外源基因的表達(dá)

外源基因的表達(dá)第一頁，共五十四頁，2022年，8月28日

基因重組的主要目的使目的基因在某一細(xì)胞中能得到高效表達(dá)，即產(chǎn)生人們所需要的高產(chǎn)的目的基因產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)、多肽類生物藥物。第二頁，共五十四頁，2022年，8月28日基因工程技術(shù)的核心——基因表達(dá)技術(shù)?；虮磉_(dá)——是指結(jié)構(gòu)基因在調(diào)控序列的作用下轉(zhuǎn)錄成mRNA，經(jīng)加工后在核糖體的協(xié)助下又轉(zhuǎn)譯出相應(yīng)的基因產(chǎn)物——蛋白質(zhì)，再在受體細(xì)胞環(huán)境中經(jīng)修飾而顯示出相應(yīng)的功能。從基因到有功能的產(chǎn)物這整個轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯及所有的加工過程就是基因表達(dá)的過程，它是在一系列酶和調(diào)控序列的共同作用下完成的。第三頁，共五十四頁，2022年，8月28日基因表達(dá)在原核生物與真核生物中的差別（1）原核生物表達(dá)系統(tǒng)基因表達(dá)是以操縱子的形式進(jìn)行的。當(dāng)操縱子的調(diào)節(jié)基因與RNA聚合酶作用時，結(jié)構(gòu)基因則開始轉(zhuǎn)錄成相應(yīng)的mRNA;與此同時，mRNA立即與核糖體結(jié)合轉(zhuǎn)譯出相應(yīng)的多肽或蛋白質(zhì)，轉(zhuǎn)錄完畢時轉(zhuǎn)譯也完成，隨之mRNA也被水解掉。第四頁，共五十四頁，2022年，8月28日基因操縱子調(diào)節(jié)系統(tǒng)示意圖

調(diào)節(jié)基因

啟動基因

操縱基因結(jié)構(gòu)基因

DNA

轉(zhuǎn)錄

（-）

RNA聚合酶（+）轉(zhuǎn)錄

翻譯

mRNA

翻譯

阻遏蛋白

蛋白質(zhì)

誘導(dǎo)劑

控制區(qū)信息區(qū)操縱子第五頁，共五十四頁，2022年，8月28日（2）真核生物基因表達(dá)系統(tǒng)轉(zhuǎn)錄是在核內(nèi)進(jìn)行的，先生成hnRNA，再加工去掉內(nèi)含子，外顯子相連接，并修飾5′和3′末端后才形成成熟的、有功能的mRNA。mRNA只能在細(xì)胞質(zhì)中的核糖體上轉(zhuǎn)譯成多肽或蛋白質(zhì)，再經(jīng)過加工、糖化，形成高級結(jié)構(gòu)。第六頁，共五十四頁，2022年，8月28日第三節(jié)外源基因表達(dá)系統(tǒng)外源基因表達(dá)系統(tǒng)：泛指目的基因與表達(dá)載體重組后，導(dǎo)入合適的受體細(xì)胞，并能在其中有效表達(dá)，產(chǎn)生目的基因產(chǎn)物（目的蛋白）。外源基因表達(dá)系統(tǒng)基因表達(dá)載體受體細(xì)胞第七頁，共五十四頁，2022年，8月28日基因表達(dá)系統(tǒng)原核生物基因表達(dá)系統(tǒng)：如大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)、芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)、鏈霉菌表達(dá)系統(tǒng)、藍(lán)藻表達(dá)系統(tǒng)等。真核生物基因表達(dá)系統(tǒng)：如酵母表達(dá)系統(tǒng)、植物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)、哺乳動物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)等。第八頁，共五十四頁，2022年，8月28日原核生物作為基因表達(dá)系統(tǒng)的受體細(xì)胞所具有的特點：

原核生物多為單細(xì)胞異養(yǎng)，生長快，代謝易于控制，可通過發(fā)酵迅速獲得大量基因表達(dá)產(chǎn)物?；蚪M結(jié)構(gòu)簡單，便于基因操作和分析。多數(shù)原核生物細(xì)胞內(nèi)含有質(zhì)?；蚴删w，便于構(gòu)建相應(yīng)的表達(dá)載體。

