雜環(huán)類藥物分析3課件

第七章

雜環(huán)類藥物分析第三節(jié)

苯并二氮雜卓類藥物的分析基本母核：為苯環(huán)與七元含氮雜環(huán)稠合而成的有機藥物，其中1,4-苯并二氮雜卓類藥物是目前臨床應(yīng)用最廣泛的抗焦慮、抗驚厥藥。一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)、分析方法的關(guān)系典型藥物

氯氮卓(chlordiazepoxide)第一個苯二氮雜卓類藥物典型藥物地西泮(diazepam)

具有1,4-苯并二氮雜卓-2-酮的結(jié)構(gòu)七元亞胺內(nèi)酰胺環(huán)奧沙西泮

(oxazepam)典型藥物為地西泮的活性代謝產(chǎn)物艾司唑侖（estazolam）溶解性：地西泮：丙酮或三氯甲烷中易溶，在乙醇中溶解水中幾乎不溶。艾司唑侖在醋酐或三氯甲烷中易溶，在甲醇中溶解在水中幾乎不溶。弱堿性：二氮雜卓七元環(huán)上的氮原子堿性如何？具有強堿性但與苯基并合后，其堿性降低可采用非水溶液滴定法測定含量。與生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)水解性：藥物的環(huán)通常較穩(wěn)定，但的確存在開環(huán)的情況那么如何水解？在強酸性溶液中可水解，形成相應(yīng)的二苯甲酮衍生物水解產(chǎn)物所呈現(xiàn)的某些特性可供鑒別二、鑒別試驗（一）與生物堿沉淀試劑反應(yīng)與碘化鉍鉀試液反應(yīng)，生成橙紅色沉淀地西泮注射液

氯氮卓

橙紅色沉淀阿普唑侖

鹽酸氟西泮＋KBiI4

也生成橙紅色沉淀氯硝西泮（碘化鉍鉀）放置后，沉淀顏色變深

因此可以相互區(qū)別。鑒別試驗（一）與生物堿沉淀試劑反應(yīng)與碘化鉍鉀試液反應(yīng)，生成橙紅色沉淀苯并二氮雜卓類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯示不同顏色的熒光。地西泮為黃綠色、硝西泮顯淡藍色、氯氮卓為黃色、艾司唑侖顯亮綠色苯并二氮雜卓類藥物溶于稀硫酸，在紫外光（365nm）下，顯示不同顏色的熒光地西泮為黃色、硝西泮為藍綠色、奧沙西泮為淡黃綠色、氯氮卓為紫色、艾司唑侖為天藍色。（三）水解后芳香第一胺反應(yīng)誰水解后會產(chǎn)生芳香第一胺？氯氮卓、艾司唑侖和奧沙西泮等藥物1位氮未被取代，水解后生成含芳伯氨基的產(chǎn)物地西泮1位氮被取代，水解后不生成含芳伯氨基的產(chǎn)物水解后呈芳伯胺反應(yīng)

氯氮卓和奧沙西泮加亞硝酸鈉和堿性萘酚，生成橙紅色沉淀，其反應(yīng)如下：地西泮中國藥典——艾司唑侖及其片劑艾司唑侖的鑒別方法：取本品約10mg，加鹽酸溶液(1→2)15ml，緩緩煮沸15分鐘，放冷，加亞硝酸鈉和堿性β-萘酚試液，生成橙紅沉淀

（四）分解后氯化物反應(yīng)有機氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，生成氯化氫，可顯氯化物反應(yīng)中國藥典（2010年版）地西泮地西泮的紫外鑒別方法：取本品，加0.5％硫酸的甲醇溶液制成每1ml中含5μg的溶液，照分光光度法測定，在242nm、284nm與366nm的波長處有最大吸收；在242nm波長處的吸光度約為0.51，在284nm波長處的吸光度約為0.23。（六）紅外吸收光譜法三、雜質(zhì)檢查有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)生產(chǎn)或貯藏過程中引入的中間體、副產(chǎn)物和分解產(chǎn)物藥典方法：薄層色譜法或高效液相色譜法檢查方法是？實例：地西泮的【有關(guān)物質(zhì)】

雜質(zhì)：地西泮中雜質(zhì)主要為合成中間體與分解產(chǎn)物（去甲基安定、2-甲氨基-5-氯二苯甲酮）以及某些化學(xué)結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)物質(zhì)原料藥物：檢查方法——高效液相色譜法地西泮片：檢查方法——薄層色譜法例：地西泮片 檢查方法：取本品，加丙酮制成每1ml中含100mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加丙酮稀釋成每1ml中含0.3mg的溶液，作為對照溶液。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠GF254

薄層板上，以醋酸乙酯－己烷(1:1)為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點，與對照溶液的主斑點比較，不得更深。TLC—自身稀釋法地西泮片中有關(guān)物質(zhì)的檢查幾乎所有的藥物均進行有關(guān)物質(zhì)檢查中國藥典（2005年版）地西泮及其片劑、注射液艾司唑侖及其片劑、注射液方法：高低濃度對比法四、含量測定含量測定方法非水溶液滴定法、紫外分光光度法、比色法、熒光法、色譜法等能否將上述方法與藥物的理化性質(zhì)進行聯(lián)系？中國藥典（2010年版）收載的主要方法為非水溶液滴定法、分光光度法及色譜法非水溶液滴定法地西泮、艾司唑侖原料藥采用非水滴定法測定含量

（一）非水溶液滴定法

堿性較弱，不能用酸堿滴定法進行含量測定，但在冰醋酸、醋酐等酸性溶液中藥物的堿性增強，可用高氯酸做滴定液，采用非水溶液滴定法測定含量。因藥物結(jié)構(gòu)和堿性強弱不同，故測定時采用的溶劑、指示劑及終點顏色也有所不同典型苯并二氮雜卓類藥物的高氯酸非水溶液滴定法地西泮原料藥含量測定用非水堿量法（分子中含有堿性氮原子）溶劑：冰醋酸－醋酐指示劑：結(jié)晶紫滴定液：0.1mol/l高氯酸滴定液終點：溶液顯綠色T=28.47mg（二）紫外分光光度法中國藥典原料藥:只有奧沙西泮原料藥制劑：多數(shù)藥物的片劑含量均勻度、片劑溶出度的測定均采用紫外分光光度法。地西泮片取20片，研細，稱約10mg，用0.5％硫酸－甲醇溶液溶解，稀釋成100ml，過濾，取濾液10ml，稀釋成100ml，在284nm波長處測定吸收度A，已知

=454。（三）高效液相色譜法本法優(yōu)點：有效地分離、測定苯并二氮雜卓類藥物及其分解產(chǎn)物中國藥典（2010年版）地西泮、艾司唑侖注射液反相高效液相色譜法固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）流動相系統(tǒng)：水-甲醇或水-乙腈系統(tǒng)堿性試劑有二乙胺、三乙胺等堿性試劑有二乙胺、三乙胺等分析堿性雜環(huán)類藥物時，由于硅膠表面硅醇基與堿性藥物發(fā)生吸附或離子交換作用，使堿性藥物色譜峰拖尾，保留時間過長，甚至無法洗脫。在流動相中加入堿性試劑，調(diào)節(jié)流動相的pH在7~8左右，可以改善分離效能pH范圍為2~8實例分析：地西泮注射液含量測定

詳見教材

含量測定小結(jié)非水堿量法：地西泮、艾司唑侖原料藥紫外分光光度法：奧沙西泮原料藥，多數(shù)藥物的片劑含量均勻度、片劑溶出度的測定高效液相色譜法：地西泮注射液、艾司唑侖注射液小結(jié)第一節(jié)吡啶類藥物的分析第二節(jié)吩噻嗪類藥物的分析第三節(jié)苯并二氮雜卓類藥物的分析鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測定9.中國藥典(2010年版)中地西泮原料藥中有關(guān)雜質(zhì)的檢查法為A.TLCB.HPLCC.GCD.沉淀法E.顯色法

10.檢查鹽酸氯丙嗪中“有關(guān)物質(zhì)”時，采用的對照溶液為A.雜質(zhì)的標準溶液B.標準“有關(guān)物質(zhì)”溶液C.供試品溶液D.供試液的稀釋溶液E.對照溶液

11.硫酸—熒光反應(yīng)為地西泮的特征鑒別反應(yīng)之一。地西泮加硫酸溶解后，在紫外光下顯A.紅色熒光B.橙色熒光C.黃綠色熒光D.淡藍色熒光E.紫色熒色

13.某藥物經(jīng)酸水解后可用重氮化—偶合反應(yīng)鑒別，此藥物是A.鹽酸氯丙嗪B.氯氮卓C.地西泮D.醋酸氫化可的松E.維生素C

14.采用紫外分光光度法測定含量的原料是（）A地西泮B奧沙西泮C艾司唑侖D氯氮卓第四節(jié)喹諾酮類藥物的分析

喹諾酮類藥物是一類化學(xué)合成抗菌藥，由于具有抗菌譜廣、抗菌作用強、使用安全及易于制造等優(yōu)點，發(fā)展迅速。具有4-吡啶酮-3羧酸的基本結(jié)構(gòu)12345678

