當(dāng)前雞重要呼吸道傳染病(AI、ND、IB)的危害及防控策略課件

當(dāng)前雞重要呼吸道傳染?。ˋI、ND、IB）的危害及防控策略2014.3.24.成都.GuangxiUniversitySince1928冬春季常見呼吸道疾病1、禽流感2、新城疫3、傳染性支氣管炎4、傳染性喉氣管炎5、傳染性鼻炎6、支原體感染7、大腸桿菌病病毒性感染（大多為原發(fā)感染）大多為繼發(fā)感染GuangxiUniversitySince1928生物安全病毒性感染細(xì)菌性感染Fig.1.Pyramidstructureforthefactorsassociatedthehealthofbird細(xì)菌性感染病毒性感染E.coli,Mg,ICSalmonellaIBV,NDV,ILTV,AIV免疫抑制性疾病免疫抑制性疾病MDV,IBDV,CIAV,REV,ALV,ReoV疾病防治原則1、雛雞保暖同時(shí)，注意通風(fēng)換氣；（定期換氣）2、要控制呼吸道疾病，首先要做好病毒性疾病的

預(yù)防免疫；3、盡量避免或降低應(yīng)激的發(fā)生和不利影響；4、預(yù)防（免疫、應(yīng)激前給藥）為主，治療為輔；5、藥物治療前先做藥敏試驗(yàn)。GuangxiUniversitySince1928雛雞的溫度溫度要求：

第1-5天35°C，以后每周降低2-3°C，直至維持在保溫后期的28°C或者以上。目觀以雞群均勻分散、表現(xiàn)活潑為宜。房間內(nèi)溫度分布均勻煤爐的位置及距離：雞舍的中央全天保持恒定特別要注意夜間和中午的溫度注意防止熱源廢氣直接排放在雞舍內(nèi)或者倒流GuangxiUniversitySince1928濕度保溫膜：最多四周，至少天花板不能用墊料：

干爽不結(jié)塊（但是不起飛塵），厚度5-10cm

刨花＞木糠＞谷殼＞稻草（切短成15-20cm長(zhǎng)）GuangxiUniversitySince1928密度以均勻分散，活動(dòng)沒(méi)有多少限制為宜注意及時(shí)擴(kuò)群

純土雞：12-14天快大（土2、土3）品種：7天飼養(yǎng)后期：大部分時(shí)間在運(yùn)動(dòng)場(chǎng)--種樹、遮陰網(wǎng)--要有足夠的水、料桶GuangxiUniversitySince19281.流行與歷史

又名真性雞瘟、歐洲雞瘟，國(guó)際獸疫局（OIE）列為A類傳染病。

定義：具有危害嚴(yán)重，傳播迅速和穿越國(guó)界的，有產(chǎn)生嚴(yán)重的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)或公共衛(wèi)生后果和在動(dòng)物及動(dòng)物產(chǎn)品的國(guó)際貿(mào)易中重要的傳染病。

各國(guó)政府需要經(jīng)常向OIE報(bào)告A類傳染病，發(fā)生疫情后必24-48小時(shí)內(nèi)報(bào)告OIE。

附：OIE認(rèn)定的ListAandListBdiseases(Table1,2).禽流感(AvianInfluenza,AI)

GuangxiUniversitySince1928國(guó)外禽流感動(dòng)態(tài)：

1878首次發(fā)現(xiàn)于意大利(雞)

1975，1985

Australia(H7N7)

1979England

1983-1984USA

Pennsylvania（H5N2）

1983-1984Ireland

1993,1994,1995

Mexico(H5N2)

1994

Pakistan,Australia

(H7N3)2003-現(xiàn)在亞洲各國(guó)的H5N1、H5N2GuangxiUniversitySince19282.病原

屬正粘病毒的A型流感病毒(Fig.1)，病毒株之間毒力相差很大。從引起隱性感染到致死性疾病均有。亞型很多,HA1~16,

NA1~9。2.1高致病力禽流感病毒（HPAIV）的界定標(biāo)準(zhǔn)美國(guó)動(dòng)物健康協(xié)會(huì)(AHA)、家禽及其它鳥類傳染病委員會(huì)(CTDP)GuangxiUniversitySince1928①皮下接種1:10稀釋的病毒尿囊液(0.2ml／胚)的1一6周齡的易感雞，在10天內(nèi)死亡6、7、8／8羽；②病毒的血凝素（H）抗原為5、7，雖未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)①，但具備HPAIV血凝素裂解位點(diǎn)的氨基酸序列特征；

③雖不屬于H5或H7亞型，但攻毒后使1／5羽的易感雞死亡，而且在不加胰酶時(shí)可在細(xì)胞培養(yǎng)上生長(zhǎng)。GuangxiUniversitySince19282.3抗原變異

抗原飄變(drift)：病毒受免疫選擇壓的作用，HA或NA編碼基因發(fā)生位點(diǎn)突變所致。

抗原移位(shift)：當(dāng)2個(gè)病毒同時(shí)感染1個(gè)細(xì)胞時(shí)，病毒間核酸片段發(fā)生交換重組，產(chǎn)生一個(gè)新的病毒。GuangxiUniversitySince19282.4細(xì)菌的并發(fā)感染細(xì)菌分泌的蛋白酶可幫助AIV中、弱毒株HA的裂解，從而使之感染力提高，毒力增強(qiáng)。背景：AIV對(duì)細(xì)胞感染之先決條件：HA0