生理代謝途徑及基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制比較清楚。不具備真核生物的蛋白質(zhì)加工系統(tǒng)，表達(dá)產(chǎn)物無特定的空間構(gòu)象。

內(nèi)源蛋白酶會降解表達(dá)的外源蛋白，造成表達(dá)產(chǎn)物的不穩(wěn)定。第九頁，共五十四頁，2022年，8月28日一、大腸桿菌基因表達(dá)系統(tǒng)大腸桿菌——是一種革蘭氏陰性細(xì)菌，其遺傳背景清楚，目標(biāo)基因表達(dá)的水平高，培養(yǎng)周期短。目前大多數(shù)外源基因都是以大腸桿菌為受體系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)的，是目前應(yīng)用最廣泛的基因表達(dá)系統(tǒng)。第十頁，共五十四頁，2022年，8月28日大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)越性：①已經(jīng)掌握了十分豐富的有關(guān)大腸桿菌基礎(chǔ)生物學(xué)、遺傳學(xué)以及分子生物學(xué)等方面的背景知識，特別是對其基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)理有了深刻的了解；②大腸桿菌已被發(fā)展成為一種安全的基因工程實驗體系，擁有各類適用的寄主菌株和不同類型的載體系列；③實驗已經(jīng)證明，許多克隆的真核基因都可以在大腸桿菌細(xì)胞中實現(xiàn)有效的、高水平的表達(dá)；④大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡單、成本低廉，易于進(jìn)行工業(yè)化批量生產(chǎn)。第十一頁，共五十四頁，2022年，8月28日大腸桿菌基因表達(dá)載體可分為3個系統(tǒng)：DNA復(fù)制及重組載體的選擇系統(tǒng)（復(fù)制子、選擇標(biāo)記）外源目的基因的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)蛋白質(zhì)的翻譯系統(tǒng)1、大腸桿菌基因表達(dá)載體第十二頁，共五十四頁，2022年，8月28日（1）DNA復(fù)制及重組載體的選擇系統(tǒng)①復(fù)制子復(fù)制子：是一段包含復(fù)制起始位點（ori）和反式因子作用區(qū)在內(nèi)的DNA片段。大腸桿菌基因表達(dá)載體一般是質(zhì)粒表達(dá)載體，含有能在大腸桿菌中有效復(fù)制的復(fù)制子。第十三頁，共五十四頁，2022年，8月28日常見的復(fù)制子pMB1、p15A、ColE1：松弛復(fù)制型，每細(xì)胞質(zhì)?？截悢?shù)10～20個。pSC101：嚴(yán)謹(jǐn)復(fù)制型，每細(xì)胞質(zhì)?？截悢?shù)少于5個。在同一大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)，含同一類型復(fù)制子的不同質(zhì)粒載體不能共存含不同類型復(fù)制子的不同質(zhì)粒載體可以共存第十四頁，共五十四頁，2022年，8月28日②選擇標(biāo)記目的：使轉(zhuǎn)化體產(chǎn)生新的表型，將轉(zhuǎn)化了的細(xì)胞從大量的菌群中分離出來。微生物表型選擇標(biāo)記顯性標(biāo)記營養(yǎng)缺陷型標(biāo)記第十五頁，共五十四頁，2022年，8月28日在基因克隆中絕大多數(shù)的質(zhì)粒載體都是使用抗菌素抗性記號，并且主要集中在氨芐青霉素抗性、四環(huán)素抗性、鏈霉素抗性、氯霉素抗性以及卡那霉素抗性等少數(shù)幾種抗菌素抗性記號上。其原因一方面是由于許多質(zhì)粒本身就是帶有抗菌素抗性基因的抗藥性R因子；另一方面則是因為抗菌素抗性記號具有便于操作、易于選擇等優(yōu)點。第十六頁，共五十四頁，2022年，8月28日第十七頁，共五十四頁，2022年，8月28日大腸桿菌表達(dá)載體上一般都帶有一個以上的抗生素抗性基因。表達(dá)載體上的抗藥性基因賦予宿主特定的抗藥性，使其能在抗生素的培養(yǎng)條件下正常生長。這樣就可以篩除掉不含載體的宿主，同時保證載體在宿主中的穩(wěn)定存在。在構(gòu)建大腸桿菌表達(dá)載體的過程中，選擇何種抗生素抗性基因，還必須考慮到是否會對特定宿主細(xì)胞的代謝活動產(chǎn)生影響。第十八頁，共五十四頁，2022年，8月28日（2）外源目的基因的轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)這一系統(tǒng)包括啟動子、抑制物基因和終止子。啟動子和終止子因宿主的不同而有差別，往往在不同的宿主中表達(dá)的效率也不一樣，特別是原核生物和真核生物宿主間完全不同，相互間不能通用。第十九頁，共五十四頁，2022年，8月28日①啟動子啟動子（promotor）：是一段能被宿主RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合并指導(dǎo)目的基因轉(zhuǎn)錄的DNA序列，是基因表達(dá)調(diào)控的重要元件。外源目的基因轉(zhuǎn)錄的起始是基因表達(dá)的關(guān)鍵步驟。選擇可調(diào)控的強(qiáng)啟動子是構(gòu)建一個理想的表達(dá)系統(tǒng)首先要考慮的問題。第二十頁，共五十四頁，2022年，8月28日啟動子位于基因的上游，其序列的長度因生物的種類而異。當(dāng)RNA聚合酶定位并結(jié)合到啟動子序列上時，便可啟動基因的轉(zhuǎn)錄。調(diào)節(jié)基因

