基因工程的操作過程

學(xué)業(yè)分層測評當(dāng)堂即時達(dá)標(biāo)知識點(diǎn)一知識點(diǎn)二知識點(diǎn)三補(bǔ)充：1.原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)啟動子終止子啟動子：位于基因首端一段能與RNA聚合酶結(jié)合并能起始mRNA合成的序列。沒有啟動子，基因就不能轉(zhuǎn)錄。終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，它能阻礙RNA聚合酶的移動，并使其從DNA模板鏈上脫離下來，使轉(zhuǎn)錄終止。RNA聚合酶:能夠識別啟動子上的結(jié)合位點(diǎn)并與其結(jié)合的一種蛋白質(zhì).(以模板轉(zhuǎn)錄然后脫落)①不能轉(zhuǎn)錄為信使RNA，不能編碼蛋白質(zhì)。：能轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的信使RNA，能編碼蛋白質(zhì)編碼區(qū)非編碼區(qū)原核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)②有調(diào)控遺傳信息表達(dá)的核苷酸序列，在該序列中，最重要的是位于編碼區(qū)上游的RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)。非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游啟動子終止子編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)內(nèi)含子外顯子能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做外顯子不能夠編碼蛋白質(zhì)的序列叫做內(nèi)含子啟動子終止子編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游內(nèi)含子：外顯子：補(bǔ)充：2.真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子：能編碼蛋白質(zhì)的序列內(nèi)含子：不能編碼蛋白質(zhì)的序列：有調(diào)控作用的核苷酸序列，包括位于編碼區(qū)上游的RNA

聚合酶結(jié)合位點(diǎn)等。非編碼序列：包括非編碼區(qū)和內(nèi)含子原核細(xì)胞真核細(xì)胞不同點(diǎn)編碼區(qū)是_____的編碼區(qū)是間隔的、_____的相同點(diǎn)都由能夠編碼蛋白質(zhì)的______和具有調(diào)控作用的______區(qū)組成的原核細(xì)胞與真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)比較思考編碼相同數(shù)目氨基酸的蛋白質(zhì)，原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)一樣長嗎？連續(xù)不連續(xù)編碼區(qū)非編碼1．下列關(guān)于基因結(jié)構(gòu)的認(rèn)識中，正確的是（）A．大豆基因中內(nèi)含子是能夠編碼蛋白質(zhì)的序列B．乳酸菌與酵母菌基因結(jié)構(gòu)中都存在外顯子和內(nèi)含子C．大腸桿菌基因與RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)位于編碼區(qū)的下游D．水稻細(xì)胞基因的編碼區(qū)中存在非編碼序列2．（多選）原核細(xì)胞與真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)的共同特點(diǎn)是（）A．編碼區(qū)都有能編碼蛋白質(zhì)的序列B．編碼區(qū)都是連續(xù)的C．非編碼區(qū)都能調(diào)控遺傳信息的表達(dá)D．非編碼區(qū)都有RNA聚合酶結(jié)合的位點(diǎn)DACD1、目的基因的獲取2、基因表達(dá)載體的構(gòu)建3、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞4、目的基因的檢測與鑒定基因工程基本操作的四個步驟有了目的基因，我們才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性。使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并可進(jìn)行遺傳、表達(dá)和發(fā)揮作用載體進(jìn)入受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)，才能實現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化。才能確定目的基因是否真正在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和正確表達(dá)。