HA1和HA2

控制細(xì)菌的并發(fā)、繼發(fā)感染

蛋白酶裂解GuangxiUniversitySince19283.2．經(jīng)濟(jì)損失包括：①撲滅疾病的費(fèi)用（檢測(cè)、防疫、免疫）；②因采取撲殺政策而支付給養(yǎng)禽主的賠償金；③患病禽生產(chǎn)性能（增重、產(chǎn)蛋等）的下降；④死亡（0一100％不等）。GuangxiUniversitySince19284．撲滅AI的措施包括：①嚴(yán)格的檢疫；

②對(duì)疫區(qū)所有禽群進(jìn)行HPAIV感染的流行病學(xué)、血清學(xué)、病毒學(xué)調(diào)查；

③環(huán)境消毒，消除污染源；④強(qiáng)化生物安全（biosecurity）的教育；⑤對(duì)受威脅的地區(qū)使用滅活油乳劑苗。GuangxiUniversitySince1928OIEB類疾病其中列入的禽病12個(gè)(1)傳染性囊病(IBD)(2)馬立氏病(MD)(3)禽支原體病(MG)(4)禽衣原體病(ACH)(5)雞傷寒和雞白痢(FT+PD)(6)禽傳染性支氣管炎IB)(7)禽傳染性喉氣管炎(ILT)(8)禽結(jié)核(ATB)(9)鴨病毒肝炎(DVH)(10)鴨病毒腸炎(DVE)(11)禽霍亂(FC)(12)家禽腸炎沙門氏菌感染

GuangxiUniversitySince1928抗原性細(xì)胞受體跨種傳播能力

關(guān)于支氣管分叉及末端堵塞的病變H9：★★★★IB：★★★ILT：★★ND：★GuangxiUniversitySince1928禽流感的免疫雛雞的免疫3周齡內(nèi)免疫主要依賴母源抗體（種雞的免疫）3周齡以后：依賴出殼后免疫，至少需要免疫后2周的時(shí)間第一次免疫：10~12d齡（夏季）、5-7d齡（冬春），

第二次免疫：一免30d后H5、H9均要免疫GuangxiUniversitySince1928種雞的免疫一般開產(chǎn)前免疫4次：

第三次免疫：90-100d，H5

第四次免疫：開產(chǎn)前10d，H5＋H9生產(chǎn)高峰后：補(bǔ)一次H5＋H9GuangxiUniversitySince1928雞的新城疫GuangxiUniversitySince1928歷史背景新城疫于1926年首次暴發(fā)于印度尼西亞的爪哇和英國(guó)的紐卡斯?fàn)枴?926年以前，在中歐即有類似于我們現(xiàn)在所確定的ND報(bào)告。Levine引證Ochi和Hashimotoin的報(bào)告認(rèn)為朝鮮早在1924年就可能已有此病。Macpherson認(rèn)為1896年蘇格蘭WesternIsles所有雞的死亡是由ND引起。GuangxiUniversitySince1928為了避免與其他疾病的描述性名詞相混淆，Doyle就臨時(shí)命名為“Newcastledisease”，其病毒即為NDV。雖然近年來(lái)該病毒的同義名—禽副粘病毒1型（APMV-1）逐漸普及，但80多年來(lái)，仍然沒(méi)有找到比其更好的名稱。GuangxiUniversitySince1928新城疫仍是許多國(guó)家禽最主要的疾病之一。屬A類傳染?。∣IE），也是國(guó)際家禽及其產(chǎn)品貿(mào)易中嚴(yán)格控制的疾病之一。禽Ⅰ型副粘病毒（APMV-1）長(zhǎng)期以來(lái)一直是危害養(yǎng)禽業(yè)的主要病原之一。GuangxiUniversitySince1928上一世紀(jì)九十年代之前，APMV-1主要引起雞的新城疫和鴿的Ⅰ型副粘病毒病等。

長(zhǎng)期以來(lái)，人們一直認(rèn)為水禽（如鵝和鴨）對(duì)APMV-1的抵抗力最強(qiáng)，即使強(qiáng)毒感染也不表現(xiàn)明顯的臨床癥狀。GuangxiUniversitySince1928但1997年，王永坤等首次報(bào)道江蘇的鵝群發(fā)病。最近國(guó)內(nèi)還有鴨子發(fā)病的報(bào)道。韋平等從9種臨床發(fā)病的禽/鳥類分離到APMV-1。由此可見，APMV-1感染并致病的宿主范圍有擴(kuò)大的趨勢(shì)。GuangxiUniversitySince1928病原學(xué)禽Ⅰ型副粘病毒(APMV-1):

單股負(fù)鏈、不分節(jié)段的RNA病毒。

ICTV（2002年）將其歸屬于:MononegaviralesParamyxoviridae

Paramyxovirinae

Pneumovirinae

Respirovirus

Pneumovirus

Rubulovirus

Metapneumovirus

Morbillivirus

Henipavirus

“TPMV-likeViruses”

Avulavirus（AvianRubulovirus

）禽腮腺炎病毒屬

Avianparainfluenzavirustype1～9(APMV-1～APMV-9)

Typespecies:

