CST常見(jiàn)問(wèn)題與回答

CST常見(jiàn)問(wèn)題與回答（最新版本）unllv生物免費(fèi)查詢皖務(wù)1、我該如何儲(chǔ)存我的抗體？多高的溫度會(huì)影響抗體的穩(wěn)定性？unllv生物免費(fèi)查詢皖務(wù)答：請(qǐng)將抗體的原始管儲(chǔ)存到-20°C，不要分裝，否則有可能引起抗體的改變和浪費(fèi)。提供的抗體貯存在包含50%甘油緩沖液中，在推薦的儲(chǔ)存溫度下不會(huì)冷凍。這避免了由于反復(fù)凍融導(dǎo)致的抗體降解。偶聯(lián)抗體可能儲(chǔ)存在4°C，請(qǐng)參照產(chǎn)品說(shuō)明書上的建議儲(chǔ)存。2、 如何儲(chǔ)存SDS裂解的磷酸化蛋白樣本？答：如果短期內(nèi)使用（少于3個(gè)月），SDS樣本細(xì)胞裂解液可以儲(chǔ)存在-201，如果長(zhǎng)期儲(chǔ)存，應(yīng)保存于-80°C?；罨牡鞍讟颖镜慕到庾兓艽?，其降解率取決于每種蛋白的性質(zhì)和樣本里究竟含有多少活化的蛋白。3、 能用室溫孵育抗體1小時(shí)代替4C過(guò)夜嗎？答：不建議。CST公司活化特異的抗體用于區(qū)分一或兩個(gè)翻譯后修飾的氨基酸殘基。這些修飾包括磷酸化，乙酰化和酶切割。與識(shí)別總蛋白的抗體相比，大多數(shù)針對(duì)這些修飾位點(diǎn)的抗體具有較低的親和性。因此，通過(guò)4C孵育過(guò)夜延長(zhǎng)抗原和抗體的反應(yīng)時(shí)間以獲得最好的信噪比是非常關(guān)鍵的。4、 當(dāng)我準(zhǔn)備細(xì)胞裂解液樣品時(shí)，需使用什么緩沖液？答：請(qǐng)檢查每個(gè)產(chǎn)品說(shuō)明書中包含的Westernblot操作步驟中推薦的緩沖液。CST提供以下緩沖液（見(jiàn)下表），或者，如果你想自己配制，CST網(wǎng)站上列出了特別的緩沖液組分。CHAPS緩沖液專為獲得細(xì)胞質(zhì)的提取物而設(shè)計(jì)，適應(yīng)于Caspase的檢測(cè)，但并非關(guān)鍵。樣本處理 推薦使用緩沖液全細(xì)胞裂解物，使用標(biāo)準(zhǔn)的SDS全細(xì)胞裂解物，使用標(biāo)準(zhǔn)的SDS上樣緩沖液#7722或#7723免疫沉淀和/或激酶分析，使用#9803切割的半胱天冬酶和其底物的免疫印跡，使用#9852藍(lán)色的上樣緩沖液包裝#7722或紅色的上樣緩沖液包裝#7723細(xì)胞裂解緩沖液（10X）#9803CHAPS緩沖液（10X）#98525、CST的抗體是否適用于全組織樣本裂解物？答：CST并未測(cè)試所有抗體是否適用于全組織樣本裂解物，但是CST的很多抗體已經(jīng)被其他客戶用于整個(gè)組織而且取得巨大成功。優(yōu)寧維微信公眾號(hào)：優(yōu)寧維抗體專家/UNIVSUBC6、 如何為磷酸化目標(biāo)蛋白準(zhǔn)備陽(yáng)性細(xì)胞裂解液對(duì)照？答：請(qǐng)參考CST網(wǎng)站上該產(chǎn)品的Westernblot圖，使用圖述的細(xì)胞系和藥物處理，能夠得到陽(yáng)性對(duì)照蛋白。也可參見(jiàn)：/support/controls.html查閱7、 假如說(shuō)明書上某個(gè)種屬未被列出與CST抗體有交叉反應(yīng)，是否意味著這個(gè)種屬未被檢測(cè)過(guò)呢？答：可能未被檢測(cè)過(guò)。CST科學(xué)家檢測(cè)所有CST抗體在多個(gè)物種的交叉反應(yīng)性，如果可能的話（這個(gè)依賴于目標(biāo)蛋白和實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的可行性）。假如我們沒(méi)有獲得某個(gè)種屬的交叉反應(yīng)的陽(yáng)性結(jié)果，我們就不會(huì)列出這個(gè)種屬。然而，有可能我們檢測(cè)的這個(gè)細(xì)胞系包含一個(gè)低水平的特定蛋白，或者，我們使用的誘導(dǎo)條件對(duì)那個(gè)特定的細(xì)胞系不起作用。