肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色體會(huì)課件

常見肝病的病理形態(tài)特點(diǎn)及免疫組化染色的幾點(diǎn)體會(huì)

肝穿刺標(biāo)本檢查和處理原則1.肉眼觀察肝穿刺標(biāo)本呈完整園柱狀，長度1－3cm典型的慢性肝炎肝纖維化標(biāo)本呈竹節(jié)狀外觀肝硬化的穿刺標(biāo)本，呈不規(guī)則碎塊2.石蠟切片每張玻片上應(yīng)放置超過6個(gè)連續(xù)組織切片，有助于肝纖維化的病理診斷。④Dm-HSC⑤α-SMA-MFb

Dmα-SMAS1S2S3S4各種病因引起肝纖維的病理學(xué)特點(diǎn)及分期1.慢性肝炎肝纖維化(Dr.Scheuer方案）活動(dòng)性纖維間隔靜止性纖維間隔脂肪性肝病肝纖維化穿刺肝組織呈淡黃色，標(biāo)本懸浮于固定液

小葉中央?yún)^(qū)纖維化竇周纖維化4.Wilson病紅氨酸(Rubeanicacid)染色,銅被染成深綠色6.自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH）

門管區(qū)肝細(xì)胞呈花環(huán)狀排列HepaticRosette，表現(xiàn)為數(shù)個(gè)水樣變性的肝細(xì)胞被炎癥細(xì)胞和塌陷的網(wǎng)狀支架包繞成花環(huán)狀結(jié)構(gòu)。8.血吸蟲性肝纖維化

肝癌(LIVERCANCER)HCCICCCombinedhepatocellularandcholangiocarcinoma肝癌病理診斷常用免疫組化和特染HepPar1線粒體相關(guān)抗原，與AFP無關(guān)對(duì)胎兒和成人肝細(xì)胞高度特異(HCC:陽性率82-97%）

AFPHCC陽性率：15-82%CD34:HCC型染色長條分枝，管壁纖細(xì)，管腔狹窄，分布均勻彌漫.而非癌肝組織內(nèi)極少見.CK19:膽管型CK:CK19,CK7肝細(xì)胞－膽管上皮，ICC：77-100%ICC最好的標(biāo)志物CEA：monoclonalCEA:毛細(xì)膽管－ICC，轉(zhuǎn)移性肝癌：60-75%+HCC:0-11%+polyclonalCEA:毛細(xì)膽管＋HCC特異標(biāo)志物之一

