ICH Q2 (R1)分析方法驗(yàn)證：正文和方法學(xué)

ICHQ2(R1)

分析方法驗(yàn)證：正文和方法學(xué)1文件歷程Q2（R1）2原編碼歷

程日

期新編碼

2005年11月主指導(dǎo)原則：分析方法的驗(yàn)證

Q2指導(dǎo)委員會(huì)批準(zhǔn)作為第二階段草案發(fā)布，對(duì)外征求意見。1993年10月26日Q2

Q1E

指導(dǎo)委員會(huì)批準(zhǔn)作為第四階段草案推薦給ICH三方的法規(guī)機(jī)構(gòu)采納1994年10月27日Q2分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則：主指導(dǎo)原則的補(bǔ)充Q2B指導(dǎo)委員會(huì)批準(zhǔn)作為第二階段草案發(fā)布，對(duì)外征求意見。1995年11月29日在Q2(R1)中Q2B指導(dǎo)委員會(huì)批準(zhǔn)作為第四階段草案推薦給ICH三方的法規(guī)機(jī)構(gòu)采納。1996年11月06日在Q2(R1)中現(xiàn)行第四階段版本Q2A和Q2B最初的指導(dǎo)原則現(xiàn)在更名為Q2(R1)因?yàn)橹笇?dǎo)原則Q2B方法學(xué)已經(jīng)合并到最初的指導(dǎo)原則中。新標(biāo)題“分析方法驗(yàn)證：正文和方法學(xué)”2005年11月Q2(R1)部分1：分析方法的驗(yàn)證正文

ICH協(xié)調(diào)三方指導(dǎo)原則3分析方法驗(yàn)證的目的是為了闡述分析方法是適用于它要分析的目的。分析方法的目的應(yīng)該清晰易懂，因?yàn)樗鼘⒅萍s需要被評(píng)價(jià)的驗(yàn)證特征。2.

所要驗(yàn)證的分析方法的類型

--

鑒別試驗(yàn)；

--

雜質(zhì)含量的定量測(cè)試；

--

雜質(zhì)控制的限度測(cè)試；--

原料藥或制劑或其他藥品中選擇性的組分的樣品的活性部分的定量測(cè)試；3.

重復(fù)驗(yàn)證

--原料藥合成路線變更；

--成品組分變更

--分析方法變更

要求重新驗(yàn)證的程度取決于變更的性質(zhì)。某些其他變更可能也要重新驗(yàn)證。分析項(xiàng)目和相應(yīng)的驗(yàn)證指標(biāo)4項(xiàng)目鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)試驗(yàn)含量及溶出度定量定性準(zhǔn)確度-+-+精密度重復(fù)性中間精密度--++（1）--++（1）專屬性（2）++++檢測(cè)限--（3）+-定量限-+--線性-+-+范圍-+-+項(xiàng)目鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)試驗(yàn)含量及溶出度定量定性準(zhǔn)確度-+-+精密度重復(fù)性中間精密度--++（1）--++（1）專屬性（2）++++檢測(cè)限--（3）+-定量限-+--線性-+-+范圍-+-+耐用性++++①巳有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度。

②如一種方法不夠?qū)伲捎闷渌治龇椒ㄓ枰匝a(bǔ)充。

③視具體情況予以驗(yàn)證。①巳有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度。

②如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充。

③視具體情況予以驗(yàn)證。術(shù)語(yǔ)5Analyticalprocedure

分析方法是指分析測(cè)試進(jìn)行的方式。它應(yīng)該詳細(xì)地描述執(zhí)行每個(gè)分析試驗(yàn)的必要的步驟。可能包括但不限于：樣品，對(duì)照品和試劑的制備，使用的儀器，標(biāo)準(zhǔn)曲線的產(chǎn)生，采用的計(jì)算公式，等等。2.Specificity專屬性是指清晰地評(píng)價(jià)組分中認(rèn)為可能存在的被測(cè)物的能力。典型的包括：雜質(zhì)，降解產(chǎn)物，輔料等。一個(gè)單獨(dú)的分析方法的專屬性缺乏，可以通過(guò)其他可支持的分析方法來(lái)補(bǔ)充。

此定義有以下含義：

鑒別：確保某個(gè)分析物的身分。

純度測(cè)試：確保所執(zhí)行的所有分析方法對(duì)被測(cè)物的雜質(zhì)的含量有一個(gè)準(zhǔn)確的陳述，如，有關(guān)物質(zhì)測(cè)試，重金屬，殘留溶劑，等。