典型藥物的結(jié)構(gòu)吡哌酸

典型藥物的結(jié)構(gòu)諾氟沙星1-乙基-6-氟-4-氧代-1.4-二氫-7-（1-哌嗪基）-3-喹啉羧酸環(huán)丙沙星

典型藥物的結(jié)構(gòu)1-環(huán)丙基-6-氟-1.4-二氫-4-氧-7-（1-哌嗪基）-3-喹啉羧酸氧氟沙星

典型藥物的結(jié)構(gòu)

二、主要化學(xué)性質(zhì)（1）酸堿兩性本類藥物因含有酸性的羧基和堿性的哌嗪基，呈酸堿兩性易溶于醋酸、鹽酸和氫氧化鈉溶液中。（2）還原性分子結(jié)構(gòu)中的哌嗪基具有還原性，遇光易氧化，顏色逐漸變深。（3）紫外吸收分子中具有共軛體系，可產(chǎn)生紫外吸收，用于鑒別和含量測定。（4）與金屬離子反應(yīng)

結(jié)構(gòu)中3、4位為羧基和酮羰基的喹諾酮類藥物，極易和金屬離子，如鈣、鎂、鐵和鋅等形成螯合物，降低藥物的抗菌活性。這類藥物不宜和牛奶等含鈣和鐵離子的食物和藥物同時服用。同時長時間會使體內(nèi)的金屬離子流失，尤其對婦女、老人和兒童缺鈣、缺鋅和貧血等副作用。三．鑒別試驗（1）N1為叔胺基（丙二酸反應(yīng)）

（2）F6顯有機氟化物的性質(zhì)（氟元素反應(yīng)）

（3）紫外吸收特征：4g/mL本品的0.04％NaOH溶液，λmax＝273nm、λmax＝333nm（4）采用紅外光譜、薄層色譜、HPLC鑒別三、有關(guān)物質(zhì)的檢查

1.來源：生產(chǎn)過程中和貯藏過程中引入的

2.方法：高效液相色譜法

五含量測定

高效液相色譜法非水溶液滴定法紫外分光光度法

酸堿滴定法（一）非水溶液滴定法

喹諾酮類藥物具有酸堿兩性，且大部分藥物具有疏水性，水溶性較差，不能在水溶液中直接滴定。用非水溶液將供試品溶解，在溶劑的作用下增強了弱堿（酸）的強度，從而在非水溶液中能進行滴定，其中以堿量法最常用。喹諾酮類藥物能不能用非水酸量法進行含量測定？

亦可在二甲基甲酰胺溶液中，以麝香草酚酞為指示劑用甲醇鈉標準溶液滴定。但由于受空氣中的二氧化碳的影響較大，甲醇鈉標準溶液不夠穩(wěn)定且甲醇毒性大，故實際應(yīng)用較少。（二）紫外分光光度法

喹諾酮類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有共軛體系，在紫外區(qū)有特征吸收，可利用紫外分光光度法進行含量測定。（三）高效液相色譜法

——諾氟沙星第五節(jié)咪唑類藥物的分析基本結(jié)構(gòu)咪唑環(huán)典型藥物結(jié)構(gòu)甲硝唑典型藥物結(jié)構(gòu)阿苯達唑典型藥物結(jié)構(gòu)替硝唑（二）主要化學(xué)性質(zhì)（一）堿性

咪唑環(huán)顯堿性，在酸性條件下能與某些生物堿沉淀劑發(fā)生反應(yīng)，生成有色沉淀，可供鑒別。另外，根據(jù)其堿性，可用非水溶液滴定法進行含量測定（二）顯色反應(yīng)

某些藥物在酸堿溶液中加熱時呈不同顏色可用于鑒別。含硫的藥物，可用醋酸鉛試紙鑒別硫元素的存在（三）紫外吸收特征

咪唑環(huán)具有共軛體系，在一定的紫外光區(qū)有特征吸收，可供鑒別和含量測定。（三）鑒別試驗（一）沉淀反應(yīng)咪唑環(huán)顯堿性，在酸性條件下能與某些生物堿沉淀劑如碘化鉍鉀、三硝基苯酚生成有色沉淀，可供鑒別。甲硝唑+三硝基苯酚