MOC31:抗人上皮相關(guān)抗原

轉(zhuǎn)移性腺癌：100%+ICC:92.9%+HCC:0%+胃癌肝轉(zhuǎn)移HBsAg:HCC:70-80%+胞質(zhì)型，胞核型陽性胞質(zhì)型，核周型陽性免疫組織化學(xué)染色的幾點(diǎn)體會(huì)一、組織和細(xì)胞標(biāo)本制備目的：(1)最大限度地保存組織結(jié)構(gòu)。(2)最大限度地保存抗原性。注意事項(xiàng)：在選擇組織處理方法前，先根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，參考抗體說明，確定組織處理方式(冰凍?石蠟?)。1.取材（1）原則：盡可能新鮮，動(dòng)物標(biāo)本可選用動(dòng)脈灌注固定。（2）取材部位：盡量包括病灶和正常組織交界處，避免選擇壞死組織。（3）避免擠壓：受擠壓組織不但影響HE切片的觀察，還造成非特異性免疫組化組織著色。2.固定根據(jù)不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時(shí)組織越新鮮越好。組織塊厚薄大小要合適。容器要大,固定液要寬余.固定時(shí)間既要考慮充分固定,又不能太長(依組織塊厚薄大小從24hr至3～5天,太長可溶性抗原會(huì)滲漏,陽性會(huì)減弱甚至轉(zhuǎn)陰.選擇最合適的固定劑,如用福爾馬林,必須用緩沖福爾馬林4.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮及已固定材料均適合于冷凍包埋、切片。★防止冰結(jié)晶!!!預(yù)處理:目的是減少組織中的水分以減少冰結(jié)晶的產(chǎn)生,方法是將已固定、沖洗的組織塊放入20～30%蔗糖緩沖液內(nèi),4℃冰箱過夜,再將組織塊埋于OCT包埋劑速凍:目的是使溫度很快下降迅速通過冰點(diǎn),防止冰結(jié)晶產(chǎn)生。速凍方法液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數(shù)秒,等組織塊凍結(jié)后,立即移入低溫冰箱(裝入封口塑料袋內(nèi)密封)或放入恒冷切片機(jī)恒冷箱內(nèi)以備切片;干冰-丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內(nèi),逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達(dá)-70℃;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰-丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內(nèi)速凍半分至一分鐘。免疫組化染色后的襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細(xì)胞核。但如果陽性信號(hào)在細(xì)胞核,切勿襯染細(xì)胞核!!!細(xì)胞質(zhì)襯染:1%亮綠,但退色較快,可改用堅(jiān)固綠(FASTBLUE)染,則保存時(shí)間較長封固和保存絕大多數(shù)免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用DAB以外的底物應(yīng)注意有色沉淀物如為脂溶性，應(yīng)改用水溶性封固物如明膠、甘油緩沖液等。酶免疫染色切片可保存數(shù)周甚至數(shù)月。免疫熒光染色后應(yīng)盡快觀察、拍照。一.常用免疫組織化學(xué)方法免疫熒光:

用于培養(yǎng)細(xì)胞效果較好,石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強(qiáng),用時(shí)要注意

FITC(異硫氰酸熒光素)用450～490nm光激發(fā),515nm濾片觀察,呈翠綠色

RB200(四乙基羅達(dá)明B200)用570nm光激發(fā),596～600nm濾片觀察,呈橘紅色

TRITC(四甲基異硫氰酸羅達(dá)明)用530～560nm光激發(fā),580nm濾片觀察,呈紅色

Texasred

用595nm光激發(fā),615nm濾片觀察,呈紅色直接免疫熒光法:

間接免疫熒光法雙重?zé)晒馊旧?.免疫組織化學(xué)常用方法:PAPABC或LSABELPS(二步法)20世紀(jì)70年（1970）SternbergPeroxidase-anti-Peroxidase(PAP)20世紀(jì)80年代（1981）許世民ABC（親和免疫組化）Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex90年代中期：EnhancedPolymerOneStep(EPOS)EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,ELPS)簡稱二步法1mol含70molHRP+10molAB如何做好免疫組化染色?什么才是高質(zhì)量的免疫組化染色?陽性信號(hào)突出無背景染色切片平整無破裂/碎,無污穢做好免疫組化染色幾點(diǎn)體會(huì)1.組織細(xì)胞處理:

固定劑固定時(shí)間速凍防冰結(jié)晶白片質(zhì)量好:平整,無破裂/碎,無污穢防脫片:玻片絕對(duì)干凈涂粘合劑:

白膠多聚賴氨酸鉻明礬明膠液甲醛明膠液

貼片后冷風(fēng)吹干或37℃/60℃烘干

2.抗體:特異性,高效價(jià),親合力,適度稀釋度3.石蠟切片-抗原修復(fù)

(1)蛋白酶消化:胰蛋白酶胰糜蛋白酶鏈霉蛋白酶蛋白酶K胃蛋白酶

消化不足-修復(fù)失敗,假陰性或信號(hào)弱消化過度-結(jié)構(gòu)破環(huán),脫片(2)熱修復(fù):微波照射高壓加熱水浴加熱

(3)微波+蛋白酶消化注意點(diǎn):★固定時(shí)間長,消化時(shí)間或熱修復(fù)時(shí)間適當(dāng)延長★酶生產(chǎn)廠家不一,或批號(hào)不一,消化時(shí)間可能也不一★熱修復(fù)的介質(zhì)要選合適,必須要加鈣螯合劑