測定項目及方法

實驗測定項目及方法

好果率（%）=（好果數(shù)/果子統(tǒng)計總數(shù)）X100%以未發(fā)生病害果實硬度：

應用果實硬度計（GY-1型果實硬度計）。果實硬度計設計原理果實硬度是指水果單位面積（S）承受測力彈簧的壓力（N），它們的比值定義為果實硬度（P）。P=N/SP105帕或（公斤每平方里米）N—測力彈簧壓在果實面上的力N牛頓或（公斤S（平方厘米）GY-1果實硬度計使用方法測量前：轉動表盤，使驅動指針與表盤的第一條刻度線對齊（GY-1型的為刻度線2，GY-2和GY-3型的為刻度線0.5）；將待測水果削去1平方厘米左右的皮。測量：用手握硬度計，使硬度計垂直于被測水果表面，壓頭均勻壓入水果內，此時驅動指針開始驅動指示指針旋轉，當壓頭壓到刻度線（10毫米）度，取三次平均值。測量后：旋轉回零旋鈕，使指針復位到初始刻度線。電導率：電導率儀測定(DDS-12A型數(shù)字式電導率儀)使用方法：52卩S/cm20卩S/cm200S/cm、2mS/cm、20mS/cm,檔位數(shù)字為該擋的最大測量值，電導率儀超過此數(shù)字時不再顯示數(shù)字，應該換檔。使用高周時需同時按下20mS/cm及200S/cm200S/cm2S/cm時用DjS-10型Pt黑電極。極未浸入溶液時，按下2S/cm擋按鈕，用電容補償調節(jié)器調零。常數(shù)調節(jié)用調節(jié)器調節(jié)至與電容常數(shù)一致。25C。測定是將電極插入測定液，按下相應的檔位即可讀數(shù)。丙二醛含量：硫代巴比妥酸比色法公式：C(^mol/L)=6.45(A532-A600)-0.56A4。式中：A450、A532、A600分別代表450nm、532nm600nm樣品提取液中MDA中的含量。材料、儀器、試劑：材料：所選植物材料儀器：研缽、試管、可調加樣器、恒溫水浴鍋、冷凍離心機、分光光度計。試劑；1．5%三氯乙酸（TCA）。2.0.67%（W/V）硫代巴比妥酸（TBA）用10%的TCA配制。步驟：1.0.5g5%TCA5ml漿在3000r/min下離心10min。2ml0.67%TBA2ml，混合后在100C 水浴上煮沸30min,冷卻后再離心次。450nm、532nm600nm處的吸光度值。并按照公式算出MDA濃度。多酚氧化酶活性：多酚氧化酶活性；兒茶酚比色法器材與試劑、儀器：低溫離心機、s22pc分光光度計、試劑：兒茶酚、pH4.6磷酸緩沖液、材料：所用實驗材料實驗步驟：