啟動基因結(jié)構(gòu)基因

DNA

RNA聚合酶

轉(zhuǎn)錄

mRNA

翻譯

蛋白質(zhì)第二十一頁，共五十四頁，2022年，8月28日外源基因在強(qiáng)啟動子的控制下容易發(fā)生轉(zhuǎn)錄過頭的現(xiàn)象，形成長短不一的mRNA混合物，而過長的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物不僅會影響到mRNA的翻譯效率,同時也會使外源基因的轉(zhuǎn)錄速度大大降低，從而影響目的蛋白的翻譯效率。因此，在構(gòu)建表達(dá)載體的時候一般采用強(qiáng)的啟動子和強(qiáng)的終止子，以達(dá)到高效表達(dá)的目的。第二十二頁，共五十四頁，2022年，8月28日②抑制物基因抑制物基因的產(chǎn)物是一種控制啟動子功能的蛋白質(zhì)，對啟動子的起始轉(zhuǎn)錄功能產(chǎn)生抑制作用。在適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)條件下可使抑制物失活，啟動子功能重新恢復(fù)。第二十三頁，共五十四頁，2022年，8月28日通過抑制物基因產(chǎn)物可使目的基因在宿主培養(yǎng)到最佳狀態(tài)時進(jìn)行轉(zhuǎn)錄，從而保證轉(zhuǎn)錄的有效進(jìn)行，特別是表達(dá)產(chǎn)物對宿主有害時，控制轉(zhuǎn)錄的時機(jī)尤其重要。理想的可調(diào)控的啟動子在細(xì)胞生長的初期往往不表達(dá)或低水平表達(dá)，而當(dāng)細(xì)胞增殖到一定的密度后，在某種特定的誘導(dǎo)因子（如光、溫度或化學(xué)藥物等）的誘導(dǎo)下，RNA聚合酶才開始啟動轉(zhuǎn)錄，合成mRNA。第二十四頁，共五十四頁，2022年，8月28日③轉(zhuǎn)錄終止子轉(zhuǎn)錄終止子（terminator）：是一段終止RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄的DNA序列。轉(zhuǎn)錄終止子的功能：一方面，它使轉(zhuǎn)錄在目的基因之后立即停止，避免多余的轉(zhuǎn)錄以節(jié)省宿主內(nèi)RNA的合成底物，提高目的基因的轉(zhuǎn)錄量；另一方面，正常轉(zhuǎn)錄終止子的存在能夠防止產(chǎn)生不必要的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，有效地控制目的基因mRNA的長度，提高mRNA的穩(wěn)定性，避免質(zhì)粒上其它基因的異常表達(dá)。第二十五頁，共五十四頁，2022年，8月28日（3）蛋白質(zhì)的翻譯系統(tǒng)在原核生物中影響翻譯起始的因素有：起始密碼子、核糖體結(jié)合位點（SD序列）、起始密碼子與SD序列之間的距離和堿基組成、mRNA的二級結(jié)構(gòu)、mRNA上游的5′端非翻譯序列和蛋白編碼區(qū)的5′端序列等。例如：起始密碼子與SD序列之間的距離：6～8bp，多數(shù)為7bpSD序列后面的堿基組成：為AAAA或UUUU時，翻譯起始效率最高；為CCCC或GGGG是，翻譯起始效率分別為最高的50%和15%。第二十六頁，共五十四頁，2022年，8月28日蛋白質(zhì)的翻譯系統(tǒng)核糖體結(jié)合位點（SD序列）翻譯起始密碼子翻譯終止密碼子第二十七頁，共五十四頁，2022年，8月28日①核糖體結(jié)合位點核糖體結(jié)合位點：是指原核基因轉(zhuǎn)錄起始位點下游的一段DNA序列，即Shine-Dalgarno序列（簡稱SD序列）。SD序列與核糖體16SrRNA特異配對而與宿主核糖體結(jié)合，它對mRNA的翻譯起著決定性的作用。核糖體與mRNA的結(jié)合程度越強(qiáng)，翻譯的起始效率越高，而核糖體與mRNA的結(jié)合程度主要取決于SD序列與核糖體16SrRNA堿基的互補(bǔ)性，因此，在構(gòu)建表達(dá)載體時，要盡可能使SD序列與16SrRNA序列互補(bǔ)配對。