實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)

實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗1地貧的發(fā)病率、地域分布及危害

地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；廣西發(fā)病率為20%；重型地貧給家庭社會帶來沉重的經濟負擔和難以估量的精神負擔；地貧的發(fā)病率、地域分布及危害地中海沿岸國家、東南亞及中國南2實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)3中國南方人群地貧基因攜帶率

地區(qū)攜帶率(%)

地貧β地貧合計廣西17.66.424.0廣東8.52.511.0海南12.72.715.4云南9.8

7.317.1貴州4.25.19.3重慶5.22.07.2中國南方人群地貧基因攜帶率地區(qū)攜帶率(%)地貧β地貧4高發(fā)區(qū)人群遺傳負荷評估高發(fā)區(qū)人群遺傳負荷評估5定義地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：

由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。定義地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：6其特點是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導致血紅蛋白的組成成分改變。本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現為慢性進行性溶血性貧血。其特點是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或74、將上清液輕輕倒入1.1、取試管一只，加入A試驗液1ml，放37℃，預熱1-2分鐘。SG-B母液采用氯化鈉制成；4個α基因都缺失了(--/--)，在孕后期或出生后即死亡?；靹?，3000轉/分鐘，離心5分鐘。標本采集后，測試應在三日內完成。產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生?！緟⒖贾担▍⒖挤秶繙y定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）SG-B母液采用氯化鈉制成；SG-B母液采用氯化鈉制成；鑒別診斷(Differentialdiagnosis)Erythrocytefragilitytest血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis混勻，3000轉/分鐘，離心5分鐘。肽鏈分析Peptidechainanalyses混勻，3000轉/分鐘，離心5分鐘。5、向試管中加入C試驗液0.地中海貧血的病理生理4、將上清液輕輕倒入1.地中海貧血的病理生理8實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)9α-地中海貧血

重型α地貧（HbBart’s胎兒水腫綜合征）4個α基因都缺失了(--/--)

，在孕后期或出生后即死亡。α-地中海貧血重型α地貧10地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）4、將上清液輕輕倒入1.貧血癥者常伴有紅細胞滲透脆性的改變。SG-B母液（終止紅細胞溶血液）；4、將上清液輕輕倒入1.已發(fā)生溶血或有血凝塊的標本為不合格樣品。廣西人群地貧基因攜帶率很高。5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標準α地貧.無創(chuàng)性產前診斷是未來發(fā)展的方向。高發(fā)區(qū)人群遺傳負荷評估(β0-thalmajor)由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。SG-B母液采用氯化鈉制成；Erythrocytefragilitytest血紅蛋白電泳HemoglobinelectrophoresisErythrocytefragilitytest其特點是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導致血紅蛋白的組成成分改變。紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。SG-B母液采用氯化鈉制成；正常溶血率：指紅細胞滲透脆性在正常范圍。地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：11實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)12實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)13實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)14重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血15重度β-地中海貧血骨髓腔擴大，骨質變薄，頭大、眼間距增寬、鼻梁塌陷、顴骨突起等重度β-地中海貧血骨髓腔擴大，骨質變薄，頭大、眼間距增寬、鼻16重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血17重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血18重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血19重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血20重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血21血紅蛋白電泳HemoglobinelectrophoresisSG-B母液采用氯化鈉制成；SG-B母液（終止紅細胞溶血液）；4個α基因都缺失了(--/--)，在孕后期或出生后即死亡。Erythrocytefragilitytest溶血率降低：指紅細胞滲透脆性降低；血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis混勻，3000轉/分鐘，離心5分鐘。7、按下列公式計算出溶血率百分比。無創(chuàng)性產前診斷是未來發(fā)展的方向。D2X1.SG-B母液采用氯化鈉制成；臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病?；靹颍?000轉/分鐘，離心5分鐘?！緟⒖贾担▍⒖挤秶?ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。貧血癥者常伴有紅細胞滲透脆性的改變。7、按下列公式計算出溶血率百分比。由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。αchaindisappear(HbBart’shydropfetalis)血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophores22實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)23結論1.廣西人群地貧基因攜帶率很高。一方為基因攜帶者，推薦配偶行基因檢測。2.父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產前診斷。3.產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。4.絨毛活檢和羊膜腔穿刺均可行地貧產前診斷，但推薦羊膜腔穿刺。5.無創(chuàng)性產前診斷是未來發(fā)展的方向。結論1.廣西人群地貧基因攜帶率很高。一方為基因攜帶者，推24羊膜腔穿刺術羊膜腔穿刺術25羊膜腔穿刺術羊膜腔穿刺術26實驗室檢查實驗室檢查27--靶型RBC--靶型RBC28