0.52.5mLpH7.2PVP2.5mLpH7.2缽，合并提取液。C 5000rpm離心15分鐘，上清液即為粗酶液。2.5mLpH7.2磷酸緩沖液，1.5mL兒茶酚以及1mL粗酶液，空白調零以1mL磷酸緩沖液代替粗酶液。3．A值測定：加入粗酶液后迅速混勻，立刻于525nm下測定反應體系的A值，每隔30錄一次，共記錄5次。計算酶活力。按下式計算PPO活性=U/mingFWA值增加0.001定義為一個酶活力單位。計算所測PPOA材料：所用實驗材料。儀器：可見光分光光度計；離心機；研缽；容量瓶；量筒；試管；吸管。試劑：試劑：0.05mol/LpH5.5磷酸緩沖液；0.05mol/L愈創(chuàng)木酚；2%HO；20%三氯乙酸。2 2實驗步驟：（一）酶液的制備取5.0g洗凈去皮的實驗材料，放入研缽中。加適量的磷酸緩沖液研磨成勻漿。將3000rmp10min25ml容量瓶5ml2次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，低溫下保存?zhèn)溆?。（二）過氧化物酶活性測定酶活性測定的反應體系包：0.05mol/L磷酸緩沖液2.9ml，2%HO 2 20.05mol/L愈創(chuàng)木酚1.0ml1.0ml酶液。用加熱煮沸5min的酶液為對照，反應體系加入酶液后，立即于37C 水浴中保溫15min，然后迅速轉入冰浴中，并加入20%三氯乙2.0ml（或5000r/min離心10min），適當稀釋，470nm波長下測定吸光度。結果計算：以每分鐘A 變化0.01為1個過氧化物酶活性單位470（U）T過氧化物酶活性【U/（g min）]=（AA xV）T470s/（WxV x0.01xt）s式中：△A 為反應時間內吸光度的變化：W為實驗材料470鮮質量（g）；t為反應時間（min）；V為提取酶液總體積（ml）;V為測T s定時取用酶液體積（ml）。過氧化氫酶活性：紫外吸收法材料、儀器、試劑;材料：所用實驗材料儀器：研缽、離心機、250ml容量瓶、移液管（0.5ml、2ml各2支）、10ml試管3支、恒溫水浴、紫外分光光度計。0.2mol/LpH7.8磷酸緩沖液（1%聚乙烯吡咯烷酮）;0.1mol/LHO（使用前用0.1mol/L2 2高錳酸鉀標準液標定）實驗步驟：一）酶液提取0.5g2~3ml4C下預冷的pH7.8的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿，轉移至25ml容量瓶并定容至刻度?；旌暇鶆蚝髮⑷萘科恐?C10min，去上部清夜4000r/min下離心15min氧化氫酶粗體液，5C下保存?zhèn)溆谩６┟富钚詼y定取10ml試管3支，其中2支樣品測定管，1支為空白對照管，按下表順序加入試劑。

S1 S2S3粗酶液/ml 0.2 0.2 0.2pH7.8磷酸緩沖液/ml 1.5 1.5 1.5蒸餾水/ml 111S11min25C下預熱后，逐管加入0.3ml0.1mol/ml的出。2,

每加完一管立即計時，并迅速導入石英比色皿中，在240nm下測定吸光度，每間隔1min讀數(shù)一次，共測4min，待三支試管全部測完后，計算酶活性。以每分鐘A 減少0.1的酶量為1個酶活性單位240計算結果：過氧化物酶活性【U/(g min)】(△A XVJ/(0.1xVxt240 sxW)其中△

=A240

-(S1

+A )/2S2 S3/2式中：AS1為加入煮死酶液的對照管的吸光度； AS2、AS3為樣品測定管的吸光度；V為提取酶液總體積(ml);V測定時所用酶液總體積T s(ml)；W為樣品鮮重(g)；t為從加HO開始到最后一次讀數(shù)的時2 2間(min)；0.1為A 下降0.1時的1個酶活性單位(U)240SOD超氧化物歧化酶活力測定：材料、儀器、試劑：材料：所用實驗材料；器、熒光燈(反應試管處光照為4000Lx)、試管或指形管樹支試劑：1. 0.05mol/L磷酸緩沖液(7.8)130mmol/L1.9399g甲硫氨酸用磷酸緩沖液定容至100ml750mol/L氮藍四唑溶液稱0.06133gNBT用磷酸緩沖液定容至100ml，避光保存100卩mol/LEDTA—

溶液稱?取0.03721gEDTA—Na 用磷酸緩沖液定容至21000ml20卩 mol/L核黃素溶液稱取0.00753g核黃素用蒸餾水定容1000ml避光保存。實驗步驟：0.5g1ml5ml。取1.5~2.0ml于4000r/min下離心10min。上清液即為SOD粗提液。蒸餾水0.25液代替酶液總體積3.05ml4支，2蒸餾水0.25液代替酶液總體積3.0試劑（酶）用量/ml終濃度（比色時）0.05mol/L磷酸緩沖液1.5130mmol/L甲硫氨酸溶液0.313mmol/L750^mol/L氮藍四唑溶液0.375卩mol/L100^mol/LEDTA—Na2溶液0.310卩mol/L20mol/L核黃素溶液0.32.0卩mol/L酶液0.052支對照試管以緩沖1支對照管放在暗處，其他各4000Lx20min（各試管受光情況一致，溫度高時間縮短,低時延長）SOD活性測定至反映結束，以不光照的對照管做空白，分別測定其他各管的吸光度結果計算:SODNBT光化還原的為一個酶活性單位（U）表示，按下式計SOD總活性（U/g）（AC「