第二十八頁，共五十四頁，2022年，8月28日大腸桿菌SD序列的堿基組成為5′AGGAGG3′,其中以GGAG四個堿基最為重要，這四個堿基中的任何一個發(fā)生突變都會引起翻譯效率的大幅度下降。第二十九頁，共五十四頁，2022年，8月28日②翻譯起始密碼子起始密碼子是翻譯的起始位點，通常為AUG（ATG），編碼甲硫氨酸（MET），是首選的起始密碼子。也有極少數(shù)生物利用其它密碼子作為翻譯的起始位點，如GUG、UUG等。第三十頁，共五十四頁，2022年，8月28日③翻譯終止密碼子翻譯終止密碼子與核糖體相遇時，能使核糖體從mRNA模板上脫落下來，終止蛋白質(zhì)的翻譯過程。在大腸桿菌中，合成多肽鏈的釋放由RF1和RF2兩個釋放因子所調(diào)控，RF1識別終止密碼UAA和UAG，而RF2識別終止密碼UAA和UGA，由于UAA同時為兩個釋放因子所識別，一般被選作翻譯的終止密碼。第三十一頁，共五十四頁，2022年，8月28日在實際應(yīng)用中，為了保證翻譯的有效終止，通常將幾個終止密碼串連在一起。具報道，在大腸桿菌中以四個核苷酸組成的順式序列UAAU作為終止密碼，可有效地終止多肽鏈的合成。第三十二頁，共五十四頁，2022年，8月28日不同生物基因組甚至是同種生物不同蛋白質(zhì)的基因，所用的密碼子都具有一定的選擇性。有的密碼子在一種基因組中使用的頻率高，被稱為主密碼子，而在另一種基因組中使用的頻率較低，被稱為罕用密碼子。如果外源目的基因mRNA的主密碼子和受體細(xì)胞基因組的主密碼子相同或接近，則該基因的表達(dá)效率就高；反之，若外源基因含有較多的罕用密碼子，其表達(dá)水平就低。因此，在構(gòu)建大腸桿菌表達(dá)載體時，要考慮所表達(dá)基因的種類和性質(zhì)，或?qū)ν庠椿虻膲A基進(jìn)行適當(dāng)置換，或?qū)寺≥d體上的調(diào)控序列進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。第三十三頁，共五十四頁，2022年，8月28日2、宿主菌重組異源蛋白在大腸桿菌中不穩(wěn)定的原因：大腸桿菌缺乏復(fù)雜的翻譯后加工和蛋白質(zhì)折疊系統(tǒng)大腸桿菌不具備類似真核細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)和表達(dá)產(chǎn)物穩(wěn)定因子大量的異源重組蛋白在大腸桿菌細(xì)胞中形成高濃度的微環(huán)境，導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子之間的作用增強(qiáng)。第三十四頁，共五十四頁，2022年，8月28日為了使外源基因高效表達(dá)，必須構(gòu)建作為基因表達(dá)受體菌的大腸桿菌工程菌。常見的大腸桿菌基因表達(dá)受體菌株第三十五頁，共五十四頁，2022年，8月28日3、常見的大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)（了解）Lac和Tac表達(dá)系統(tǒng)：是以lac操縱子調(diào)控機(jī)制為基礎(chǔ)設(shè)計和構(gòu)建的表達(dá)系統(tǒng)。PL和PR表達(dá)系統(tǒng)：是以λ噬菌體早期轉(zhuǎn)錄啟動子PL和PR構(gòu)建的。T7表達(dá)系統(tǒng)：是利用大腸桿菌T7噬菌體轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)元件構(gòu)建的表達(dá)系統(tǒng)，它具有很高的表達(dá)能力。第三十六頁，共五十四頁，2022年，8月28日（2）外源基因在大腸桿菌表達(dá)的形式外源基因在大腸桿菌中的表達(dá)產(chǎn)物：存在部位：細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞周質(zhì)或細(xì)胞外培養(yǎng)基中；表達(dá)形式：不溶性蛋白和可溶性蛋白兩種。第三十七頁，共五十四頁，2022年，8月28日①