Newcastlediseasevirus(NDV)該屬共有9個(gè)血清型即禽副流感病毒(avianparainfluenzavirus)血清1～9型(但簡(jiǎn)寫仍沿用原來(lái)的禽副粘病毒即APMV-1～APMV-9)。NDV屬APMV-1，也是屬的代表種。GuangxiUniversitySince1928新城疫病毒粒子新城疫病毒結(jié)構(gòu)

病毒毒力、抗原病毒感染、抗原GuangxiUniversitySince1928NDV對(duì)理化因素的抵抗力相當(dāng)強(qiáng)，能在環(huán)境中頑強(qiáng)生存。新城疫暴發(fā)后2~8周，仍能從雞舍、蛋殼、羽毛等物質(zhì)中分離到病毒。物理或化學(xué)因素的處理，例如熱、射線（光和紫外線）、pH效應(yīng)和各種化學(xué)藥物均能破壞病毒的感染性。GuangxiUniversitySince1928NDV能凝集人、兩棲類、爬行類和禽類紅細(xì)胞。所有毒株都可凝集人、小鼠和豚鼠紅細(xì)胞，但凝集牛、山羊、綿羊、豬和馬紅細(xì)胞的能力則隨毒株而異。NDV依靠其HN蛋白結(jié)合于紅細(xì)胞表面的含唾液酸的受體，凝集成較大顆粒。這一特性能被特異性抗血清所抑制，成為病毒鑒定的有效方法。GuangxiUniversitySince1928禽I型副粘病毒（APMV-1）為有囊膜的RNA病毒，基因組不分節(jié)段，單股負(fù)鏈。病毒至少含6種結(jié)構(gòu)蛋白（L、P、NP、M、F、HN），均由病毒基因組編碼，還有一種來(lái)源于宿主肌動(dòng)蛋白（非結(jié)構(gòu)蛋白“V”）。GuangxiUniversitySince1928這些基因組的排列序列為3’-NP-P-M-F-HN-L-5’，其中三種與病毒的囊膜有關(guān)：即固定在病毒囊膜表面的血凝素-神經(jīng)氨酸酶糖蛋白（HN）、融合蛋白（F），以及襯于囊膜內(nèi)面的非糖基化膜蛋白（M）；GuangxiUniversitySince1928另外3種：核衣殼蛋白NP、磷蛋白（P）、及大分子量蛋白（L）圍繞著病毒RNA形成核衣殼。目前研究證明，與APMV-1感染宿主范圍和毒力密切相關(guān)的主要是HN蛋白和F蛋白。GuangxiUniversitySince1928

新城疫病毒基因組結(jié)構(gòu)

GuangxiUniversitySince1928F蛋白的生物學(xué)功能

F蛋白是使病毒脂蛋白囊膜與宿主細(xì)胞表面包膜融合的主要因子，同時(shí)也是決定APMV-1毒力的主要決定因素。副粘病毒粒子吸附到宿主細(xì)胞后，在表面糖蛋白F的參與下將核衣殼送入胞漿中。GuangxiUniversitySince1928