3%的硫酸溶液黃色沉淀（二）顯色反應(yīng)甲硝唑氫氧化鈉試液微熱紫紅色溶液稀鹽酸黃色過量的氫氧化鈉試液橙紅色（三）硫元素反應(yīng)阿苯達唑加熱濕潤醋酸鉛試紙變黑替硝唑加熱熔融濕潤硝酸亞汞試紙變黑（四）紫外分光光度法具有共軛體系，有紫外吸收特征，通過測定其最大最小吸收波長，進行鑒別。（五）紅外分光光度法（四）雜質(zhì)檢查（一）高效液相色譜法

甲硝唑中的2-甲基-5-硝基咪唑替硝唑中的有關(guān)物質(zhì)（二）薄層色譜法

阿苯達唑中有關(guān)物質(zhì)（五）含量測定（一）非水溶液滴定法

甲硝唑和阿苯達唑的原料藥甲硝唑栓（二）紫外分光光度法

甲硝唑的制劑（片劑、注射劑、膠囊）阿苯達唑的制劑（片劑、膠囊、顆粒）性質(zhì)：1.堿性：

叔胺氮原子，堿性較強，可與酸成鹽。2.水解性：

酯健易水解，生成莨菪酸3.生物堿沉淀反應(yīng)：

可與生物堿沉淀試劑反應(yīng)。4.旋光性：氫溴酸山莨菪堿為左旋體；硫酸阿托品為外消旋體，無旋光性。5.Vitali反應(yīng)：酯鍵水解后生成莨菪酸，與發(fā)煙硝酸反應(yīng)生成黃色三硝基衍生物，遇醇制氫氧化鉀即顯深紫色。Vitali反應(yīng)是托烷類生物堿的特征鑒別反應(yīng)。二、鑒別試驗藥典附錄中收載：Vitali反應(yīng)(托烷生物堿的鑒別）：取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘渣，放冷，加乙醇2～3滴濕潤，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。為硫酸阿托品和氫溴酸山莨菪堿的共有的鑒別反應(yīng)。1.硫酸阿托品的鑒別（1）紅外光譜法（2）Vitali反應(yīng)（3）硫酸鹽的反應(yīng)2.氫溴酸山莨菪堿的鑒別（1）紅外光譜法（2）Vitali反應(yīng)（3）溴化物的鑒別反應(yīng)三、有關(guān)物質(zhì)的檢查

托烷類生物堿結(jié)構(gòu)復(fù)雜，在制備過程中可能帶入某些雜質(zhì)，故藥典規(guī)定檢查酸度、其他生物堿等

1.硫酸阿托品中有關(guān)物質(zhì)的檢查（1）莨菪堿：生產(chǎn)過程中消旋化不完全引入的，其毒性大，具有旋光性，用旋光度法檢查：旋光度不得過－0.40°（2）其他生物堿：如東莨菪堿、山莨菪堿等的堿性較弱，在阿托品的鹽酸水溶液中，加入氨試液，其他生物堿立即游離，發(fā)生渾濁，而阿托品仍以鹽酸鹽的形式溶解于水中。即供試品不得顯渾濁。2.紫外-可見分光光度法硫酸阿托品片的含量測定（方法略）原理：該類藥物一般無紫外吸收，必須加入顯色劑（溴甲酚綠）顯色后，與阿托品結(jié)合后溶于氯仿中，在420nm處才能測定吸收度。

2.氫溴酸山莨菪堿中有關(guān)物質(zhì)的檢查

其他生物堿：

氫溴酸山莨菪堿中可能存在如阿撲阿托品、顛茄堿等其它生物堿。方法：采用薄層色譜的對照法檢查以氫溴酸山莨菪堿為對照品，在氧化鋁薄層板上，用三氯甲烷－無水乙醇(95:5)為展開劑，展開，噴以稀碘化鉍鉀試液－碘化鉀碘試液(1:1)。