包涵體蛋白包涵體：在一定條件下，外源基因的表達(dá)產(chǎn)物在大腸桿菌中積累并致密地集中在一起形成無膜的裸露結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)稱為包涵體。包涵體存在部位：細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞周質(zhì)包涵體熒光圖第三十八頁，共五十四頁，2022年，8月28日包涵體的組成蛋白質(zhì)非蛋白質(zhì)外源基因的表達(dá)產(chǎn)物：占大部分，具有正確的氨基酸序列，但空間構(gòu)象錯誤，因而包涵體蛋白一般沒有生物學(xué)活性。受體細(xì)胞本身的表達(dá)產(chǎn)物：如RNA聚合酶、核糖核蛋白、外膜蛋白以及表達(dá)載體編碼的蛋白等。：包括DNA、RNA和脂多糖等。第三十九頁，共五十四頁，2022年，8月28日包涵體形成的本質(zhì)——是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的不斷集聚，主要包括三個方面：①折疊狀態(tài)的蛋白質(zhì)的集聚作用；②非折疊狀態(tài)的蛋白質(zhì)的集聚作用；③蛋白質(zhì)折疊中間體的作用。第四十頁，共五十四頁，2022年，8月28日以包涵體形式表達(dá)的外源蛋白最突出的優(yōu)點是：易于分離純化。因為包涵體的水難溶性和密度遠(yuǎn)大于其他蛋白，通過高速離心即可將包涵體蛋白與其他蛋白區(qū)分開來；對蛋白酶表現(xiàn)出好的抗性。第四十一頁，共五十四頁，2022年，8月28日②

融合蛋白融合蛋白——將外源蛋白基因與受體菌自身蛋白基因重組在一起，但不改變兩個基因的閱讀框，以這種方式表達(dá)的蛋白稱為融合蛋白。*融合蛋白與單獨表達(dá)的外源蛋白相比具有以下優(yōu)點：①穩(wěn)定性好；②表達(dá)效率高；③較易于分離純化。第四十二頁，共五十四頁，2022年，8月28日③