激活融合（F）蛋白活性的先決條件是一個(gè)特異的裂解修飾過(guò)程。所有F蛋白首先是以無(wú)活性前體F0的形式存在，其在復(fù)制時(shí)需裂解成F1和F2后，病毒才具有感染性。這種翻譯后的裂解是由宿主細(xì)胞蛋白酶調(diào)理的。若裂解失敗，則產(chǎn)生非感染性的病毒顆粒。GuangxiUniversitySince1928HN蛋白的生物學(xué)功能HN蛋白主要負(fù)責(zé)病毒粒子趨向細(xì)胞，并與細(xì)胞受體（細(xì)胞膜上寡糖鏈末端的神經(jīng)氨酸）的結(jié)合，并使之破壞。HN與受體的結(jié)合還使F蛋白充分接近宿主細(xì)胞，從而促進(jìn)病毒與細(xì)胞的融合。GuangxiUniversitySince1928隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)APMV-1的變異主要發(fā)生在F基因和HN基因。對(duì)不同毒株F基因的序列分析表明，不同毒株F基因的序列有差異，而這種差異與毒株間的親源關(guān)系有關(guān)，即親源關(guān)系越近差異越小，反之差異越大。GuangxiUniversitySince1928不同來(lái)源和不同毒力株APMV-1F蛋白的差異主要集中在信號(hào)肽區(qū)（1位~25位殘基）和裂解位點(diǎn)區(qū)（112位~117位殘基）。GuangxiUniversitySince1928NP蛋白的生物學(xué)功能NP上分布了三類活性位點(diǎn):P蛋白結(jié)合位點(diǎn)、NP-NP相互結(jié)合位點(diǎn)、病毒基因組RNA結(jié)合位點(diǎn)。NP在病毒復(fù)制方面具有幾種功能：包裹基因組RNA，使之免受核酸酶分解；在RNA轉(zhuǎn)錄和復(fù)制過(guò)程中，與RNA多聚酶作用；在組裝病毒粒子時(shí)和M蛋白作用。GuangxiUniversitySince1928致病機(jī)理不同NDV毒株的致病性差異很大，影響病毒毒力的主要因素是F蛋白的前體F0能否被宿主細(xì)胞的蛋白酶有效地裂解。病毒的其它成分也與毒力有一定關(guān)系。GuangxiUniversitySince1928通過(guò)對(duì)大量NDV毒株的分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)0在裂解部位的氨基酸序列呈現(xiàn)明顯的規(guī)律性：強(qiáng)毒株為RRQK/RR↓F，弱毒株為GK/RQGR↓L。對(duì)強(qiáng)毒株來(lái)說(shuō)，由于裂解部位的堿性氨基酸數(shù)目較多，F(xiàn)0能夠被很多組織細(xì)胞的蛋白酶所識(shí)別，因此融合活性高。GuangxiUniversitySince1928而NDV弱毒株的F0在裂解部位由中性氨基酸替代了堿性氨基酸（尤其是112和115位氨基酸），不能被大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)的蛋白酶所識(shí)別，僅能被上呼吸道或雞胚尿囊液中分泌到細(xì)胞外的胰酶樣蛋白酶（trysine-likeproteinase）修飾，因此膜融合活性低。GuangxiUniversitySince1928在體外細(xì)胞培養(yǎng)物中，NDV弱毒株的F0不能被切割，因而不能產(chǎn)生融合性致病作用；加入外源性胰蛋白酶后，即可表現(xiàn)出致病性。GuangxiUniversitySince1928流行病學(xué)ND在世界上曾有過(guò)三次大流行：第一次是于1926年起源于東南亞，經(jīng)亞洲向歐洲緩慢運(yùn)動(dòng)，經(jīng)30年時(shí)間傳播到世界各地；第二次大流行于60年代末起源于中東，至1973年就已波及大多數(shù)國(guó)家。這次大流行之所以快，可能是因?yàn)轲B(yǎng)禽業(yè)已發(fā)生一次重大變革，已發(fā)展為一個(gè)具有巨大國(guó)際貿(mào)易的商業(yè)化產(chǎn)業(yè)。GuangxiUniversitySince1928第三次大流：該次大流行于70年代末起源于中東，到1981年傳至歐洲，然后傳至世界各地，賽鴿、觀賞鴿和食用鴿是主要的傳播者。給世界養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)了嚴(yán)重的損失。此后許多國(guó)家對(duì)進(jìn)口籠養(yǎng)鳥也加強(qiáng)了控制，但是鴿等新城疫的潛在威脅卻被人們所忽視，這正是導(dǎo)致ND第三次大流行的原因。GuangxiUniversitySince192890年代以來(lái)，雖然沒(méi)有出現(xiàn)世界性ND大流行，但局部地區(qū)的流行和暴發(fā)時(shí)常發(fā)生（如臺(tái)灣、西歐、南非等地）。雖然我國(guó)各地所有雞群對(duì)雞新城疫采取了強(qiáng)化的免疫預(yù)防措施，包括多次使用弱毒疫苗和滅活油乳苗，但雞新城疫仍在各地不同程度地流行。GuangxiUniversitySince1928在ND第三次大流行中，學(xué)者們對(duì)從病鴿分離的病毒進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)該病毒與雞NDV在病毒分類上均屬禽I型副粘病毒，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，前者是雞NDV長(zhǎng)期適應(yīng)鴿體內(nèi)環(huán)境，并發(fā)生了某些變異的結(jié)果，因此將之稱為鴿新城疫變異株。Alexader等為了和雞新城疫相區(qū)別，將鴿新城疫獨(dú)立出來(lái)并將其命名鴿禽I型副粘病毒病，該病病原稱為鴿禽I型副粘病毒（pigeonparamyxovirustype1,PPMV-1）。GuangxiUniversitySince19281985年，PPMV-1傳入香港，有57個(gè)鴿場(chǎng)暴發(fā)該病。1985年8月，我國(guó)珠海拱北動(dòng)物檢疫局從臺(tái)灣引進(jìn)種鴿中檢出PPMV-1，同年底，深圳某鴿場(chǎng)由于從香港引入種鴿導(dǎo)致暴發(fā)鴿禽I型副粘病毒病。從此以后，本病在廣東不斷擴(kuò)展，并向周邊省份蔓延。目前，我國(guó)華南、華東、華北地區(qū)大部分省份都有該病的流行和發(fā)生。GuangxiUniversitySince1928新城疫病毒很少感染鵝，即使感染也不表現(xiàn)臨床癥狀。任濤等曾用國(guó)內(nèi)NDV標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株F48E8攻擊28日齡的鵝，發(fā)現(xiàn)其對(duì)鵝的發(fā)病率和死亡率均為0。Rosenberger和Shortridge等分別在加拿大、香港等地從健康鴨、鵝等水禽體內(nèi)分離到NDV毒株，它們均屬于弱毒株，且不會(huì)使水禽感染發(fā)病。GuangxiUniversitySince19281997年，王永坤等在江蘇鵝群中發(fā)現(xiàn)一種鵝的烈性傳染病，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明該病病原為禽Ⅰ型副粘病毒強(qiáng)毒株。任濤等也在廣東分離到感染鵝的禽Ⅰ型副粘病毒強(qiáng)毒株。GuangxiUniversitySince1928研究證明，禽Ⅰ型副粘病毒的發(fā)病和流行不僅僅限于在雞，同時(shí)，也在鴿和鵝等禽類發(fā)病和流行，目前還有鴨發(fā)生禽Ⅰ型副粘病毒病的報(bào)道。我們實(shí)驗(yàn)室從臨床發(fā)病的鴨最近分離到2株APMV-1，經(jīng)毒力測(cè)定為對(duì)中等毒力的毒株。GuangxiUniversitySince1928臨床癥狀及病變