(一)、目的基因主要是______________________編碼蛋白質(zhì)的基因（二）、獲取目的基因的常用方法有哪些?1、從基因文庫中獲取2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增3、人工合成如：與生物抗性相關(guān)的基因、與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因、與生物藥物和保健品相關(guān)的基因、與毒物降解相關(guān)的基因、與工業(yè)用酶相關(guān)的基因、具調(diào)控作用的因子等。1、從基基因文文庫中中獲取取目的的基因因（1）.基因文文庫將含有有某種種生物物不同同基因因的許許多DNA片斷，，導(dǎo)入入到受受體菌菌的群群體中中，各各個受受體菌菌分別別含有有這種種生物物的不不同基基因，，稱為為基因因文庫庫。種類基因組組文庫庫：含有一一種生生物的的全部基因部分基基因文文庫：：只包含含了一一種生生物的的部分基因，，如：cDNA文庫提取某某種生生物的的全部DNA用適當(dāng)當(dāng)?shù)南尴拗泼该该盖星幸欢ù蟠笮〉牡腄NA片段將DNA片段與與載體體連接接重組載載體基因組組文庫庫導(dǎo)入受受體菌菌中儲儲存（2）.基因文文庫的的構(gòu)建建方法法①基因組組文庫庫的構(gòu)構(gòu)建提取某某種生生物的的某器官官或特定發(fā)發(fā)育時時期的mRNA單鏈DNA雙鏈cDNA片段重組載載體與載體體連接接cDNA文庫反（逆逆）轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄酶酶DNA聚合酶酶導(dǎo)入受受體菌菌中儲儲存②cDNA文庫庫的的構(gòu)構(gòu)建建-----逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄錄法法：：基因因組組DNA文庫庫cDNA文庫庫基因因組組DNA文庫庫與與cDNA文庫庫的的比比較較某生生物物體體內(nèi)內(nèi)全全部部DNA許多多DNA片段段受體體菌菌群群體體限制酶與運(yùn)運(yùn)載載體體連連接接導(dǎo)導(dǎo)入入基因因組組文文庫庫cDNA反轉(zhuǎn)錄受體體菌菌群群體體與運(yùn)運(yùn)載載體體連連接接導(dǎo)導(dǎo)入入部分分基基因因文文庫庫（cDNA文庫庫））基因因組組DNA文庫庫與與cDNA文庫庫的的比比較較某種生生物某某個時時期的的mRNA真核生生物的的基因因用逆逆轉(zhuǎn)錄錄法得得到的的cDNA與原基基因相相同嗎嗎？有有哪些些差異異？原原核生生物基基因呢呢？思考？？編碼區(qū)區(qū)非編碼碼區(qū)非編碼碼區(qū)DNA聚合酶酶剪接有有關(guān)的的酶RNA聚合酶酶mRNA前體mRNA單鏈DNAcDNA逆轉(zhuǎn)錄錄酶轉(zhuǎn)錄剪接逆轉(zhuǎn)錄錄復(fù)制啟動子子終止子子基因因不含含非編編碼碼系系列列。即即不不含含非編編碼碼區(qū)區(qū)和內(nèi)含含子子基因因組組DNA文庫庫與與cDNA文庫庫的的比比較較（3）構(gòu)構(gòu)建建基基因因文文庫庫的的目目的的怎樣樣從從基基因因文文庫庫中中得得到到我我們們所所需需的的目目的的基基因因呢呢?便于于在在不知知道道目目的的基基因因核核苷苷酸酸序序列列的情情況況下下，，獲獲得得所所需需的的目目的的基基因因。。(4）從從基基因因文文庫庫中中得得到到目目的的基基因因的的方方法法依據(jù)據(jù)：：目目的的基基因因的的有有關(guān)關(guān)信信息息。。如：：根根據(jù)據(jù)基基因因的的核核苷苷酸酸序序列列基因因的的功功能能基因因在在染染色色體體上上的的位位置置基因因的的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄錄產(chǎn)產(chǎn)物物mRNA基因翻翻譯產(chǎn)產(chǎn)物蛋蛋白質(zhì)質(zhì)等特特性1、構(gòu)建建基因因組DNA文庫時時，首首先應(yīng)應(yīng)分離離細(xì)胞胞的A、染色色體DNAB、線粒粒體DNAC、總mRNAD、tRNA2、目的的基因因可從從基因因文庫庫中獲獲得，，下列列有關(guān)關(guān)基因因文庫庫的描描述正正確的的是A、某生生物的的全套套基因因就是是一個個基因因文庫庫B、將含有某某種生物不不同的許多多DNA片段，導(dǎo)入入某個生物物體內(nèi)，，則這個生生物就是一一個基因文文庫C、含有一種種生物所有有基因的基基因文庫叫叫做基因組組文庫D、含有一種種生物的一一部分基因因的基因文文庫叫cDNA文庫AC①概念：PCR全稱為_______________，是一項在在生物____復(fù)制___________的核酸合成成技術(shù)③條件：_________________________、______________、___________、_______________________②原理：__________④方式：以_____方式擴(kuò)增，，即____（n為擴(kuò)增循環(huán)環(huán)的次數(shù)））⑤結(jié)果：多聚酶鏈?zhǔn)绞椒磻?yīng)體外特定DNA片段DNA復(fù)制已知基因的的核苷酸序序列（前提）四種脫氧核核苷酸一對引物物耐熱的DNA聚合酶（（Taq酶）指數(shù)2n使目的基基因的片片段在短短時間內(nèi)內(nèi)成百萬萬倍地擴(kuò)擴(kuò)增2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增增目的基基因⑥過程：a、DNA變性（90℃-95℃℃）：雙鏈鏈DNA模板在熱作用用下，_____斷裂，形形成___________b、退火（復(fù)性55℃-60℃）：系統(tǒng)溫溫度降低，，引物物與DNA模板結(jié)合，，形成局部部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，，從引物處延伸，，合成與模板板互補(bǔ)的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈具體過程：?1個DNA分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增,循環(huán)4次，理論上至至少需要幾個引物？