含量測(cè)試：提供準(zhǔn)確的結(jié)果，對(duì)樣品中被測(cè)物的含量或效力有準(zhǔn)確的陳述。術(shù)語(yǔ)63.Accuracy分析方法的準(zhǔn)確度表達(dá)了可接受值，包括常規(guī)真值或可接受的參考值，與測(cè)得值之間的一致性的接近程度。4.Precision分析方法的精密度表達(dá)了，在給定條件下，獲得的一系列的同一均勻樣品的多次取樣的測(cè)量值之間的一致性的接近程度（分散度）。精密度可以從三個(gè)水平考慮：重復(fù)性，中間精密度。重現(xiàn)性。精密度應(yīng)該用同一均勻，權(quán)威樣品進(jìn)行考察。然而，如果不能獲得同一均勻樣品，可以用人工制備樣品或樣品溶液進(jìn)行考察。4.1．重復(fù)性

重復(fù)性表示在短期時(shí)間間隔內(nèi)，同樣操作條件下的精密度。重復(fù)性也叫批內(nèi)分析精密度。4.2．中間精密度

中間精密度表示在同一試驗(yàn)室下的變異：不同天，不同試驗(yàn)者，不同儀器，等。4.3．重現(xiàn)性

重現(xiàn)性表示試驗(yàn)室之間的精密度（合作性研究，通常用于分析方法學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)化）。術(shù)語(yǔ)75.Detectionlimit一個(gè)分析方法的檢測(cè)限是樣品中分析物能被檢測(cè)到但是沒必要作為精確值定量的最小量.6.Quantitationlimit一個(gè)分析方法的定量限是樣品中分析物能夠定量測(cè)定，具有合適的精密度和準(zhǔn)確度的最低量。定量限是樣品基質(zhì)中最低含量的化合物的定量分析的一個(gè)參數(shù)，特別用于測(cè)定雜質(zhì)和/或降解產(chǎn)物。7.Linearity分析方法的線性是獲得的測(cè)試結(jié)果與樣品中被測(cè)物的濃度成直接比例的能力。8.Range分析方法的范圍是樣品中被測(cè)物的最高濃度和最低濃度之間的間隔（包括最高和最低濃度），在此區(qū)間內(nèi)，已經(jīng)證明分析方法有合適的精密度，準(zhǔn)確度和線性。術(shù)語(yǔ)89.Robustness分析方法的耐用性是，在故意對(duì)分析方法的參數(shù)進(jìn)行微小變化后，方法仍然能保持不受影響的能力的一種測(cè)試，并且提供在正常范圍內(nèi)使用的可靠性說(shuō)明。部分2：分析方法的驗(yàn)證方法學(xué)

ICH協(xié)調(diào)的三方指導(dǎo)原則最初文件給出了分析方法驗(yàn)證中應(yīng)該考慮到的特征的討論，此文件是最初文件的補(bǔ)充。它的目的是，在關(guān)于怎樣考慮每個(gè)分析方法的各種驗(yàn)證特征方面，提供同樣的指導(dǎo)和薦意。一些情況下，（例如，專屬性的證明），為了確保原料藥或制劑的質(zhì)量，可以考察多個(gè)分析方法結(jié)合的全面的能力。此外，文件給出了在注冊(cè)申請(qǐng)中要呈報(bào)的數(shù)據(jù)指示。此指導(dǎo)原則中前面的那些方法以外的方法，也是可以應(yīng)用或可以接受的。選擇最適合于申請(qǐng)者的驗(yàn)證方法和草案，這是申請(qǐng)者的職責(zé)。由于性質(zhì)復(fù)雜，生物和生物技術(shù)產(chǎn)品的分析方法在某些情況下可以和此文件中的方法不同。在驗(yàn)證研究過(guò)程的始終，應(yīng)該采用有備有文件的純度，性能好的參考物質(zhì)。必須達(dá)到的純度取決于應(yīng)用的要求。實(shí)際上，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)工作通常是可能的，這樣能同時(shí)考慮到適當(dāng)?shù)尿?yàn)證特性，來(lái)提供對(duì)分析方法的能力的徹底的完整地認(rèn)識(shí)，例如：特異性，線性，范圍，準(zhǔn)確度和精密度。9Introduction1．專屬性

專屬性研究應(yīng)該在鑒別試驗(yàn)，雜質(zhì)鑒別試驗(yàn)和含量分析中進(jìn)行。用于證明專屬性的方法取決于分析方法的分析目標(biāo)。

常常不太可能證明一個(gè)分析方法對(duì)于特定的分析物（完全區(qū)別）是專屬的。在這種情況下，建議結(jié)合使用兩個(gè)或多個(gè)分析方法來(lái)達(dá)到區(qū)別的必要水平。101.1