發(fā)病鵪鶉表現(xiàn)羽毛松亂、扭頸、肢體麻痹和角弓反張等神經(jīng)癥狀；病死的鵪鶉則缺乏新城疫的典型病理變化。發(fā)病鴿子表現(xiàn)精神不振，拉黃綠色稀糞；部分病鴿出現(xiàn)震顫、呆立、單側(cè)或雙側(cè)翅膀麻痹、頭頸扭曲、轉(zhuǎn)圈和昏迷倒地等神經(jīng)癥狀。病死后主要的病理變化為胰腺有白色壞死點(diǎn)，脾臟出血或有白色壞死點(diǎn)，直腸和泄殖腔彌漫性出血在自然發(fā)生的家禽新城疫病例中，由于年齡、品種以及感染毒株不同，病理變化的差異極大：輕癥病例出現(xiàn)氣囊炎和肺充血，伴有呼吸道的非特異性病變。重癥病例發(fā)生時(shí)，病毒從呼吸道或消化道侵入，先在局部繁殖，然后迅速經(jīng)血流擴(kuò)散到全身，引起敗血癥。GuangxiUniversitySince1928病毒損傷血管壁，引起出血、漿液滲出和壞死變化，由此產(chǎn)生嚴(yán)重的消化功能紊亂；由于循環(huán)障礙引起肺充血和呼吸中樞擾亂，出現(xiàn)呼吸困難。病毒破壞全身淋巴組織，胸腺、法氏囊和脾臟受害嚴(yán)重，造成免疫抑制。在慢性病例，病毒存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)和骨髓中，引起腦脊髓炎變化，出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。GuangxiUniversitySince1928腸道病變部位

Necrosisandhemorrhageinintestinallymphoidaggregatesevidentfromthe:

serosalsurfac(E)andmucosalsurface(F).Enlargedandnecroticcecaltonsils(DiseaseofPoultry10thEdition)Peritonitiswithfibrindeposition(DiseaseofPoultry,10thEdition)病死鵝胰臟有大量的壞死灶Ovarianfollicleswithhemorrhagicstigmata.(DiseaseofPoultry,10thEdition)Splenicnecrosisonthecapsularsurface(C)andcutsurfac(D).GuangxiUniversitySince1928診斷傳統(tǒng)禽Ⅰ型副粘病毒病的診斷方法急性的禽I型副粘病毒病，通常根據(jù)病史、臨床癥狀和尸體解剖即可做出初步診斷。但雞的慢性NDV易與其它呼吸道疾?。ㄈ鐐魅拘灾夤苎?、傳染性喉氣管炎等）混淆，較難作出診斷，所以必須進(jìn)行病毒分離和血清學(xué)診斷。GuangxiUniversitySince1928但NDV普遍存在緩發(fā)型毒株（包括野生型及接種的疫苗株），因而即使分離出NDV，也不能確診，還要作病毒特性的鑒定——致病性試驗(yàn)。目前國(guó)際上采用三項(xiàng)體內(nèi)試驗(yàn)：雞胚平均致死時(shí)間（MDT），1日齡雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)（ICPI），6周齡雞靜脈接種致病指數(shù)（IVPI）。GuangxiUniversitySince1928但是，這些試驗(yàn)費(fèi)時(shí)（需5天左右）、費(fèi)錢（需用SPF雞作試驗(yàn)），又煩瑣，往往延誤了控制疾病的時(shí)機(jī)；血清學(xué)方法包括血凝試驗(yàn)、雞胚中和及蝕斑中和試驗(yàn)等。但是，這些方法不能鑒別新城疫各個(gè)毒株。所以，血清中出現(xiàn)特異性抗體不能反映感染毒株的情況，診斷意義不大。GuangxiUniversitySince1928對(duì)于鴿禽I型副粘病毒和鵝副粘病毒的診斷也應(yīng)進(jìn)行病毒分離和病毒特性鑒定，但由于鴿的MDT、ICPI、IVPI這三項(xiàng)指標(biāo)不穩(wěn)定，往往難于作出確診。GuangxiUniversitySince1928單克隆抗體可以檢測(cè)抗原性的微小差異。因此，不但可以檢測(cè)毒株間的差異，而且可以檢測(cè)病毒亞群間的差異。因此，單克隆抗體除用于常規(guī)診斷外，還可用于對(duì)病毒分離株的鑒定和歸類。例如已報(bào)道了用于區(qū)分常規(guī)疫苗株HitcherB1和LaSota的2組單抗，其它一些單抗可區(qū)分疫苗株和某一地區(qū)的流行毒株。GuangxiUniversitySince1928我國(guó)嚴(yán)維巍等也用單抗的方法將基因Ⅶ型的鵝源APMV-1和雞源F48E8、LaSota區(qū)分開來(lái)。Alexander用直接針對(duì)NDVUlster2CHN1位點(diǎn)的單抗不能抑制PPMV-1的血凝活性，據(jù)此可快速鑒別PPMV-1和大部分其它禽源APMV-1。GuangxiUniversitySince1928后來(lái)，Alexander用9株針對(duì)NDVUlster2CHN1位點(diǎn)的單抗通過(guò)間接免疫酶聯(lián)試驗(yàn)檢測(cè)了來(lái)自15個(gè)國(guó)家的57株P(guān)PMV-1，結(jié)果有53株僅與481、38和479三株單抗反應(yīng)。因此將PPMV-1在APMV-1分類上歸為一個(gè)特殊的組—P組。GuangxiUniversitySince1928單抗技術(shù)為區(qū)分禽副粘病毒I型的抗原差異提供了一種新的方法。但有但有鑒別意義的單抗制備較困難，目前尚無(wú)商品供應(yīng)，因此應(yīng)用也受限制。由于傳統(tǒng)的診斷方法在特異、敏感、快速、實(shí)用、安全方面均存在一些缺陷，人們把目光瞄準(zhǔn)了新興的分子生物學(xué)技術(shù)。GuangxiUniversitySince1928