2×（2n-1）(n為循環(huán)次數(shù))（24-1）×2=30目的基因因的mRNA單鏈DNA(cDNA）雙鏈DNA(即目的基基因)反轉(zhuǎn)錄合成1）反轉(zhuǎn)錄錄法：以目的基基因轉(zhuǎn)錄錄成的信信使RNA為模板，，反轉(zhuǎn)錄錄成互補(bǔ)補(bǔ)的單鏈鏈DNA，然后在在酶的作作用下合合成雙鏈鏈DNA，從而獲獲得所需需的基因因。蛋白質(zhì)的氨基酸酸序列mRNA的核苷酸酸序列結(jié)構(gòu)基因因的核苷酸酸序列目的基因推測推測化學(xué)合成成2）根據(jù)已已知的氨氨基酸序序列合成成DNA法：3、人工合合成的目目的基因因目的基因因首端RNA聚合酶mRNA終止子尾端轉(zhuǎn)錄鑒別目的基因因遺傳表達(dá)目的基因因維持穩(wěn)定定表達(dá)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化法裸子單子葉植植物顯微注射射受精卵感受態(tài)細(xì)細(xì)胞重組表達(dá)達(dá)載體DNA分子遺傳物質(zhì)質(zhì)相對較較少DNA分子雜交交分子抗原—抗體接種學(xué)業(yè)分層層測評（（二）點(diǎn)擊圖標(biāo)標(biāo)進(jìn)入…9、靜夜夜四無無鄰，，荒居居舊業(yè)業(yè)貧。。。12月月-2212月月-22Friday,December23,202210、雨中中黃葉葉樹，，燈下下白頭頭人。。。06:00:4206:00:4206:0012/23/20226:00:42AM11、以我我獨(dú)沈沈久，，愧君君相見見頻。。。12月月-2206:00:4206:00Dec-2223-Dec-2212、故人江江海別，，幾度隔隔山川。。。06:00:4206:00:4206:00Friday,December23,202213、乍見翻翻疑夢，，相悲各各問年。。。12月-2212月-2206:00:4206:00:42December23,202214、他鄉(xiāng)生白發(fā)發(fā)，舊國見青青山。。23十二月月20226:00:42上午06:00:4212月-2215、比不了得就就不比，得不不到的就不要要。。。十二月226:00上上午12月-2206:00December23,202216、行動出成果果，工作出財財富。。2022/12/236:00:4206:00:4223December202217、做前，能能夠環(huán)視四四周；做時時，你只能能或者最好好沿著以腳腳為起點(diǎn)的的射線向前前。。6:00:42上上午6:00上上午06:00:4212月-229、沒沒有有失失敗敗，，只只有有暫暫時時停停止止成成功功！！。。12月月-2212月月-22Friday,December23,202210、很多事情努努力了未必有有結(jié)果，但是是不努力卻什什么改變也沒沒有。。06:00:4206:00:4206:0012/23/20226:00:42AM11、成功就是日日復(fù)一日那一一點(diǎn)點(diǎn)小小努努力的積累。。。12月-2206:00:4206:00Dec-2223-Dec-2212、世間成事，，不求其絕對對圓滿，留一一份不足，可可得無限完美美。。06:00:4206:00:4206:00Friday,December23,202213、不不知知香香積積寺寺，，數(shù)數(shù)里里入入云云峰峰。。。。12月月-2212月月-2206:00:4206:00:42December23,202214、意意志志堅堅強(qiáng)強(qiáng)的的人人能能把把世世界界放放在在手手中中像像泥泥塊塊一一樣樣任任意意揉揉捏捏。。23十十二二月月20226:00:42上上午午06:00:4212月月-2215、楚楚塞塞三三湘湘接接，，荊荊門門九九派派通通。。。。。十二二月月226:00上上午午12月月-2206:00December23,202216、少年十十五二十十時，步步行奪得得胡馬騎騎。。2022/12/236:00:4306:00:4323December202217、空山新新雨后，，天氣晚晚來秋。。。6:00:43上午6:00上上午06:00:4312月-229、楊柳散和風(fēng)風(fēng)，青山澹吾吾慮。。12月-2212月-22Friday,December23,202210、閱讀一切好好書如同和過過去最杰出的的人談話。06:00:4306:00:4306:0012/23/20226:00:43AM11、越是是沒有有本領(lǐng)領(lǐng)的就就越加加自命命不凡凡。12月月-2206:00:4306:00Dec-2223-Dec-2212、越是無