑制試驗—正粘病毒型與亞型鑒定多由減毒病原菌制成；絨毛尿囊膜（allantocherion）臨床診斷少用嗜神經(jīng)病毒卵黃囊（yolksac）②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型痘苗病毒、人類皰疹病毒接種部位流感病毒、腮腺炎病毒②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒二、人工被動免疫常用生物制品

免疫球蛋白血清丙種球蛋白

細胞免疫制劑

IFN-α、β、γ細胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的殺傷細胞

——LAK細胞

絨毛尿囊膜（allantocherion）二、人工被動免疫常35第三節(jié)病毒感染的治療

核苷類藥物

非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物

干擾素和干擾素誘生劑

中草藥

基因治療劑

治療性疫苗

抗病化學制劑反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）

第三節(jié)病毒感染的治療36思考題1.分離培養(yǎng)病毒的方法有那些?2.病毒性感染的快速診斷方法有哪些？3.預防病毒性感染有哪些人工自動免疫制劑？4.診斷病毒的核酸技術(shù)有哪些？思考題1.分離培養(yǎng)病毒的方法有那些?37Bye~Bye~382.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒

2.雞胚培養(yǎng)392、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復雜2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低401．病毒增殖鑒定

(1)細胞病變效應（cytopathiceffect,

CPE）

①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；

②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

1．病毒增殖鑒定（二）病毒的鑒定413.病毒血清學鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細胞＝不凝集

（血凝抑制試驗）

3.病毒血清學鑒定鑒定病毒種、型、亞型42（三）病毒感染的血清學診斷應用：①采取標本分離病毒為時已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實所分離的病毒的臨床意義④進行血清流行病學調(diào)查等（三）病毒感染的血清學診斷應用：43缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物接種部位流感病毒、腮腺炎病毒早期抗體檢測（IgM）四、病毒感染的快速診斷(1)血凝抑制試驗—正粘病毒型與亞型鑒定除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。第一節(jié)病毒感染的檢查方法懸浮細胞培養(yǎng)除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。細胞因子IL-2、IL-6、IL-12EAV衣殼抗原抗體(1)血凝抑制試驗—正粘病毒型與亞型鑒定二、人工被動免疫常用生物制品（三）病毒數(shù)量與感染性測定絨毛尿囊膜（allantocherion）一般原則：特異、敏感、快速、簡便(1)細胞病變效應（cytopathiceffect,CPE）③為證實所分離的病毒的臨床意義應用：近期感染指標。絨毛尿囊膜（allantocherion）優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型1．根據(jù)流行病學和臨床特點初步判定可能感染的病毒。鑒定病毒種、型、亞型(1)血凝抑制試驗—正粘病毒型與亞型鑒定卵黃囊（yolksac）第一節(jié)病毒感染的檢查方法①采取標本分離病毒為時已晚將編碼某一病原體保護性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達，人們食用植物時，就完成了預防接種。第一節(jié)病毒感染的檢查方法痘苗病毒、人類皰疹病毒病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物細胞因子IL-2、IL-6、IL-12采用孵化9～14天的雞胚EBV早期抗原抗體微生物及其代謝產(chǎn)物（三）病毒數(shù)量與感染性測定優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型應用：近期感染指標?？杉ぐl(fā)HI，安全、方便；EAV衣殼抗原抗體葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。卵黃囊（yolksac）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）第一節(jié)病毒感染的檢查方法可診斷急性感染動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。懸浮細胞培養(yǎng)EAV核心抗原抗體細胞種類二倍體細胞動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等干擾素和干擾素誘生劑尿囊腔（allantoiccavity）根據(jù)病原體抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作為疫苗。①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；亞單位疫苗：

除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。如腦膜炎球菌和流感桿菌表面的特異性多糖+吸附劑制成疫苗（不含類脂、無毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，這種疫苗防止減毒活疫苗回復突變和腫瘤病毒潛在的致癌作用。DNA疫苗：