紅細胞脆性實驗Erythrocytefragilitytest地貧患者正常人紅細胞脆性實驗地貧患者正常人29血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophores30實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)31

βchaindisappear(β0-thalmajor)αchaindisappear

(HbBart’shydropfetalis)

12341234

肽鏈分析Peptidechain

analyses

32單管多重PCR

單管多重PCR

33SG-B母液采用氯化鈉制成；(β0-thalmajor)混勻，3000轉/分鐘，離心5分鐘。SG-B母液采用氯化鈉制成；新鮮抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。鑒別診斷(Differentialdiagnosis)血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis(HbBart’shydropfetalis)αchaindisappearSG-B母液采用氯化鈉制成；7、按下列公式計算出溶血率百分比。5%,則為β地貧基因攜帶者7、按下列公式計算出溶血率百分比。其特點是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導致血紅蛋白的組成成分改變。測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）3、5分鐘后，加入B試驗液1ml。標本采集后，測試應在三日內完成。αchaindisappear產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.地中海貧血初篩檢查

PCR-ASOSG-B母液采用氯化鈉制成；

PCR-ASO34診斷(Diagnosis)

臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）診斷(Diagnosis)臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽35

地中海貧血初篩檢查

MCV<80fl和/或MCH<27pg,則高度懷疑為地貧;紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.60):即可懷疑為地貧;HbA2<2.5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標準α地貧.HbA2>3.5%,則為β地貧基因攜帶者地中海貧血初篩檢查

MCV<80fl和/或MCH36

地中海貧血確診試驗

地貧診斷基因芯片(Thalachip);地貧基因診斷條膜(反向點雜交)/一管法多重PCRASO寡核苷酸探針點雜交DNA測序地中海貧血確診試驗

地貧診斷基因芯片(Thalachip)37鑒別診斷(Differentialdiagnosis)

缺鐵性貧血遺傳性球形紅細胞增多癥傳染性肝炎或肝硬化鑒別診斷(Differentialdiagnosis)

缺38實驗：紅細胞滲透脆性檢驗

(試劑盒一管法)實驗：紅細胞滲透脆性檢驗39【檢驗原理】貧血癥者常伴有紅細胞滲透脆性的改變。測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）【檢驗原理】40地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：溶血率降低：指紅細胞滲透脆性降低；4、將上清液輕輕倒入1.測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）肽鏈分析Peptidechainanalyses5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。Erythrocytefragilitytest(HbBart’shydropfetalis)產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標準α地貧.已發(fā)生溶血或有血凝塊的標本為不合格樣品。SG-B母液采用氯化鈉制成；紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.肽鏈分析Peptidechainanalyses5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。一方為基因攜帶者，推薦配偶行基因檢測。αchaindisappear測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）標本采集后，測試應在三日內完成。測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.【主要組成成分】組成：由SG-A母液（紅細胞滲透脆性檢測液）；SG-B母液（終止紅細胞溶血液）；SG-C母液（紅細胞溶血液）組成；成分：

SG-A母液采用氯化鈉（NaCl）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4）制成；SG-B母液采用氯化鈉制成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成。地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：【主要組成成41【樣品要求】新鮮抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。已發(fā)生溶血或有血凝塊的標本為不合格樣品。標本采集后，測試應在三日內完成。【樣品要求】42【實驗操作】1、取試管一只，加入A試驗液1ml，放37℃，預熱1-2分鐘。2、加入待測抗凝全血10μl，立刻混勻，繼續(xù)放在37℃保溫5分鐘。3、5分鐘后，加入B試驗液1ml?；靹?，3000轉/分鐘，離心5分鐘。4、將上清液輕輕倒入1.0cm×1.0cm的比色杯中（切勿攪動試管底的紅細胞），于530nm波長讀取光密度D1（以純化水作空白對照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）5、向試管中加入C試驗液0.5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。7、按下列公式計算出溶血率百分比。溶血