寡聚型外源蛋白為提高外源蛋白表達(dá)量，在構(gòu)建外源蛋白表達(dá)載體時，將多個外源目的蛋白基因串連在一起，克隆在質(zhì)粒載體上，以這種方式表達(dá)的外源蛋白稱為寡聚型外源蛋白。第四十三頁，共五十四頁，2022年，8月28日多表達(dá)單元的重組：每個表達(dá)單元都含獨立的啟動子、終止子、SD序列、起始密碼和終止密碼，形成獨立轉(zhuǎn)錄與串連翻譯的表達(dá)單元。表達(dá)的外源蛋白不需經(jīng)過裂解處理。該方式適合表達(dá)相對分子質(zhì)量較大的蛋白。多順反子重組：多拷貝外源基因有各自的SD序列、翻譯起始和終止信號，但轉(zhuǎn)錄是在共同的轉(zhuǎn)錄啟動子和終止子控制下進(jìn)行的，表達(dá)的外源蛋白分子是相互獨立的。該方式適合表達(dá)中等大小分子量的外源蛋白。多編碼序列重組：將多個外源基因串連在一起，利用同一套轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件、翻譯起始與終止密碼子，在各編碼序列的接口引入蛋白酶酶切位點或可被化學(xué)斷裂的位點。該方式特別適合表達(dá)外源小分子蛋白或多肽。外源基因多分子線性重組的方式通常有三種：第四十四頁，共五十四頁，2022年，8月28日④

整合型外源蛋白為防止外源基因隨質(zhì)粒丟失，將要表達(dá)的外源基因整合到染色體的非必需編碼區(qū)上，使之成為染色體結(jié)構(gòu)的一部分而穩(wěn)定地遺傳，以此種方式表達(dá)的外源蛋白即為整合型外源蛋白。實現(xiàn)外源基因與宿主染色體整合是根據(jù)DNA同源交換的原理，因此在待整合的外源基因兩側(cè)必須分別組合一段與染色體DNA完全同源的序列。此外，還必須將可控的表達(dá)元件和選擇標(biāo)記基因連接在一起。第四十五頁，共五十四頁，2022年，8月28日為獲得含整合基因的重組體，被選擇的載體一般是那些在受體細(xì)胞內(nèi)不能自主復(fù)制或溫度敏感型質(zhì)粒。當(dāng)外源基因被交換到染色體上后，由于宿主菌的不斷分裂和增殖，細(xì)胞內(nèi)的質(zhì)粒逐漸被稀釋直至消失。外源基因整合到染色體上后雖只含有單拷貝，但在合適的條件下仍能高效表達(dá)外源蛋白。第四十六頁，共五十四頁，2022年，8月28日⑤

分泌型外源蛋白外源基因的表達(dá)產(chǎn)物，通過運(yùn)輸或分泌的方式穿過細(xì)胞的外膜進(jìn)入培養(yǎng)基中，即為分泌型外源蛋白。外源蛋白以分泌型蛋白表達(dá)時，須在N端加入15～30個氨基酸組成的信號肽（signalpeptides）序列。信號肽N端的最初幾個氨基酸為極性氨基酸，中間和后部為疏水氨基酸，它們對蛋白質(zhì)分泌到細(xì)胞膜外起決定性作用。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)分泌到位于大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)膜與外膜之間的外周質(zhì)時，信號肽被信號肽酶所切割。第四十七頁，共五十四頁，2022年，8月28日②分泌到細(xì)胞外周質(zhì)的蛋白質(zhì)產(chǎn)物較穩(wěn)定，不易被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶所降解。③簡化了發(fā)酵后處理的純化工藝。缺點：外源蛋白分泌型表達(dá)通常產(chǎn)量不高，有時信號肽不被切割或在不適當(dāng)?shù)奈恢冒l(fā)生切割。①分泌型可能使蛋白質(zhì)按適當(dāng)?shù)姆绞秸郫B，有利于形成正確的空間構(gòu)相，獲得有較好生物學(xué)活性或免疫原性的蛋白質(zhì)。甚至有些在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時無活性的蛋白質(zhì)分泌后則有活性。以分泌型蛋白的形式表達(dá)外源基因的優(yōu)點：第四十八頁，共五十四頁，2022年，8月28日5、在大腸桿菌中高效表達(dá)目的基因的策略高效表達(dá)外源基因須考慮的基本原則：