即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），這種核酸既是載體又能在真核細胞中表達抗原，誘導產(chǎn)生細胞毒殺傷功能的T細胞，有效預防病毒、胞內(nèi)寄生菌及寄生蟲引起的傳染。缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物應用：近期感染指標。應用：44第一節(jié)病毒感染的檢查方法第一節(jié)病毒感染的檢查方法45病毒感染的檢查

一般原則：特異、敏感、快速、簡便方法1．根據(jù)流行病學和臨床特點初步判定可能感染的病毒。2．根據(jù)可疑病毒的生物學性狀，機體免疫應答和臨床過程以及病人當前所處的時機，確定實驗診斷方法。

病毒感染的檢查一般原則：特異、敏感、快速、簡便46病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng)病毒感染的檢查檢測內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒電鏡47一、標本的采集與送檢原則基本與細菌相似，但應注意：

1.標本用“雙抗”或兩性霉素B處理

2.低溫保存，盡快送檢

3.血清學診斷采雙份血清一、標本的采集與送檢原則基本與細菌相似，但應注意：48二、病毒的分離與鑒定一般程序：標本無菌處理動物接種雞胚培養(yǎng)細胞培養(yǎng)指標陽性指標陰性

病毒鑒定

盲傳2～3代指標陰性病毒陰性二、病毒的分離與鑒定一般程序：標本無菌處理動物接種指標陽性49（一）病毒的分離培養(yǎng)

1.細胞培養(yǎng)

單層細胞培養(yǎng)

分類懸浮細胞培養(yǎng)原代細胞細胞種類二倍體細胞傳代細胞系（一）病毒的分離培養(yǎng)50病毒的細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)瓶單層細胞病毒的細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)瓶單層細胞51微生物及其代謝產(chǎn)物抗原變異病毒基因的鑒定微生物及其代謝產(chǎn)物干擾素和干擾素誘生劑動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等（三）病毒感染的血清學診斷核酸雜交技術(shù)血清丙種球蛋白基因產(chǎn)物（如乙肝疫苗）免疫細胞羊膜腔（amnioticcavity）可激發(fā)HI，安全、方便；(1)細胞病變效應（cytopathiceffect,CPE）第三節(jié)病毒感染的治療除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。(3)凝膠免疫擴散試驗細胞種類二倍體細胞優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）微生物及其代謝產(chǎn)物52病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件53對一般病毒檢測意義不大病毒性感染的快速診斷方法有哪些？二、人工被動免疫常用生物制品③為證實所分離的病毒的臨床意義治療性疫苗動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等④進行血清流行病學調(diào)查等IFN-α、β、γEBV早期抗原抗體②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。1．根據(jù)流行病學和臨床特點初步判定可能感染的病毒。卵黃囊（yolksac）病毒＋中和抗體病毒失去感染性EBV早期抗原抗體接種部位流感病毒、腮腺炎病毒微生物及其代謝產(chǎn)物2.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒

對一般病毒檢測意義不大2.雞胚培養(yǎng)54病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件552、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低缺點：操作程序復雜2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低56病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件573.動物接種

應用：尚無敏感細胞的病毒培養(yǎng)

動物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養(yǎng)條件要求，費用高，動物體內(nèi)常帶有潛伏病毒3.動物接種581．病毒增殖鑒定

(1)細胞病變效應（cytopathiceffect,

CPE）

①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；

②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

1．病毒增殖鑒定（二）病毒的鑒定59病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件602.病毒形態(tài)學鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復雜，應用受限光學顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對一般病毒檢測意義不大2.病毒形態(tài)學鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復雜，應用受限613.病毒血清學鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細胞＝不凝集

（血凝抑制試驗）

3.病毒血清學鑒定鑒定病毒種、型、亞型62(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴散試驗

——多種病毒鑒定(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA）634.病毒分子生物學鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴增核酸雜交基因芯片基因測序4.病毒分子生物學鑒定抗原變異病毒基因的鑒定64（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗

3.50％組織細胞感染量

感染性病毒量（三）病毒數(shù)量與感染性測定1.血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死65卵黃囊（yolksac）(3)凝膠免疫擴散試驗如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。接種部位流感病毒、腮腺炎病毒生物制品動物免疫血清可診斷急性感染如食用西紅柿，獲得乙肝疫苗的接種。嗜神經(jīng)病毒痘苗病毒、人類皰疹病毒可診斷急性感染將編碼某一病原體保護性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達，人們食用植物時，就完成了預防接種。四、病毒感染的快速診斷缺點是免疫原性弱、只激發(fā)B細胞引起HI，因為抗病毒依賴CMI）。采用孵化9～14天的雞胚除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。羊膜腔（amnioticcavity）優(yōu)點：易管理，不帶微生物，成本較低采用孵化9～14天的雞胚③在培養(yǎng)細胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定理化性狀的檢測形態(tài)學鑒定血清學鑒定基因測序和生物對比卵黃囊（yolksac）(四)新病毒的鑒定核酸類型的測定66四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測（IgM）四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果67（一）形態(tài)學檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學顯微鏡檢查

包涵體（一）形態(tài)學檢查電鏡和免疫電鏡檢查68（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測免疫標記技術(shù)2.病毒核酸檢測核酸擴增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)

基因測序（二）病毒成分檢測1.病毒蛋白抗原檢測69（三）病毒感染的血清學診斷應用：①采取標本分離病毒為時已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實所分離的病毒的臨床意義④進行血清流行病學調(diào)查等（三）病毒感染的血清學診斷應用：701.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和抗體

病毒失去感染性

特點：特異性高，抗體維持時間長應用：人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用1.中和試驗（neutralizingtest）病毒＋中和712.補體結(jié)合試驗

用已知病毒可溶性補體抗原檢測病人血清中相應的補體抗體

特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快

應用：近期感染指標。3.血凝抑制試驗

流感疫苗接種后效果觀察及流感流行病學調(diào)查2.補體結(jié)合試驗用已知病毒可溶性補體抗原檢測病人72早期抗體檢測（IgM）特點：特異性高，抗體維持時間長可激發(fā)HI，安全、方便；二、人工被動免疫常用生物制品對一般病毒檢測意義不大可激發(fā)HI，安全、方便；①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；分離培養(yǎng)病毒的方法有那些?除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；基因芯片技術(shù)二、人工被動免疫常用生物制品基因整合基因產(chǎn)物疫苗中草藥血凝試驗：病毒總量（活病毒＋死病毒）四、病毒感染的快速診斷病毒＋雞紅細胞＝凝集（血凝試驗）嗜神經(jīng)病毒4、早期抗體檢測可診斷急性感染

特異性IgM抗體：孕婦感染風疹病毒

EBV早期抗原抗體

EAV核心抗原抗體

早期抗原的抗體

EAV衣殼抗原抗體早期抗體檢測（IgM）4、早期抗體檢測可診斷急73(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA）細胞因子IL-2、IL-6、IL-12葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。臨床診斷少用尿囊腔（allantoiccavity）流感病毒的初次分離①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；特點：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快基因產(chǎn)物（如乙肝疫苗）除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。多由減毒病原菌制成；基因芯片技術(shù)如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。偶可發(fā)生回復突變，毒力回升，接種后發(fā)病。二、人工被動免疫常用生物制品蛋白質(zhì)抗原基因減毒的病毒或細菌第一節(jié)病毒感染的檢查方法懸浮細胞培養(yǎng)1．根據(jù)流行病學和臨床特點初步判定可能感染的病毒。②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒第二節(jié)病毒感染的特異性預防微生物及其代謝產(chǎn)物生物制品動物免疫血清

免疫細胞細胞因子

防治和診斷感染性疾病(2)免疫標記法（FIA、EIA、RIA）第二節(jié)病毒感染的74疫苗:死疫苗(killedvaccine)如白百破、傷寒、流腦、乙腦、流感、鉤端螺旋體等?？杉ぐl(fā)HI，安全、方便；但抗原性改變，效果差，需多次注射；反應重）。