鑒別適當(dāng)?shù)蔫b別試驗(yàn)應(yīng)該能區(qū)別可能存在的結(jié)構(gòu)相似的化合物。一個(gè)方法的區(qū)別可以通過(guò)獲得含被測(cè)物樣品的肯定的結(jié)果（可以通過(guò)與已知參考物質(zhì)比較），和不含被測(cè)無(wú)樣品的否定的結(jié)果來(lái)證實(shí)。此外，鑒別試驗(yàn)可以運(yùn)用到與被測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的或相關(guān)的物質(zhì)中來(lái)證明不能得到正反應(yīng)。這類潛在的干擾物質(zhì)的選擇應(yīng)該依據(jù)徹底的科學(xué)的判斷，全面地考慮可能產(chǎn)生的干擾物。111.2

含量測(cè)試和雜質(zhì)測(cè)試對(duì)于色譜方法，代表性的色譜圖應(yīng)該用于證明專屬性，且各個(gè)單獨(dú)化合物應(yīng)該適當(dāng)?shù)貥?biāo)記。

色譜中臨界性的分離應(yīng)該進(jìn)行適當(dāng)程度地考察。臨界性分離能夠通過(guò)洗脫出來(lái)最接近的兩個(gè)化合物的分離度來(lái)證明。

在含量分析方法不具有專屬性的情況下，其他支持的分析方法應(yīng)該用來(lái)證明全面的專屬性。例如，采用滴定法測(cè)定原料藥釋放度的含量時(shí)，含量測(cè)定和適當(dāng)?shù)碾s質(zhì)試驗(yàn)可以結(jié)合使用。121.2.1

雜質(zhì)是可以得到的對(duì)于含量分析，需要證明在雜質(zhì)和輔料存在的情況下區(qū)別出被測(cè)物；實(shí)際操作中，可以將一定量的雜質(zhì)和/或輔料加入到純物質(zhì)（原料藥或制劑）中，證明含量分析結(jié)果在這些物質(zhì)的存在下不受影響（通過(guò)比較不含加入物質(zhì)的樣品）。

對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定，此項(xiàng)證明用在原料藥或制劑中加入一定量的雜質(zhì)，證明單獨(dú)分離這些雜質(zhì)和/或?qū)⑵渑c同樣樣品基質(zhì)中的其他組分的分離開來(lái)進(jìn)行。131.2.2

雜質(zhì)不可以得到如果雜質(zhì)或降解產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)品不可以獲得，特異性可以通過(guò)比較包含雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的樣品的測(cè)試結(jié)果和另一個(gè)性能良好的分析方法，例如：藥典方法或其他有效的分析方法（單獨(dú)的方法）。適當(dāng)?shù)兀瑧?yīng)該包括在相對(duì)激烈條件下：光，熱，濕度，酸/堿，氧化和還原。

-對(duì)于含量分析，應(yīng)該比較這兩個(gè)結(jié)果；

-對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定，應(yīng)該比較雜質(zhì)譜。

峰純度測(cè)試可能對(duì)于表明被測(cè)物色譜峰不是多于一個(gè)組分的峰歸屬（例如，二級(jí)管陣列9

DAD，質(zhì)譜）很有用。142.

線性應(yīng)該在分析方法的范圍（見第3部分）內(nèi)評(píng)價(jià)線性關(guān)系。可以用指定的方法，直接證明原料藥（通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋液）的線性和/或制劑組分的合成混合物的分別的權(quán)重來(lái)證明其線性。

線性應(yīng)該通過(guò)被測(cè)物濃度或含量的信號(hào)圖作出可視檢測(cè)圖來(lái)評(píng)價(jià)。如果有線性關(guān)系，測(cè)試結(jié)果應(yīng)該通過(guò)合適的統(tǒng)計(jì)方法來(lái)評(píng)價(jià)，例如，用最小二乘法的一級(jí)回歸線來(lái)計(jì)算。在某些情況下，為了得到含量測(cè)試結(jié)果和樣品濃度之間的線性，測(cè)試數(shù)據(jù)可能需要在回歸分析之前經(jīng)過(guò)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換。線性回歸得到的數(shù)據(jù)本身可能有助于提供線性程度的數(shù)學(xué)評(píng)價(jià)。應(yīng)該給出相關(guān)系數(shù)，y-截距，線性回歸的斜率和剩余平方和。包括給出數(shù)據(jù)圖。此外，從線性回歸得到的實(shí)際數(shù)據(jù)點(diǎn)的偏差分析對(duì)于評(píng)價(jià)線性也非常有用。

對(duì)于建立線性，最少要求5個(gè)濃度點(diǎn)。其他方法應(yīng)該適當(dāng)調(diào)整153.