％=D1

×100％D2X1.25【實驗操作】溶血％=D143臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）(HbBart’shydropfetalis)SG-B母液采用氯化鈉制成；Erythrocytefragilitytest紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.【參考值（參考范圍）】5、向試管中加入C試驗液0.地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：地貧診斷基因芯片(Thalachip);臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）肽鏈分析Peptidechainanalyses紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.貧血癥者常伴有紅細胞滲透脆性的改變。標本采集后，測試應在三日內完成。血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。5、向試管中加入C試驗液0.SG-C母液采用皂素（saponin）制成。SG-B母液采用氯化鈉制成；5、向試管中加入C試驗液0.4個α基因都缺失了(--/--)，在孕后期或出生后即死亡。αchaindisappear地中海貧血初篩檢查產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生?；靹?，3000轉/分鐘，離心5分鐘?；靹?，3000轉/分鐘，離心5分鐘。（注56-64％為溶血率輕度降低）。SG-C母液（紅細胞溶血液）組成；溶血％=D1×100％已發(fā)生溶血或有血凝塊的標本為不合格樣品。Erythrocytefragilitytest正常溶血率：指紅細胞滲透脆性在正常范圍。血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。5、向試管中加入C試驗液0.地貧的發(fā)病率、地域分布及危害(HbBart’shydropfetalis)血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis中國南方人群地貧基因攜帶率混勻，3000轉/分鐘，離心5分鐘。(β0-thalmajor)紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.無創(chuàng)性產前診斷是未來發(fā)展的方向。5、向試管中加入C試驗液0.已發(fā)生溶血或有血凝塊的標本為不合格樣品。新鮮抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。正常溶血率：指紅細胞滲透脆性在正常范圍。父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產前診斷。5%,則為β地貧基因攜帶者4、將上清液輕輕倒入1.5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。7、按下列公式計算出溶血率百分比。Erythrocytefragilitytest產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。肽鏈分析PeptidechainanalysesSG-B母液采用氯化鈉制成；溶血率降低：指紅細胞滲透脆性降低；標本采集后，測試應在三日內完成。一方為基因攜帶者，推薦配偶行基因檢測。已發(fā)生溶血或有血凝塊的標本為不合格樣品。肽鏈分析Peptidechainanalyses(β0-thalmajor)6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。(HbBart’shydropfetalis)(HbBart’shydropfetalis)血紅蛋白電泳HemoglobinelectrophoresisSG-B母液采用氯化鈉制成；(β0-thalmajor)正常溶血率：指紅細胞滲透脆性在正常范圍。無創(chuàng)性產前診斷是未來發(fā)展的方向。紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.SG-B母液采用氯化鈉制成；貧血癥者常伴有紅細胞滲透脆性的改變。成分：

SG-A母液采用氯化鈉（NaCl）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4）制成；混勻，3000轉/分鐘，離心5分鐘。5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。7、按下列公式計算出溶血率百分比。3、5分鐘后，加入B試驗液1ml?！緟⒖贾担▍⒖挤秶咳苎剩?gt;65％為正常溶血率；<55％為溶血率降低；（注56-64％為溶血率輕度降低）。【檢驗結果的解釋】正常溶血率：指紅細胞滲透脆性在正常范圍。溶血率降低：指紅細胞滲透脆性降低；常見于地貧或低頻基因攜帶者、嚴重缺鐵性貧血者，小性紅細胞增多癥貧血者等。溶血率輕度降低：指紅細胞溶血率不明顯減低，在正常與可疑貧血癥之間。臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）5、向試管中44實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗45地貧的發(fā)病率、地域分布及危害

地中海沿岸國家、東南亞及中國南方多見；廣西發(fā)病率為20%；重型地貧給家庭社會帶來沉重的經濟負擔和難以估量的精神負擔；地貧的發(fā)病率、地域分布及危害地中海沿岸國家、東南亞及中國南46實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)47中國南方人群地貧基因攜帶率

地區(qū)攜帶率(%)

地貧β地貧合計廣西17.66.424.0廣東8.52.511.0海南12.72.715.4云南9.8

7.317.1貴州4.25.19.3重慶5.22.07.2中國南方人群地貧基因攜帶率地區(qū)攜帶率(%)地貧β地貧48高發(fā)區(qū)人群遺傳負荷評估高發(fā)區(qū)人群遺傳負荷評估49定義地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：

