免疫學實驗指導書

免疫學實驗指導劉佳斌編生物技術(shù)系2005.31

動物的注射采血及血清制備家兔采血有耳靜脈采血，耳動脈放血，心臟采血和勁動脈放血法，耳緣靜脈采血一般20ML不影響其存活。雞一般用心臟采血法，每只雞一次取血20ML，不影響其存活，經(jīng)3—6個月后，可再次采血。注射途徑一般有皮下、靜脈、皮內(nèi)和腹腔。一、目的與內(nèi)容：(一)目的學習動物不同部位的采血方法練習對家兔耳靜脈的注射方法用離心法制備血清(二)內(nèi)容1、雞心臟采血2、家兔采血3、制備血清二、材料與用品(一)材料兔、雞(二)用品生理鹽水、注射器、剪刀、鑷子、試管、離心管、離心機三、操作與觀察(一)雞心臟采血1、固定雞腿、翅膀，拔取心臟部位羽毛，用手將雞按定。20ML取下針頭，將血液放入離心管。(二)家兔采血1、家兔心臟采血固定兔，剪取左前胸心臟部位的毛，酒精棉球消毒皮膚。指在胸左惻由下向上數(shù)至第三至四肋骨探測心臟搏動最劇烈處家兔靜脈注射，在耳緣靜脈注入1ML生理鹽水。2、家兔耳緣靜脈采血。(三)制備血清四、作業(yè)與思考1、心臟采血關鍵什么？需要注意哪些問題？2、抓兔子時為什么不能抓它的雙耳？正確的抓取方法是什么？實驗2抗原與免疫血清的制備B9一、目的與內(nèi)容(一)目的1、抗原與抗體的制備方法2、為凝集實驗制備材料(二)內(nèi)容1、抗原的制備2、免疫血清的制備二、材料與用品(一)材料大腸桿菌，家兔(二)用品70.5%的石炭酸生理鹽水三、操作與觀察（一）抗原的制備5ML0.5%的石炭酸生理鹽水，注射大腸桿菌斜面，洗下菌臺用無菌毛細菌滴管吸取洗下的菌液，注入無菌小試管601取一與比濁管同質(zhì)量的小試管，加菌液1ml多，是原菌液濃度而定，混勻后各比濁管比濁。果二者透光度相同，即可目測該菌大致濃度。9／ｍｌ，3（二）免疫血清的制備（1）注射動物：耳緣靜脈注射抗原。（2）14日采血1ｍｌ，分離血清，測其效價，合格即大量采血。心臟采血分離免疫血清。１日１日０．２ｍｌ０．４ｍｌ４日２日６日０．６ｍｌ２．０ｍｌ四、作業(yè)與思考１．在動物體內(nèi)制備免疫血清為何要多次注射？實驗3環(huán)狀沉淀反應環(huán)狀沉淀反應是使抗原抗體在沉淀管內(nèi)形成交界面一、目的與內(nèi)容(一)目的通過沉淀素的效價測定，學習環(huán)狀沉淀反應的操作方法及結(jié)果觀察。(二)內(nèi)容雞血清與免抗雞免疫血清發(fā)生沉淀反應。二、材料與用品(一)材料雞血清、兔血清、免抗雞免疫血清(二)用品小試管、1ml吸管量筒、生理鹽水三、操作與觀察試管號生理鹽水/ml1：25清/ml血清稀釋液（1#1*2#試管號生理鹽水/ml1：25清/ml血清稀釋液1234567111111111#1*1#2*1#3*1#4*1#5*1#6*1/501/1001/2001/4001/8001/16001/32009個干潔小試管插在試管架上，使直立。1：2的免抗雞免疫血清，加入小試管底部，每管約兩滴。用另一吸管吸取上面稀釋的雞血清（抗原，按下表加入各管。試管123456789免抗雞（1：2222222222）/滴稀釋度雞血清——1/501/1001/2001/4001/8001/16001/3200生理鹽水兔血清——444444444量/滴從最高峰稀釋度加起，加入時沿壁徐徐加入，使與下層免抗雞免疫血清之間形成界面，切勿搖動。15—30分鐘，觀察試管中的兩液面交界處，有無白色沉淀出現(xiàn)。結(jié)果記錄：由白色沉淀“+沉淀素效價。四、作業(yè)與思考結(jié)果：試管試管123456789抗原1/501/1001/2001/4001/8001/16001/3200生理鹽水兔血清結(jié)果該沉淀素效價為？實驗4玻片凝集反應免疫血清的存在，這是一種定性方法。一、目的與內(nèi)容(一)目的了解血清學反應的基本原則。學習玻片凝集現(xiàn)象。觀察凝集現(xiàn)象。(二)內(nèi)容兔抗血清與與大腸桿菌發(fā)生凝集反應。二、材料與用品(一)材料大腸桿菌、注射大腸桿菌抗原后的家兔(二)用品瓊脂斜面、培養(yǎng)物、生理鹽水、玻片、接種環(huán)、血清三、操作與觀察10ml，離心，制備抗血清。1：10用生理鹽水稀釋抗血清。11：101滴生理鹽水。挑取少許細菌混入生理鹽水中，再攪勻，挑取少許細菌混入血清，攪勻。將玻片略微擺動后，靜置室溫中，1—3端為生理鹽水對照，