結(jié)果：供試品溶液除顯一個與對照品溶液主斑點位置相同的灰黑色斑點外，不得顯其他斑點。四、含量測定1.非水滴定法：具有弱堿性，在水溶液中直接用酸滴定沒有明顯突躍，在冰醋酸-醋酐溶液，堿性增強，可用高氯酸滴定氫溴酸山莨菪堿原料藥含量測定方法：取本品約0.2g，精密稱定，加冰醋酸20ml溶解后（必要時微熱使溶解），加醋酸汞試液5ml與結(jié)晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯純藍色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于38.63mg的C17H23NO4·HBr?！话慵尤脒^量的醋酸汞冰醋酸溶液，使氫溴酸生成難解離的溴化汞消除干擾原料藥：非水滴定法制劑：紫外-可見分光光度法思考題1異煙肼發(fā)生銀鏡反應(yīng)是因為其分子結(jié)構(gòu)中具有A呲啶環(huán)酰B共軛系統(tǒng)C酰肼基D酰胺基2《中國藥典》鑒別異煙肼的方法是A三氯化鐵反應(yīng)B與硝酸銀試液反應(yīng)C水解反應(yīng)D沉淀反應(yīng)3《中國藥典》測定異煙肼含量采用的方法是A溴酸鉀法B非水滴定法C紫外分光光度法D重氮化一偶合反應(yīng)4地西泮溶于濃硫酸后，在紫外燈下，顯示A淡藍色熒光B黃色熒光C黃綠色熒光D亮綠色熒光5雜環(huán)類藥物的制劑含量測定多采用A比色法B酸堿滴定法C紫外分光光度法D非水滴定法6與氫氧化鈉試液共熱，產(chǎn)生二乙胺氣體，使?jié)駶櫦t色石蕊試紙變藍的藥物為A奮乃靜B地西泮C尼克剎米D異煙肼思考題7雜環(huán)類藥物的原料藥含量測定多采用A酸比色法C堿滴定法B非水滴定法D紫外分光光度法思考題8溴酸鉀法測定異煙肼含量是因為其具有A氧化性C還原性B弱水解性D堿性9異煙肼可與下列哪些化合物反應(yīng)產(chǎn)生沉淀A硫酸銅B三氯化鐵C氯化汞D碘化鉍鉀10水解后能發(fā)生重氮化一偶合反應(yīng)的藥物有A三唑侖B氯氮卓C奮乃靜D地西泮11可用于異煙肼鑒別的方法有A戊烯二醛反應(yīng)B硫酸-熒光反應(yīng)C銀鏡反應(yīng)D衍生物熔點測定12戊烯二醛反應(yīng)適用于A呲啶環(huán)αα`位未取代B呲啶環(huán)βγ位未取代Cβ或γ位為烷基或羧基Dα或α`位為烷基或羧基13吩噻嗪類藥物可采用以下哪些方法鑒別A三氯化鐵反應(yīng)B重氮化一偶合反應(yīng)C紫外分光光度法D紅外光譜法思考題14可采用非水溶液滴定法測定含量的藥物有A尼可剎米B鹽酸氯丙嗪C奮乃靜D地西泮15苯并二氮雜卓類藥物包括A尼克剎米B三唑侖C奮乃靜D地西泮16吩噻嗪類藥物包括A異煙肼B奮乃靜C鹽酸氯丙嗪D鹽酸異丙嗪17呲啶類藥物包括A異煙肼B艾司唑侖C奮乃靜D尼克剎米思考題18精密稱取異煙肼0.2027g,置100ml容量瓶中,加水適量，溶解并稀釋至刻度。取續(xù)濾液25.00ml，加水50ml，鹽酸20ml,加甲基橙指示液1滴，用溴酸鉀滴定液滴定至終點，消耗溴酸鉀滴定液14.10ml，已知滴定度為3.429mg/ml,F=1.025,計算異煙肼的百分含量。思考題第3節(jié)托烷類藥物

一、結(jié)構(gòu)特點與性質(zhì)莨菪醇+莨菪酸酯類（生物堿）縮合典型藥物：硫酸阿托品、氫溴酸山莨菪堿山莨菪堿性質(zhì)：1.堿性：

叔胺氮原子，堿性較強，可與酸成鹽。2.水解性：

酯健易水解，生成莨菪酸3.生物堿沉淀反應(yīng)：

可與生物堿沉淀試劑反應(yīng)。4.旋光性：氫溴酸山莨菪堿為左旋體；硫酸阿托品為外消旋體，無旋光性。5.Vitali反應(yīng)：酯鍵水解后生成莨菪酸，與發(fā)煙硝酸反應(yīng)生成黃色三硝基衍生物，遇醇制氫氧化鉀即顯深紫色。Vitali反應(yīng)是托烷類生物堿的特征鑒別反應(yīng)。二、鑒別試驗藥典附錄中收載：Vitali反應(yīng)(托烷生物堿的鑒別）：取供試品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色的殘渣，放冷，加乙醇2～3滴濕潤，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。為硫酸阿托品和氫溴酸山莨菪堿的共有的鑒別反應(yīng)。1.硫酸阿托品的鑒別（1）紅外光譜法（2）Vit