由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。定義地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：50其特點是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導致血紅蛋白的組成成分改變。本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現為慢性進行性溶血性貧血。其特點是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或514、將上清液輕輕倒入1.1、取試管一只，加入A試驗液1ml，放37℃，預熱1-2分鐘。SG-B母液采用氯化鈉制成；4個α基因都缺失了(--/--)，在孕后期或出生后即死亡?；靹?，3000轉/分鐘，離心5分鐘。標本采集后，測試應在三日內完成。產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生?！緟⒖贾担▍⒖挤秶繙y定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）SG-B母液采用氯化鈉制成；SG-B母液采用氯化鈉制成；鑒別診斷(Differentialdiagnosis)Erythrocytefragilitytest血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis混勻，3000轉/分鐘，離心5分鐘。肽鏈分析Peptidechainanalyses混勻，3000轉/分鐘，離心5分鐘。5、向試管中加入C試驗液0.地中海貧血的病理生理4、將上清液輕輕倒入1.地中海貧血的病理生理52實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)53α-地中海貧血

重型α地貧（HbBart’s胎兒水腫綜合征）4個α基因都缺失了(--/--)

，在孕后期或出生后即死亡。α-地中海貧血重型α地貧54地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）4、將上清液輕輕倒入1.貧血癥者常伴有紅細胞滲透脆性的改變。SG-B母液（終止紅細胞溶血液）；4、將上清液輕輕倒入1.已發(fā)生溶血或有血凝塊的標本為不合格樣品。廣西人群地貧基因攜帶率很高。5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標準α地貧.無創(chuàng)性產前診斷是未來發(fā)展的方向。高發(fā)區(qū)人群遺傳負荷評估(β0-thalmajor)由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。SG-B母液采用氯化鈉制成；Erythrocytefragilitytest血紅蛋白電泳HemoglobinelectrophoresisErythrocytefragilitytest其特點是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導致血紅蛋白的組成成分改變。紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。SG-B母液采用氯化鈉制成；正常溶血率：指紅細胞滲透脆性在正常范圍。地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：55實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)56實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)57實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)58重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血59重度β-地中海貧血骨髓腔擴大，骨質變薄，頭大、眼間距增寬、鼻梁塌陷、顴骨突起等重度β-地中海貧血骨髓腔擴大，骨質變薄，頭大、眼間距增寬、鼻60重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血61重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血62重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血63重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血64重度β-地中海貧血重度β-地中海貧血65血紅蛋白電泳HemoglobinelectrophoresisSG-B母液采用氯化鈉制成；SG-B母液（終止紅細胞溶血液）；4個α基因都缺失了(--/--)，在孕后期或出生后即死亡。Erythrocytefragilitytest溶血率降低：指紅細胞滲透脆性降低；血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis混勻，3000轉/分鐘，離心5分鐘。7、按下列公式計算出溶血率百分比。無創(chuàng)性產前診斷是未來發(fā)展的方向。D2X1.SG-B母液采用氯化鈉制成；臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病?；靹?，3000轉/分鐘，離心5分鐘?！緟⒖贾担▍⒖挤秶?ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。貧血癥者常伴有紅細胞滲透脆性的改變。7、按下列公式計算出溶血率百分比。由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。αchaindisappear(HbBart’shydropfetalis)血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophores66實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)67結論1.廣西人群地貧基因攜帶率很高。一方為基因攜帶者，推薦配偶行基因檢測。2.父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產前診斷。3.產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。4.絨毛活檢和羊膜腔穿刺均可行地貧產前診斷，但推薦羊膜腔穿刺。5.無創(chuàng)性產前診斷是未來發(fā)展的方向。結論1.廣西人群地貧基因攜帶率很高。一方為基因攜帶者，推68羊膜腔穿刺術羊膜腔穿刺術69羊膜腔穿刺術羊膜腔穿刺術70實驗室檢查實驗室檢查71--靶型RBC--靶型RBC72

紅細胞脆性實驗Erythrocytefragilitytest地貧患者正常人紅細胞脆性實驗地貧患者正常人73血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophores74實驗四地中海貧血與紅細胞滲透脆性試驗課件(同名601)75

βchaindisappear(β0-thalmajor)αchaindisappear

(HbBart’shydropfetalis)

12341234

肽鏈分析Peptidechain

analyses

76單管多重PCR

單管多重PCR

77SG-B母液采用氯化鈉制成；(β0-thalmajor)混勻，3000轉/分鐘，離心5分鐘。SG-B母液采用氯化鈉制成；新鮮抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。鑒別診斷(Differentialdiagnosis)血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis(HbBart’shydropfetalis)αchaindisappearSG-B母液采用氯化鈉制成；7、按下列公式計算出溶血率百分比。5%,則為β地貧基因攜帶者7、按下列公式計算出溶血率百分比。其特點是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導致血紅蛋白的組成成分改變。測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）3、5分鐘后，加入B試驗液1ml。標本采集后，測試應在三日內完成。αchaindisappear產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.地中海貧血初篩檢查