A）X V/-x1E1

xWx7,式中：A 為照光對照管的吸光度；A為樣品管的吸光度；VCK E為樣品液總體積；W樣品鮮重；V為測定適樣品用量t抗壞血酸含量的測定：（比色法）材料：所用實驗材料儀器：儀器：722型分光光度計、容量瓶、研缽、不銹鋼刀、具塞大試管試劑：1%草酸；2%草酸；30%硫酸鋅；15%?鐵氰化鉀；染料溶液（100mg2,6-二氯酚靛酚82mg60ml熱水中，過濾定100ml容量瓶中放入棕色試劑瓶于冰箱中。用時稀釋4倍，每ml約為0.1mg維生素C）；抗壞血酸標準溶液（0.05mg/ml）（100mg1%100ml5ml1%100ml）；（分析純）實驗步驟：60ml、1ml、2ml2.5ml、3ml4ml1%草酸補4ml2ml，隨即加入二甲5ml0.5min，靜置后二甲苯與水層分離，1cm500nm樣品提取去2g樣品放在研缽中，加入3ml2%草酸研磨至勻漿，將勻漿倒入100ml容量瓶中，殘渣用1%洗，都倒入容量瓶中，加入1ml30%硫酸鋅，搖動容量瓶，再加入1ml15%?鐵氰化鉀以除去脂溶性色素，再用1%草酸定容至刻度線，搖勻后過濾到干凈的燒杯中。測定取上述提取液4ml至具塞大試管中，依次加2ml5ml定吸光度結果計算：S每百克鮮樣的抗壞血酸含量(mg/100g=(Xx7JWxV)x100S式中：X-4ml提取液中含抗壞血酸的mg數(shù)；V-提取液總t體積；W-樣品鮮重；V測定用樣品體積S抗壞血酸過氧化物酶(AsA-POD)活性測定儀器：離心機、紫外分光光度計、研缽、試管試劑：50mmol/LKHPO—KHPO緩沖液（pH7.0,內含2 4 ? 41.0mol/LEDTA—Na）；0.3mmol/LAsA;20卩mol/L?AsA;0.06mmol/LH O2 2方法：1.0g1:3(W/V)加入50mmol/LK?

HPO4

—

P0緩沖液進? 。24000xg)10min,上清液做酶粗提取液供測定酶活性測定3ml反應混合液中含50mmol/LKHP0—KH P0pH7.00.1mmol/L2 4 2 4EDTA—Na,0.3mmol/LAsA,0.06mmol/LH0和2 2 20.1ml酶液。加入HO后立即在2C 下測定10~302 2秒內的A 變化，計算單位時間內AsA減少量及酶活性290谷胱甘肽含量測定主要材料：主要材料：實驗材料、還原性谷胱甘肽標準樣品、鄰苯二甲醛、蒸餾水。熒光分光光度計、離心機、電子天平。測定方法：1.標準溶液配置：精確稱取谷胱甘肽標準樣品100mg，用去離子水定容至100ml，轉移0.50ml、1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml到五100ml容量瓶中，再分別用去離子水定容至刻度。得到0.005、0.01、0.02、0.03、0.04（mg/ml）100ml（臨用現(xiàn)配）。鄰苯二甲醛溶液配置：將50mg鄰苯二甲醛溶解在甲醇中配成1.0%的溶液，放入4C 的冰箱中備用標準曲線制作：365nm390~500nm之間進行419.5nm值，設定數(shù)據(jù)刻度和本底扣除值，將儀器選擇為濃度測試功能，將配置好的標準GSH溶液用419.5nm作為發(fā)射波長、帶寬為3nm，測定熒光值，制作標準曲線。樣品的預處理：10g10min上清液中加入25%的HPO3溶液，供絡合反應用絡合反應：室溫下，用移液管移取2ml樣液在比色管中，再用另一移液管取2ml鄰苯二甲醛溶液，再加入0.2mlPH=8的磷酸緩沖液，在暗處反映1min定熒光強度。谷胱甘肽還原酶活性：GR舌性1.酶液的提?。悍Q取研磨成粉狀的組織材料0.5g,5mL50mmol/LTris-HCl提取液(pH7.0,其中含有20%(V/V)的甘油,1mmol/LAsA,1mmol/LEDTA,1mmol/L-1DTT和5mmo