RT-PCR技術(shù)及其應(yīng)用于禽副粘病毒Ⅰ型強(qiáng)弱毒株鑒別診斷的分子生物學(xué)基礎(chǔ)

1991年，Jestin等首先將聚合酶鏈反應(yīng)（PolymeraseChainReactionPCR）技術(shù)應(yīng)用于NDV的檢測(cè)與診斷。逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)（ReverseTranscriptaseChainReactionRT-PCR）技術(shù)是在PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的。GuangxiUniversitySince1928

RT-PCR技術(shù)應(yīng)用于NDV鑒別的主要根據(jù)是NDV強(qiáng)弱毒株在F基因上的差別。F糖蛋白在決定NDV的致病力方面起著決定性的作用，它負(fù)責(zé)病毒囊膜與宿主細(xì)胞融合，以使病毒穿過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入宿主細(xì)胞，發(fā)生感染作用。GuangxiUniversitySince1928F蛋白首先以惰性前體F0的形式合成，經(jīng)宿主細(xì)胞蛋白酶裂解產(chǎn)生二硫鍵連接的F1和F2兩個(gè)亞基之后才具有融合活性。水解位點(diǎn)位于距F0蛋白氨基端116個(gè)氨基酸處，也就是在第394位核苷酸處（因?yàn)榈?—46位核苷酸不編碼氨基酸）。不同種屬的副粘病毒，甚至同種內(nèi)的不同毒株，在F0蛋白水解位點(diǎn)的精氨酸、賴氨酸的數(shù)量和距離都各不相同，兩氨基酸成對(duì)則標(biāo)志著易于水解，致病性強(qiáng)。GuangxiUniversitySince1928不同種屬的副粘病毒，甚至同種內(nèi)的不同毒株，在F0蛋白水解位點(diǎn)的精氨酸、賴氨酸的數(shù)量和距離都各不相同，兩氨基酸成對(duì)則標(biāo)志著易于水解，致病性強(qiáng)。Collins等根據(jù)17株NDVF基因的核苷酸序列推測(cè)出F0前體的氨基酸序列，加上以前報(bào)道的9株NDV病毒的序列，對(duì)其中11株弱毒株和15株速發(fā)型或中發(fā)型毒株進(jìn)行比較，GuangxiUniversitySince1928結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有病毒F2蛋白C端裂解位點(diǎn)的第116位氨基酸為精氨酸，弱毒株F1蛋白N端第117位為亮氨酸，第113位為另一個(gè)堿性氨基酸，故在這些毒株裂解位點(diǎn)僅有兩個(gè)單個(gè)的堿性氨基酸，所以僅被存在于宿主少數(shù)組織器官（如呼吸道和消化道上皮）的細(xì)胞的類胰蛋白酶（trypsin-likeenzyme）所識(shí)別和裂解。GuangxiUniversitySince1928相對(duì)而言，所有速發(fā)型或中發(fā)型毒株的第117位為苯丙氨酸，（只有一株例外），除第113位和116位外，第115位和第112位均為堿性氨基酸，因此形成了第112-113和第115-116位兩對(duì)堿性氨基酸的序列。這意味著強(qiáng)毒株能被廣泛存在宿主各組織器官的細(xì)胞的多種蛋白酶所識(shí)別和裂解，因而能廣泛地感染，即全身感染，致病力也就更強(qiáng)。GuangxiUniversitySince1928因此，雞NDV的毒力強(qiáng)弱可根據(jù)病毒在F基因裂解位點(diǎn)附近的氨基酸構(gòu)成來(lái)確定。中外學(xué)者的研究也證明鴿禽I型副粘病毒和鵝副粘病毒的毒力也可以用此方法來(lái)確定。各種禽源I型副粘病毒不同毒力株F基因序列上的差異正是分子生物學(xué)方法鑒別其毒力的引物的靶。GuangxiUniversitySince1928

