Lab培養(yǎng)基的配制與滅菌

2Sterilization

–destructionofallformsofmicrobiallife,includingendospores.

PhysicalMethods—Moistheat

Autoclaving?

Action-proteindenaturation.?

Veryeffectivemethodofsterilization;atabout15psi（Ib/in2

）

ofpressure(121oC[250oF]),allvegetativecellsandtheirendosporesarekilledinabout15min.

—Dryheat

Directflaming ?

example:InoculationloopHot-airsterilization

?

Bakinginoven

?

Veryeffectivemethodofsterilization,butrequirestemperatureof170oC[340oF]forabout2hr.—Filtration

–

Separationofbacteriafromsuspendingliquid. –

Removesmicrobesbypassageofaliquidorgasthroughascreenlikematerial.Mostfiltersconsistofdiatomaceousearth,celluloseacetateornitrocellulose.–

0.45mfiltersremovesmostbacteria,0.20mmoreinclusive,virusesneed0.01m.–

Usefulforsterilizingliquids(enzymes,vaccines)thataredestroyedbyheat.三實(shí)驗(yàn)材料與器材培養(yǎng)基：牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉紅、鏈霉素、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、KNO3

、K2HPO4·3H2OMgSO4·7H2OFeSO4·7H2O.器材：玻璃器皿、天平、pH試紙、滅菌鍋等四操作步驟稱(chēng)量→溶解→調(diào)pH*→（過(guò)濾*）→分裝*→加塞*→包扎→高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌滅菌操作步驟首先將內(nèi)層滅菌桶取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。

放回滅菌桶，并裝入待滅菌物品。注意不要裝得太擠，以免防礙蒸汽流通而影響滅菌效果。三角燒瓶與試管口端均不要與桶壁接觸，以免冷凝水淋濕包口的紙而透入棉塞。加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi)。再以?xún)蓛蓪?duì)稱(chēng)的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。開(kāi)啟電源加熱，并同時(shí)打開(kāi)排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的冷空氣。待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥，讓鍋內(nèi)的溫度隨蒸汽壓力增加而逐漸上升。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用1.05kg/cm2

，121.3℃，20min滅菌。滅菌所需時(shí)間到后，切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品。如果壓力未降到0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，就會(huì)因鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染。將取出的滅菌培養(yǎng)基放入37℃溫箱培養(yǎng)24h，經(jīng)檢查若無(wú)雜菌生長(zhǎng)，即可待用。五注意事項(xiàng)

培養(yǎng)基分裝過(guò)程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。使用滅菌鍋應(yīng)嚴(yán)格按照操作程序進(jìn)行。滅菌所需時(shí)間到后，要先切斷