如果您需要針對(duì)某個(gè)種屬交叉反應(yīng)的更多信息，請(qǐng)隨時(shí)聯(lián)系我們的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)support@或者優(yōu)寧維公司來(lái)獲取幫助。8、 使用CST抗體時(shí)，為什么我不能使用我們自己實(shí)驗(yàn)室的免疫印跡操作流程？答：CSPM抗體經(jīng)過(guò)優(yōu)化以提供最強(qiáng)的信號(hào)，最少的背景，使用CST推薦的免疫印跡操作流程，對(duì)于終端客戶的優(yōu)點(diǎn)是節(jié)約時(shí)間和材料。9、 如何確保Westernblot結(jié)果的可重復(fù)性答：至于為什么看起來(lái)較難重復(fù)Westernblot結(jié)果，這里有幾種可能性。要發(fā)現(xiàn)這種情況的原因，可考慮以下：9-1）你是如何儲(chǔ)存抗體的？請(qǐng)參考問(wèn)題1,2。抗體稀釋后不能重復(fù)使用。許多抗體有一個(gè)非常低的工作濃度，很可能這個(gè)濃度隨著連續(xù)的Westernblot會(huì)減少。9-2）你確定你的樣本中包含活化的蛋白？細(xì)胞裂解液樣品制備活化蛋白會(huì)由于細(xì)胞數(shù)量，藥物誘導(dǎo)時(shí)間，細(xì)胞傳代數(shù)量和儲(chǔ)存條件不同而改變。CST產(chǎn)品在其保質(zhì)期內(nèi)都有最佳表現(xiàn)。請(qǐng)?jiān)L問(wèn)/support/shelflife.html產(chǎn)品保質(zhì)期頁(yè)面獲得列表。請(qǐng)注意：不能分裝抗體。10、 如何使用固相抗體來(lái)做免疫沉淀？答：要得到最佳的結(jié)果，獲得均勻的微珠懸浮液是重要的。以下步驟可確保同質(zhì)：?將包含微珠懸浮液的管子放入冰桶10分鐘。?倒置管子幾次以獲得50%微珠-緩沖液懸浮液。?假如可能，溫和漩渦管子。?為了迅速吸出產(chǎn)品，切掉吸管端頭，將吸管端頭插入微珠懸浮液使靠近固相抗體微珠混合物。孵育抗體和200歸的細(xì)胞裂解物（約1mg/ml）4C過(guò)夜，用推薦的抗體稀釋濃度。11、 當(dāng)有多種抗體可以選擇時(shí)，哪一種在我的實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)最優(yōu)？答：通常，CST會(huì)針對(duì)一個(gè)目標(biāo)蛋白提供多個(gè)抗體。選擇在您接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)最優(yōu)的抗體，可以訪問(wèn)抗體對(duì)照表格或者聯(lián)系CST技術(shù)支持support@或優(yōu)寧維公司來(lái)獲取幫助，進(jìn)而選擇最適合您實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)抗體。12、 CST如何確?？贵w的質(zhì)量？答：CST科學(xué)家努力檢測(cè)所有產(chǎn)品的主要應(yīng)用，例如免疫印跡，免疫沉淀，免疫熒光，免疫組織化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)，和染色質(zhì)免疫沉淀。當(dāng)一個(gè)抗體被推薦用來(lái)某個(gè)特定的應(yīng)用，說(shuō)明這個(gè)抗體已經(jīng)通過(guò)了嚴(yán)格的特異性實(shí)驗(yàn)測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)。此外，我們的科學(xué)家針對(duì)每個(gè)產(chǎn)品創(chuàng)建了專門的（優(yōu)化的）免疫染色的方法，為您節(jié)約時(shí)間和試劑。我們也常規(guī)檢測(cè)我們的抗體在不同物種的應(yīng)用，包括人類，猴子，小鼠和大鼠。產(chǎn)品的高質(zhì)量是CST最關(guān)心的。如果您對(duì)某個(gè)沒(méi)有在產(chǎn)品頁(yè)面列出的某個(gè)特定的應(yīng)用感興趣，請(qǐng)聯(lián)系CST技術(shù)支持support@，來(lái)獲取更多的信息。13、 對(duì)于不同的批次，CST如何對(duì)質(zhì)量進(jìn)行控制？