范圍特定的范圍通常來(lái)源于線性研究并且取決于分析方法預(yù)定的應(yīng)用。通過(guò)證實(shí)分析方法提供的線性，準(zhǔn)確度和精密度的可接受度建立范圍。測(cè)定的線性，準(zhǔn)確度和精密度時(shí)，所用到的樣品中含被測(cè)物的量應(yīng)在分析方法指定的范圍內(nèi)或是在范圍的極值。

應(yīng)該考慮到以下最小指定范圍：

-對(duì)于原料藥或是成品（藥物）制劑的含量分析：通常是測(cè)試濃度的80~120%；

-對(duì)于含量均一度測(cè)試，覆蓋測(cè)試濃度的最小范圍是70~130%，除非一個(gè)更寬的更合適的范圍，根據(jù)劑型的性質(zhì)（例如，壓入型吸入劑），可以作出適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。

-對(duì)于溶出度測(cè)試：在指定范圍的+/-20

%；

例如，如果控釋制劑的規(guī)格覆蓋的范圍是從1小時(shí)后的20%到24小時(shí)的90%，標(biāo)簽聲明的有效范圍應(yīng)該為1-110%。

-對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定：從雜質(zhì)的報(bào)告水平到規(guī)格的120%；

-對(duì)于有效的或是產(chǎn)生毒性或非預(yù)期的藥效的已知雜質(zhì)：檢測(cè)/定量限應(yīng)該與雜質(zhì)應(yīng)該控制的水平相當(dāng)。163.

范圍

-如果含量和純度測(cè)試作為一個(gè)試驗(yàn)進(jìn)行，且只有用到一個(gè)100%的標(biāo)準(zhǔn)品，線性應(yīng)該覆蓋從雜質(zhì)報(bào)道的水平到含量分析規(guī)格的120%。174.

準(zhǔn)確度

4.1.

含量分析

4.1.1

原料藥

a)

分析方法應(yīng)用到已知純度的被測(cè)物中（例如，對(duì)照品）

b)

將預(yù)定的分析方法的結(jié)果與另一個(gè)良好性能的方法的結(jié)果比較，得到的準(zhǔn)確度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和/或定義；

c)

可以從已經(jīng)建立的精密度，線性和專屬性中推斷準(zhǔn)確度18應(yīng)該在分析方法指定范圍內(nèi)建立準(zhǔn)確度。4.1.2

藥物制劑

a)

按處方量將對(duì)照品與空白輔料進(jìn)行混合，得到的樣品采用分析方法進(jìn)行分析。

b)

在不能獲得藥物制劑的所有組分的情況下，向藥物制劑中加入已知量的被測(cè)物，或者與另一個(gè)良好性能的方法所得到的結(jié)果進(jìn)行比較，都是可以接受的，此法的準(zhǔn)確度要進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和/或定義。

c)

可以從已經(jīng)建立的精密度，線性和特異性項(xiàng)中推導(dǎo)準(zhǔn)確度。194.2.

雜質(zhì)（定量）a)應(yīng)該用已知量的雜質(zhì)加入到樣品中（原料藥/制劑）來(lái)評(píng)價(jià)準(zhǔn)確度。b)

在不能獲得某種雜質(zhì)和/或降解產(chǎn)物的樣品的情況下，可以考慮將用另一成熟方法獲得的結(jié)果進(jìn)行比較?？梢圆捎迷纤幍捻憫?yīng)因子。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物對(duì)照品，可用所建立方法測(cè)定的結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的方法。在不能測(cè)得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的校正因子或不能測(cè)得對(duì)主成分的相對(duì)校正因子的情況下，可用不加校正因子的主成分自身對(duì)照法計(jì)算雜質(zhì)含量。c)應(yīng)該明確單雜或總雜是怎樣測(cè)定的，例如重量/重量或面積百分比。204.3

推薦數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)需采用指定范圍內(nèi)的最少9個(gè)測(cè)定點(diǎn)，最少3個(gè)濃度水平（例如，用總分析方法測(cè)定3個(gè)濃度/每個(gè)濃度3個(gè)重復(fù)樣品）

準(zhǔn)確度應(yīng)該進(jìn)行報(bào)道作為測(cè)定樣品中被測(cè)物的已知加入量百分比回收率，或作為平均值與可接受真值的差異和置性區(qū)間。21

5.1.