活疫苗（livingvaccine）如BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰質(zhì)炎和麻疹疫苗等?？杉ぐl(fā)HI、CMI；多由減毒病原菌制成；偶可發(fā)生回復突變，毒力回升，接種后發(fā)病。聯(lián)合疫苗在試用中。

基因工程疫苗：目的基因原核或真核細胞

基因產(chǎn)物（如乙肝疫苗）

導入

人工培養(yǎng)一、人工主動免疫常用生物制品疫苗:死疫苗(killedvaccine)如白百破75重組載體疫苗：蛋白質(zhì)抗原基因減毒的病毒或細菌基因整合基因產(chǎn)物疫苗合成疫苗：

根據(jù)病原體抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作為疫苗。如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。

缺點是免疫原性弱、只激發(fā)B細胞引起HI，因為抗病毒依賴CMI）。轉(zhuǎn)入

培養(yǎng)

表達重組載體疫苗：轉(zhuǎn)入培養(yǎng)表達76亞單位疫苗：

除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。如腦膜炎球菌和流感桿菌表面的特異性多糖+吸附劑制成疫苗（不含類脂、無毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，這種疫苗防止減毒活疫苗回復突變和腫瘤病毒潛在的致癌作用。DNA疫苗：

即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），這種核酸既是載體又能在真核細胞中表達抗原，誘導產(chǎn)生細胞毒殺傷功能的T細胞，有效預防病毒、胞內(nèi)寄生菌及寄生蟲引起的傳染。亞單位疫苗：77轉(zhuǎn)基因植物疫苗：

將編碼某一病原體保護性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達，人們食用植物時，就完成了預防接種。如食用西紅柿，獲得乙肝疫苗的接種。治療疫苗：

葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。可能的機制是前者是脫敏作用，后者是打破免疫耐受。

類毒素：

細菌外毒素+0.3%~0.4%甲醛類毒素(毒性消失,保留抗原性).如白百破疫苗.轉(zhuǎn)基因植物疫苗：78絨毛尿囊膜（allantocherion）病毒＋特異性抗體＋雞紅細胞＝不凝集如腦膜炎球菌和流感桿菌表面的特異性多糖+吸附劑制成疫苗（不含類脂、無毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，這種疫苗防止減毒活疫苗回復突變和腫瘤病毒潛在的致癌作用。核酶（ribozyme）對一般病毒檢測意義不大①采取標本分離病毒為時已晚絨毛尿囊膜（allantocherion）EAV核心抗原抗體(1)血凝抑制試驗—正粘病毒型與亞型鑒定多由減毒病原菌制成；絨毛尿囊膜（allantocherion）臨床診斷少用嗜神經(jīng)病毒卵黃囊（yolksac）②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒②形成多核巨細胞或稱融合細胞（麻疹病毒、巨細胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；優(yōu)點：結(jié)果易觀察，可建立動物模型痘苗病毒、人類皰疹病毒接種部位流感病毒、腮腺炎病毒②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒二、人工被動免疫常用生物制品

免疫球蛋白血清丙種球蛋白

細胞免疫制劑

IFN-α、β、γ細胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的殺傷細胞

——LAK細胞

絨毛尿囊膜（allantocherion）二、人工被動免疫常79第三節(jié)病毒感染的治療

核苷類藥物

非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物

干擾素和干擾素誘生劑

中草藥

基因治療劑

治療性疫苗

抗病化學制劑反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）

第三節(jié)病毒感染的治療80思考題1.分離培養(yǎng)病毒的方法有那些?2.病毒性感染的快速診斷方法有哪些？3.預防病毒性感染有哪些人工自動免疫制劑？4.診斷病毒的核酸技術(shù)有哪些？思考題1.分離培養(yǎng)病毒的方法有那些?81Bye~Bye~822.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒

2.雞胚培養(yǎng)832、雞胚