不同濃度的去污劑對(duì)青蛙的病理影響研究

不同濃度的去污劑對(duì)青蛙的病理性影響研究

化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院生物科學(xué)

0702班侯靜1論文題目2論文選題依據(jù)3研究目的與意義4試驗(yàn)主要原理5試驗(yàn)過(guò)程6實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析1論文題目不同濃度的去污劑對(duì)青蛙的病理性研究2論文選題依據(jù)2.1兩棲動(dòng)物的形態(tài)學(xué)發(fā)育與機(jī)理研究青蛙屬于動(dòng)物界、脊索動(dòng)物們、兩棲綱、無(wú)尾目、始蛙亞目、中蛙亞目、新蛙亞目，卵一般產(chǎn)于水中，孵化成蝌蚪，用腮呼吸，經(jīng)過(guò)變態(tài)發(fā)育為成體。成體基本無(wú)尾，主要用肺呼吸，但多數(shù)皮膚也有部分呼吸功能。

因?yàn)榍嗤苁且岳ハx(chóng)和其他無(wú)脊椎動(dòng)物為主食，因此必須棲息於水邊，作為生活在水體中的代表類(lèi)群，由于其皮膚的高滲透性，必然會(huì)受到水體污染物的不利影響，產(chǎn)生各種不良的生態(tài)效應(yīng)。

喬志剛，李學(xué)軍曾做過(guò)青蛙的個(gè)體發(fā)育及食性觀察的研究，并在解剖鏡下和顯微鏡下觀察了青蛙從孵出至變成幼蛙期間的個(gè)體發(fā)育過(guò)程

青蛙由卵孵出成蝌蚪至發(fā)育變態(tài)為幼蛙大約需要70-90天，這期間是青蛙個(gè)體發(fā)育過(guò)程中各器官系統(tǒng)變化最激烈的時(shí)期。剛孵化出來(lái)的蝌蚪，身體呈紡錘形，無(wú)四肢、口和內(nèi)鰓，生有側(cè)扁的長(zhǎng)尾，頭部?jī)蓚?cè)生有分枝的外鰓，吸附在水草上，靠體內(nèi)殘存的卵黃供給營(yíng)養(yǎng)。經(jīng)過(guò)幾天以后，長(zhǎng)出了口，能夠攝食水中的微生物。再過(guò)些時(shí)候，外鰓消失，長(zhǎng)出內(nèi)鰓，身體外面逐漸出現(xiàn)側(cè)線，心臟發(fā)育成一心房一心室，從外部形態(tài)到內(nèi)部構(gòu)造都很像魚(yú)。大約再過(guò)40天，蝌蚪又發(fā)生了進(jìn)一步變化，先開(kāi)始長(zhǎng)出后肢，然后又長(zhǎng)出前肢；尾部逐漸縮短；內(nèi)鰓消失，肺形成；心臟由一心房一心室變?yōu)槎姆慷氖?；外部形態(tài)和內(nèi)部構(gòu)造不再像魚(yú)，蝌蚪已變成了幼小的青蛙，幼蛙離水登陸，逐漸發(fā)育為成蛙

2.2動(dòng)物早期的組織病理影響研

從最古老的脊椎動(dòng)物魚(yú)到高等的哺乳類(lèi)動(dòng)物大鼠，仔豬，國(guó)內(nèi)外做過(guò)很多有關(guān)肝臟，腎臟的組織病理學(xué)研究。Kumar和Pant通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察比較了過(guò)量銅對(duì)文昌魚(yú)及脊椎動(dòng)物玫瑰無(wú)須鈀急性毒性及組織病理學(xué)影響，結(jié)果表明用不同亞致死劑量處理魚(yú)的肝臟出現(xiàn)典型的包括肝細(xì)胞壞死、解體等組織學(xué)損傷，且損傷程度呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性。

劉俊偉，張海棠，司紅英等進(jìn)行過(guò)仔豬鐵中毒的組織病理學(xué)變化方面的研究。試驗(yàn)采用冰凍切片、組織學(xué)和組織化學(xué)染色技術(shù)．對(duì)臨床送診病仔豬的淋巴結(jié)、脾臟、肝臟、肺臟和腎臟等器官進(jìn)行了解剖病理學(xué)和組織病理學(xué)的觀察與研究。結(jié)果表明，肝臟器官的損傷有肝細(xì)胞個(gè)體變?。窝]變寬．但肝細(xì)胞并無(wú)變性和壞死。