答：CST科學(xué)家努力達(dá)到每批產(chǎn)品的一致性。作為標(biāo)準(zhǔn)，我們?cè)谛碌呐沃袡z測(cè)以往批次的所有應(yīng)用。每個(gè)批次每個(gè)應(yīng)用推薦的濃度都經(jīng)過(guò)優(yōu)化，所以請(qǐng)遵循我們的操作步驟。您可以瀏覽我們的免疫印跡驗(yàn)證頁(yè)面獲取更多知識(shí)。14、我能夠訂購(gòu)一個(gè)定制配方的抗體嗎？答：針對(duì)客戶（不含載體）的訂單，許多制備在不含BSA或甘油的PBS中的抗體都有庫(kù)存。這個(gè)配方可以為了偶聯(lián)而更改，能夠連接到熒光素，微珠，或者染料。為了滿足您分析的需要或者您實(shí)驗(yàn)室的需要，我們也很高興向您整批出售。關(guān)于價(jià)格和可用性的問(wèn)題，您可以聯(lián)系我們info@或者優(yōu)寧維公司。15、 CST能夠定制我的抗體嗎？答：CST不會(huì)開(kāi)發(fā)定制抗體，但是我們很高興接受您的目標(biāo)蛋白抗體建議。請(qǐng)發(fā)送您的建議到info@,CST科學(xué)家將在短期之內(nèi)聯(lián)系您。16、 為什么我們的抗體能夠在常溫下運(yùn)輸？答：與CST在環(huán)境方面的巨大努力一致，我們從2003年開(kāi)始，在常溫下運(yùn)輸抗體，盡可能的減少包裝材料的浪費(fèi)。每個(gè)CST?抗體都需經(jīng)過(guò)穩(wěn)定性檢測(cè)，先在常溫和37°C下放置一周，然后進(jìn)行免疫印跡測(cè)試以確?？贵w的性能沒(méi)有改變。如果你收到的抗體保存在常溫中，請(qǐng)放心它已經(jīng)通過(guò)穩(wěn)定性測(cè)試，抗體的性能仍然是最優(yōu)的。抗體接收后，請(qǐng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書中的推薦溫度儲(chǔ)存。17、 這個(gè)抗體是否做夠做這些實(shí)驗(yàn)（免疫印跡，免疫沉淀，免疫熒光，免疫組織化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)，染色體免疫沉淀）？答：CST會(huì)例行在相關(guān)的實(shí)驗(yàn)中測(cè)試抗體。這些被推薦的應(yīng)用，都通過(guò)了嚴(yán)格的應(yīng)用特定的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。我們僅會(huì)推薦通過(guò)嚴(yán)格驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用，如果這個(gè)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)是模棱兩可的，我們是不會(huì)推薦這個(gè)應(yīng)用的。關(guān)于某個(gè)特定的抗體的更多信息或者咨詢哪種抗體將在您的實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)最佳，可以聯(lián)系CST的技術(shù)支持團(tuán)隊(duì)support@或優(yōu)寧維共公司。18、 這個(gè)抗體能否用來(lái)做熒光免疫印跡？答：CS并沒(méi)有對(duì)抗體是否能夠做熒光免疫印跡進(jìn)行常規(guī)測(cè)試，盡管在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中許多抗體是發(fā)揮作用的。使用CST的抗體做熒光免疫印跡時(shí)，需要使用經(jīng)修改過(guò)的免疫印跡的操作流程。我們發(fā)現(xiàn)去除封閉步驟中的Tween?20去污劑（在TBS中只使用5%的脫脂奶粉）和在顯影前干燥膜是針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)流程做出的僅有的必要改變。詳細(xì)信息能夠在熒光Western免疫印跡操作步驟（一抗用BSA孵育）和熒光Western免疫印跡操作步驟（一抗用牛奶孵育）中找至iJ。另夕卜，PrestainedProteinMarker,BroadRange（PremixedFormat）