從組織勻漿提取RNA用RT-PCR鑒別診斷APMV-1

1994年，Jestin等首先從組織勻漿提取RNA，直接用RT-PCR技術(shù)進(jìn)行NDV的檢測(cè)。但他們并不能用RT-PCR來(lái)鑒別強(qiáng)弱毒株。1997年Kant等對(duì)Jestin的方法進(jìn)行了改進(jìn)。GuangxiUniversitySince1928他們合成了四個(gè)寡核苷酸片斷A、B、C、和D，其中A與F基因的第141—159位堿基互補(bǔ)；B與F基因的第485—503位堿基互補(bǔ)；C和D都與395—380位堿基互補(bǔ)。GuangxiUniversitySince1928A和B組成一個(gè)引物對(duì)，用于檢測(cè)所有的NDV毒株；引物對(duì)A+C用于檢測(cè)致病性的NDV毒株；引物對(duì)A+D則檢測(cè)無(wú)致性的NDV毒株。為了證明PCR產(chǎn)物的特異性，他們還設(shè)計(jì)了兩個(gè)探針L和M（如表1）。GuangxiUniversitySince1928曹殿軍等建立了一種既可從感染雞胚尿囊液又可從組織勻漿檢測(cè)雞NDV并鑒別其毒力的RT-PCR方法，但他們沒(méi)有報(bào)道能檢測(cè)其它禽源的APMV-1。GuangxiUniversitySince19282000年，Kho等用逆轉(zhuǎn)錄-巢式聚合酶鏈反應(yīng)（RT-nestPCR）結(jié)合酶聯(lián)免疫分析技術(shù)代替RT-PCR和電泳技術(shù)，提高了雞NDV的檢出率和減少了所需的時(shí)間。他們發(fā)現(xiàn)該方法比電泳的方法分辨率高10倍，巢式PCR的方法比PCR的方法敏感100倍。遺憾的是，盡管他們的方法能檢出所有APMV-1毒株，但卻不能鑒別其毒力。GuangxiUniversitySince1928我們實(shí)驗(yàn)室依據(jù)APMV-1的融合蛋白（F）基因裂解位點(diǎn)的核苷酸序列與其毒力的相關(guān)規(guī)律，分別設(shè)計(jì)合成了四條寡核苷酸引物，建立了一個(gè)可迅速檢測(cè)不同禽源禽I型副粘病毒并可鑒定強(qiáng)、弱毒株的逆轉(zhuǎn)錄酶—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）技術(shù)。GuangxiUniversitySince1928建立的方法能從組織勻漿中直接提取病毒RNA，只用一個(gè)反應(yīng)即可檢測(cè)不同禽源分離的APMV-1毒株并可區(qū)分強(qiáng)弱毒。我們對(duì)多重PCR反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，由于本試驗(yàn)中PCR產(chǎn)物的分子量相差不大，分別為362bp,254bp和123bp，只要通過(guò)對(duì)引物用量和PCR條件進(jìn)行優(yōu)化，最終保證三種產(chǎn)物的量相對(duì)平衡。GuangxiUniversitySince1928所以，我們所設(shè)計(jì)的多重PCR可在一個(gè)反應(yīng)內(nèi)同時(shí)檢測(cè)出APMV-1強(qiáng)毒（PCR產(chǎn)物為362bp和254bp兩條帶）和弱毒（PCR產(chǎn)物為362bp和123bp兩條帶）。在研究的過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)本方法還可以檢測(cè)不同禽源的APMV-1毒株，臨床可疑樣品的陽(yáng)性檢出率為80.6%（近500份病例）。GuangxiUniversitySince1928我們建立的多重PCR方法能從病料組織勻漿直接提取病毒RNA，進(jìn)行一個(gè)RT-PCR反應(yīng)即可檢測(cè)出APMV-1的存在與否，并判斷出是強(qiáng)毒或弱毒，或強(qiáng)、弱毒混合感染，僅需8小時(shí)即可完成全過(guò)程。本方法特異性高，靈敏度高，操作快捷、簡(jiǎn)便，可以滿足臨床診斷和獸醫(yī)檢疫的需要。GuangxiUniversitySince1928防治目前大多數(shù)國(guó)家都采用預(yù)防接種作為控制新城疫的主要措施。根據(jù)具體情況，不同國(guó)家制備和應(yīng)用各種不同的弱毒疫苗以及滅活疫苗。基因工程苗尚處在研究和開發(fā)階段，還沒(méi)有很大的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。GuangxiUniversitySince1928活疫苗弱毒疫苗：

Bl株（II系疫苗）F株（III系苗）LaSota株及C30株（IV系苗）V4株（無(wú)毒力、腸道株）中等毒力疫苗：

Mukteswar（I系苗）GuangxiUniversitySince1928優(yōu)點(diǎn)：活疫苗毒力低，適用于幼雛作鼻內(nèi)/或眼內(nèi)滴注或作氣霧免疫，也可混合飲水服用，免疫后抗體產(chǎn)生快。缺點(diǎn)：效價(jià)低，對(duì)呼吸道有應(yīng)激作用，中毒活疫苗對(duì)幼雛具有一定的致病性。GuangxiUniversitySince1928滅活油乳劑疫苗

滅活苗具有安全、易于貯存、免疫雞副反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn)。此外，可用兩種或者多種抗原一起乳化制成二聯(lián)或多聯(lián)疫苗，減少勞動(dòng)力。生產(chǎn)該類疫苗的毒種包括F48E8、分離株、LaSota、C30等。GuangxiUniversitySince1928防制1、雞群帶毒比較普遍。