肝小葉周?chē)Y(jié)締組織內(nèi)的巨噬細(xì)胞和肝血竇內(nèi)的枯否氏細(xì)胞(Kupffercells)均含有藍(lán)色的含鐵血黃素顆粒。在肝血竇、中央靜脈的內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)亦含有不同數(shù)量的含鐵血黃素顆粒．但在肝細(xì)胞內(nèi)卻看不到含鐵血黃素顆粒。腎臟損傷有腎小體血管球(Glomerulus)萎縮變小，腎小囊(Renalvesicle)變得寬大。3研究目的與意義

肝臟是動(dòng)物消化系統(tǒng)中最大的消化腺，同時(shí)又是重要的解毒器官。腎臟是生成尿液清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物的重要器官，同時(shí)又具有重吸收功能。肝臟、腎臟發(fā)生病變將嚴(yán)重影響動(dòng)物的新陳代謝。3研究目的與意義本研究以黑斑蛙為試驗(yàn)對(duì)象，在單一急性毒性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，研究洗衣粉（主要成分SDS）對(duì)青蛙生活狀況、肝臟及其腎臟器官的影響，探討SDS對(duì)青蛙的毒性效應(yīng)和致毒機(jī)理，為洗滌劑對(duì)青蛙的影響評(píng)價(jià)提供毒理學(xué)依據(jù)，為人類(lèi)保護(hù)青蛙提供參考價(jià)值。4試驗(yàn)主要原理

石蠟切片是組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中最為廣泛應(yīng)用的方法，不僅用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，也是病理學(xué)和法醫(yī)學(xué)等學(xué)科用以研究、觀察及判斷細(xì)胞組織的形態(tài)變化的主要方法。活的細(xì)胞或組織多為無(wú)色透明，各種組織間和細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)之間均缺乏反差，在一般光鏡下不易清楚區(qū)別出，組織離開(kāi)機(jī)體后很快就會(huì)死亡和產(chǎn)生組織腐敗，失去原有正常結(jié)構(gòu)，因此，組織要經(jīng)固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細(xì)胞組織死亡，而能清晰辨認(rèn)其形態(tài)結(jié)構(gòu)。

石蠟切片法包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與粘片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標(biāo)本需要數(shù)日，但標(biāo)本可以長(zhǎng)期保存使用，為永久性顯微玻片標(biāo)本。本試驗(yàn)在對(duì)青蛙處理的基礎(chǔ)上，取其腎臟、肝臟并制作成石蠟切片后在光學(xué)顯微鏡下觀察組織細(xì)胞的形態(tài)變化。

5試驗(yàn)過(guò)程青蛙的喂養(yǎng)肝臟、腎臟取材甲醛固定石蠟切片的制作石蠟塊的制作石蠟塊的整修石蠟裝片的制作沖洗脫水透明浸蠟包埋切片與展片貼片與拷片染色6試驗(yàn)結(jié)果與分析6.1青蛙的臨床表現(xiàn)

青蛙經(jīng)洗衣粉處理后48h后2,3、4、5號(hào)組其運(yùn)動(dòng)遲緩，平衡能力變差，72h后，2、3、4、5組幾乎不全浸在溶液中，活動(dòng)能力顯著下降，1號(hào)組運(yùn)動(dòng)能力變差，其它各組較前運(yùn)動(dòng)也遲緩，平衡能力也變差。96h后除對(duì)照組及1號(hào)有一個(gè)青蛙活動(dòng)較正常外，其余各青蛙均浸在溶液中活動(dòng)能力嚴(yán)重變小。

，6.2青蛙的組織病理學(xué)檢查

正常6號(hào)對(duì)照組：青蛙肝臟肝細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞索排列整齊，肝細(xì)胞與肝血竇以中央靜脈為中心向周?chē)史派錉钆帕校ㄒ?jiàn)下圖）5號(hào)高劑量處理組青蛙肝細(xì)胞線粒體破裂，胞漿疏松、淡染，呈彌漫性（