重復(fù)性

a)

最少9個(gè)測(cè)試值覆蓋分析方法的指定范圍（例如，3個(gè)濃度，每個(gè)濃度重復(fù)3個(gè)樣品）

或

b)

最少6個(gè)測(cè)定值，濃度在100%的測(cè)定濃度225.2.

中間精密度應(yīng)該建立的中間精密度的程度取決于方法所要應(yīng)用的環(huán)境。申請(qǐng)者應(yīng)該建立分析方法的精密度上的任意事件的影響。要研究的典型變異包括不同分析天，分析者，儀器，等。沒有必要單獨(dú)考慮這些因素。提倡使用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（矩陣）5.

精密度5.3.

重現(xiàn)性重現(xiàn)性是通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)來(lái)評(píng)價(jià)的。重現(xiàn)性應(yīng)該考慮在分析方法標(biāo)準(zhǔn)化的情況下，例如，包含藥典中的分析方法。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用樣品質(zhì)量的一致性及貯存運(yùn)輸中的環(huán)境對(duì)該一致性的影響，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。23應(yīng)該給出所考察的每種的精密度的標(biāo)準(zhǔn)偏差，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（變異系數(shù)）和置信區(qū)間。

5.4.

推薦數(shù)據(jù)6.

檢測(cè)限

測(cè)定檢測(cè)限的幾種方法都是可以的，取決于方法是一個(gè)非儀器方法還是儀器方法。除了那些列表中的方法外的方法是也可能是可接受的。24目測(cè)不僅可以用于非儀器方法，也可以用于儀器方法。檢測(cè)限的測(cè)定是通過(guò)分析含已知濃度的被測(cè)物樣品且建立可以檢測(cè)的被測(cè)物的最低的濃度水平。6.1.

根據(jù)目測(cè)評(píng)價(jià)6.2.

根據(jù)信噪比

此方法只能用于表現(xiàn)出基線噪音的分析方法。

信噪比的測(cè)定，是通過(guò)比較測(cè)得的已知低濃度的樣品信號(hào)和空白樣品的信號(hào)，建立能夠監(jiān)測(cè)的被測(cè)物的最低濃度所得到的。信噪比在3或2：1之間通常被認(rèn)為可接受的作為檢測(cè)限的評(píng)價(jià)。256.3.

根據(jù)響應(yīng)和斜率的標(biāo)準(zhǔn)偏差6.3.1

根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差

大量的分析的背景響應(yīng)的測(cè)定是通過(guò)分析一定量的空白樣品并計(jì)算這些響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)執(zhí)行的。

6.3.2

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或截距的標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)代替。26檢測(cè)限（DL）：

DL

=

3.3σ/

S

σ

=響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差

S

=標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率；斜率S可以從被測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出來(lái)。σ的計(jì)算可以用各種方法，例如：6.4

推薦數(shù)據(jù)應(yīng)該給出檢測(cè)限和用于測(cè)定檢測(cè)限的方法。如果DL是根據(jù)目測(cè)或根據(jù)信噪比來(lái)測(cè)定的，相關(guān)的色譜的呈報(bào)應(yīng)該認(rèn)為其合理性是可接受的。

在檢測(cè)限的估計(jì)值通過(guò)計(jì)算或推算得到的情況下，此推論可能隨后要通過(guò)獨(dú)立的分析適量的接近或在檢測(cè)限濃度的樣品來(lái)驗(yàn)證。277.

定量限

幾種測(cè)定定量限的方法都是可以的，取決于方法是非儀器還是儀器方法。7.1.

根據(jù)目測(cè)目測(cè)不僅可以用于非儀器方法也可以用于儀器方法。

定量限的測(cè)定是通過(guò)分析含已知濃度的被測(cè)物樣品且建立可以定量測(cè)定的被測(cè)物的最低的濃度水平。7.2.

據(jù)信噪比此方法只能用于表現(xiàn)出基線噪音的分析方法。

信噪比的測(cè)定，是通過(guò)比較測(cè)得的已知低濃度的樣品信號(hào)和空白樣品的信號(hào)，建立能夠監(jiān)測(cè)的被測(cè)物的最低濃度所得到的。信噪比在10：1之間通常被認(rèn)為作為定量限是可接受的。287.3.

根據(jù)響應(yīng)和斜率的標(biāo)準(zhǔn)偏差（QL）可以表達(dá)成：

QL

=

10σ/

S

此處σ

=響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差

S

=標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率；斜率S可以從被測(cè)物標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算出來(lái)。σ的計(jì)算可以用各種