因此，通過(guò)加強(qiáng)免疫，使雞群保持高水平的免疫力（包括全身和局部免疫）尤為關(guān)鍵。發(fā)生AI后易繼發(fā)。2、免疫時(shí)，活苗和滅活苗配合使用。3、注意預(yù)防免疫抑制性病的侵害。

最常見的是：IBD、真菌毒素中毒、腫瘤病。GuangxiUniversitySince1928新城疫的免疫免疫依賴：母源抗體（種雞的免疫）雛雞的免疫（活疫苗）第一次免疫：剛出殼在孵房噴霧或者

1-2天點(diǎn)眼＋滴鼻免疫（不能飲水）

新-支（H120或者M(jìn)A5）二聯(lián)）

第二次免疫：10~12天齡，點(diǎn)眼＋滴鼻（不能飲水）與禽流感一起進(jìn)行油苗的免疫第三次免疫：25-30d后與禽流感一起進(jìn)行油苗的免疫GuangxiUniversitySince1928種雞的免疫一般開產(chǎn)前免疫油苗4次：

第三次免疫：90-100d，H5

第四次免疫：開產(chǎn)前10d，H5＋H9

生產(chǎn)高峰后：補(bǔ)一次H5＋H9GuangxiUniversitySince1928近年來(lái)我國(guó)傳染性支氣管炎流行、病原變異以及防控的策略

GuangxiUniversitySince1928背景:IBVs相關(guān)的問(wèn)題冠狀病毒的代表成員GuangxiUniversitySince1928原發(fā)感染:

導(dǎo)致機(jī)體廣泛部位的上皮細(xì)胞損傷(Cavanagh,2003)GuangxiUniversitySince1928氣管炎癥：呼吸道問(wèn)題如呼吸困難、羅音、咳嗽、打噴嚏、流鼻涕等等。腎病變：

腫大并在腎小管和輸尿管有尿酸鹽沉著輸卵管病變：蛋產(chǎn)量和質(zhì)量下降假母雞：輸卵管萎縮、堵塞腸道感染：炎癥腹瀉消化、吸收障礙腸道細(xì)菌的感染：腸炎飼料轉(zhuǎn)化率下降GuangxiUniversitySince1928繼發(fā)感染:促進(jìn)細(xì)菌/支原體等的感染。

如氣囊炎、心包炎、腹膜炎等。GuangxiUniversitySince1928鑒別診斷

ILTGuangxiUniversitySince1928廣西IBV的研究及主要發(fā)現(xiàn)：1985-2013期間從臨床已免疫但仍然發(fā)生疑似IBV感染的雞群舉行病毒分離；對(duì)所有分離株舉行基因序列的測(cè)定和分析（其中已完成全基因測(cè)定4株，其他的重要基因S1也完成測(cè)定）；對(duì)這些病毒的抗原性進(jìn)行研究；生產(chǎn)免疫情況的檢測(cè)。GuangxiUniversitySince1928AAAA1a1bS3a3bEM5a5bN3’UTR5’UTRS1S2RRSRR/RRFRRFigure1.ClassicalGenomeOrganizationofIBVSignalPeptideTransmembranedomainRibosomalFrameshift◆◆◆◆◆◆●LS◆TRS●●nsp(1-16)GuangxiUniversitySince1928廣西60個(gè)分離株GuangxiUniversitySince1928YearsIsolates1985~1988GX-CGX-GGX-XD2004~2005GX-NN3GX-NN1GX-NN2GX-NN4GX-NN5GX-NN6GX-YL1GX-YL3GX-YL4GX-YL52006~2008GX-NN7GX-NN8GX-NN9GX-NN10GX-NN11GX-NN12GX-YL2GX-YL6GX-YL7GX-YL8GX-YL9GX-LZ1GX-GL12009~2012GX-LC1124GX-NN1009GX-NN1014GX-NN1012GX-NN1013GX-NN1011GX-GLGX-YL1121GX-YL0902GX-NN1019GD-KP1033GX-NN09093GX-QZ09094GX-YL1002GX-HC1006GX-GL2GX-NN110034GX-NN110033GX-NN09032GX-NN-4GX-NN-5GX-NN-6GX-NN-8GX-NN-9GX-NN-11GX-NN-12GX-NN-13GX-NN-14GX-NN-15GX-GL11077GX-GL11078GX-GL11079GX-YL11072GX-YL11073結(jié)果1PhylogenetictreebasedonthededucedaminoacidsequencesofS1genesofGuangxiIBVisolatesandreferenceIBVstrains

(1985-2008,

2009-2012)ⅠⅡⅢⅣ

Ⅴ

VIGuangxiUniversitySince1928S1分型結(jié)果Mass-type毒株只占廣西分離毒株的小部分，包括當(dāng)前優(yōu)勢(shì)基因型LX4-type在內(nèi)的大部分基因型分離毒株與Mass-type毒株間遺傳進(jìn)化距離均比較遠(yuǎn)。2009-2011年間分離到的毒株中的大部分毒株屬于LX4基因型，1985-2008年間分離株有一半以上毒株屬于另一種廣西獨(dú)特基因型。而且近年還有新的基因型不斷出現(xiàn)。GuangxiUniversitySince1928PhylogenetictreebasedonthededucedaminoacidsequencesofNgenesofGuangxiIBVisolatesandreferenceIBVstrains

(1985-2008,

2009-2012)ABCDEGuangxiUniversitySince1928IBV分離株的血清