PCR-ASOSG-B母液采用氯化鈉制成；

PCR-ASO78診斷(Diagnosis)

臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）診斷(Diagnosis)臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽79

地中海貧血初篩檢查

MCV<80fl和/或MCH<27pg,則高度懷疑為地貧;紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.60):即可懷疑為地貧;HbA2<2.5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標準α地貧.HbA2>3.5%,則為β地貧基因攜帶者地中海貧血初篩檢查

MCV<80fl和/或MCH80

地中海貧血確診試驗

地貧診斷基因芯片(Thalachip);地貧基因診斷條膜(反向點雜交)/一管法多重PCRASO寡核苷酸探針點雜交DNA測序地中海貧血確診試驗

地貧診斷基因芯片(Thalachip)81鑒別診斷(Differentialdiagnosis)

缺鐵性貧血遺傳性球形紅細胞增多癥傳染性肝炎或肝硬化鑒別診斷(Differentialdiagnosis)

缺82實驗：紅細胞滲透脆性檢驗

(試劑盒一管法)實驗：紅細胞滲透脆性檢驗83【檢驗原理】貧血癥者常伴有紅細胞滲透脆性的改變。測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）【檢驗原理】84地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：溶血率降低：指紅細胞滲透脆性降低；4、將上清液輕輕倒入1.測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）肽鏈分析Peptidechainanalyses5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。Erythrocytefragilitytest(HbBart’shydropfetalis)產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。5%,則高度懷疑為α地貧基因攜帶者;ξ陽性為標準α地貧.已發(fā)生溶血或有血凝塊的標本為不合格樣品。SG-B母液采用氯化鈉制成；紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.肽鏈分析Peptidechainanalyses5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。一方為基因攜帶者，推薦配偶行基因檢測。αchaindisappear測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）標本采集后，測試應在三日內完成。測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.【主要組成成分】組成：由SG-A母液（紅細胞滲透脆性檢測液）；SG-B母液（終止紅細胞溶血液）；SG-C母液（紅細胞溶血液）組成；成分：

SG-A母液采用氯化鈉（NaCl）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4）制成；SG-B母液采用氯化鈉制成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成。地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：【主要組成成85【樣品要求】新鮮抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置2℃~8℃保存。已發(fā)生溶血或有血凝塊的標本為不合格樣品。標本采集后，測試應在三日內完成?！緲悠芬蟆?6【實驗操作】1、取試管一只，加入A試驗液1ml，放37℃，預熱1-2分鐘。2、加入待測抗凝全血10μl，立刻混勻，繼續(xù)放在37℃保溫5分鐘。3、5分鐘后，加入B試驗液1ml?；靹?，3000轉/分鐘，離心5分鐘。4、將上清液輕輕倒入1.0cm×1.0cm的比色杯中（切勿攪動試管底的紅細胞），于530nm波長讀取光密度D1（以純化水作空白對照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）5、向試管中加入C試驗液0.5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長比色，讀取光密度D2。7、按下列公式計算出溶血率百分比。溶血

％=D1

×100％D2X1.25【實驗操作】溶血％=D187臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）(HbBart’shydropfetalis)SG-B母液采用氯化鈉制成；Erythrocytefragilitytest紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.【參考值（參考范圍）】5、向試管中加入C試驗液0.地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）：地貧診斷基因芯片(Thalachip);臨床特點＋實驗室檢查＋父母調查陽性＋（基因分析）由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）肽鏈分析Peptidechainanalyses紅細胞滲透脆性試驗陽性(Redcellosmoticfragilitytest,ROFT;<0.貧血癥者常伴有紅細胞滲透脆性的改變。標本采集后，測試應在三日內完成。血紅蛋白電泳Hemoglobinelectrophoresis產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。測定紅細胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴重缺鐵性貧血癥）由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時成人型Hb（HbA：α2β2）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。產前診斷可預防重癥和中間型地貧患兒出生，結合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。5、向試管中加入C試驗液0.SG-C母液采用皂素（saponin）制成。SG-B母液采用氯化鈉制成；5、向試管中加入C試驗液0.4個α基因都缺失了(--/--)，在孕后期或出生后即