Agilent定量分析講義

第七章定量基礎(chǔ)

BBBBB=基線BVBV=峰谷點(diǎn)B

PBP=基線滲透BHHH=水平基線(基線漂移）各種積分事件校正（定量） 校正即是利用某個(gè)峰的峰高或峰面積來(lái)確定其對(duì)應(yīng)組分的濃度或含量 當(dāng)檢測(cè)器靈敏度針對(duì)不同的組分而變化；及檢測(cè)器對(duì)同一組分不同含量響應(yīng)值發(fā)生變化時(shí)須做校正校正方法*面積百分比法AREA%

*峰高百分比法HEIGHT%

歸一化法NORM%

外標(biāo)法ESTD

內(nèi)標(biāo)法ISTD*不是校正方法面積百分比法AREA% AREA(pk)AREA%= x100%AREA(pk) 假定檢測(cè)器響應(yīng)都相同所有組分都流出所有組分都被檢測(cè)到優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)無(wú)需做校正 以上所有的假定簡(jiǎn)單、快速的定量過(guò)程 需測(cè)量所有的組分進(jìn)樣量不要求嚴(yán)格 所有的面積都必須準(zhǔn)確校正因子絕對(duì)響應(yīng)時(shí)間RF=含量/面積校正檢測(cè)器響應(yīng)與組分的含量及其它組分的存在無(wú)關(guān)含量 100 100200面積 3000 2500 4000歸一化法(NORM) RF(pk)xAREA(pk) NORM%= x100%[RF(pk)xAREA(pk)] 假定所有組分都流出所有組分都被檢測(cè)到優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)簡(jiǎn)單、快速的定量過(guò)程 所有組分峰都要流出進(jìn)樣量不要求嚴(yán)格 需測(cè)量所有的組分 必須校正所有的峰

外標(biāo)法（ESTD） 含量＝面積(pk)xRF(pk) 優(yōu)點(diǎn) 校正檢測(cè)器的響應(yīng) 只對(duì)欲分析的組分峰做校正 無(wú)需所有峰都能被檢測(cè)到 缺點(diǎn) 進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確 儀器必須有良好的穩(wěn)定性 需定期做再校正外標(biāo)法校正過(guò)程首先準(zhǔn)備一個(gè)混合標(biāo)樣，其中感興趣組分的濃度須準(zhǔn)確知道運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)樣品建立校正表運(yùn)行待測(cè)樣品并使用校正表分析它需要時(shí)進(jìn)行再校正單級(jí)校正對(duì)每一峰只做一次校正單級(jí)校正中做了如下假設(shè)： 響應(yīng)因子不會(huì)因?yàn)槟撤鍖?duì)應(yīng)物質(zhì)的含量 變化而發(fā)生變化 響應(yīng)曲線須通過(guò)原點(diǎn)含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值

A或HA(istd)或H(istd)多級(jí)校正對(duì)每一峰需做至少兩次校正可以補(bǔ)償檢測(cè)器對(duì)不同含量的樣品組分而給出 非線性響應(yīng)。響應(yīng)曲線可以不通過(guò)原點(diǎn)定量分析多級(jí)校正過(guò)程首先準(zhǔn)備一個(gè)混合標(biāo)樣，其濃度應(yīng)高于欲分析物 的濃度將濃標(biāo)樣等梯度稀釋，其中最低濃度低于待測(cè)物的濃度運(yùn)行每一級(jí)稀釋好的標(biāo)樣在每一級(jí)上進(jìn)行校正運(yùn)行待測(cè)樣品并使用校正表分析它需要時(shí)進(jìn)行再校正線性擬合（最小二乘法）含量響應(yīng)值(A或H)點(diǎn)到點(diǎn)校正曲線含量響應(yīng)值(A或H)非線性擬合含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值(A或H)含量響應(yīng)值(A或H)內(nèi)標(biāo)法（ISTD）

RF(pk)面積(pk)含量＝

RF(ISTD)面積(ISTD)優(yōu)點(diǎn)進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求.內(nèi)標(biāo)的加入消除了由于進(jìn)樣量、儀器不穩(wěn)定等因素帶來(lái)的系統(tǒng)誤差。只對(duì)欲分析的組分峰做校正缺點(diǎn)必須加一個(gè)組分進(jìn)到樣品，易增加面積測(cè)量誤差。*內(nèi)標(biāo)含量=*內(nèi)標(biāo)含量面積(pk)面積(ISTD)RF’選擇內(nèi)標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)樣品中不存在化學(xué)性質(zhì)與樣品相似與樣品有相同的濃度范圍不會(huì)與樣品發(fā)生反應(yīng)在感興趣組分附近流出*可得到分離良好的、干凈利落的峰色譜性質(zhì)穩(wěn)定可迅速容易得到定量方法總結(jié) 優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn)AREA% 無(wú)需校正 檢測(cè)器的響應(yīng)必須一致 進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求 所有組分峰都須流出 所有組分峰都須被檢測(cè)到 所有面積都須準(zhǔn)確NORM% 進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求 所有組分峰都須流出 所有組分峰都須測(cè)定 必須校正所有的峰ESTD 校正檢測(cè)器的響應(yīng) 進(jìn)樣量必須準(zhǔn)確 只對(duì)感興趣峰做校正 儀器需有很好穩(wěn)定性 無(wú)需所有峰都流出 無(wú)需所有峰都被檢測(cè)到

ISTD 進(jìn)樣量不嚴(yán)格要求 必須在所有樣品中加入 只對(duì)感興趣峰做校正 一個(gè)組分 校正檢測(cè)器的響應(yīng) 樣品和標(biāo)樣的準(zhǔn)備工作 更加復(fù)雜本章將學(xué)到:如何設(shè)置并調(diào)試定量數(shù)據(jù)如何編輯定量結(jié)果如何產(chǎn)生定量報(bào)告定量數(shù)據(jù)分析步驟3:查找限定離子步驟2:保留時(shí)間窗口內(nèi)查找目標(biāo)離子步驟1:在信號(hào)窗口內(nèi)查找峰積分化學(xué)工作站定量概念分析標(biāo)準(zhǔn)物分析未知物建立標(biāo)準(zhǔn)曲線由曲線計(jì)算含量ResponseAmountStd1UnknownUnknownamtUnknownresponseStd2定量過(guò)程連同校正表下載方法文件.下載第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)文件選擇

Calibrate/SetUpQuantitation.設(shè)置定量數(shù)據(jù)資料選擇Calibrate/SetUpQuantitation...定量數(shù)據(jù)資料表參考峰窗口：用于內(nèi)標(biāo)非參考縫窗口：用于其它化合物相關(guān)窗口：允許目標(biāo)離子與限定離子的保留時(shí)間之差默認(rèn)值+/-：峰起點(diǎn)與終點(diǎn)須在此范圍內(nèi)濃度單位內(nèi)標(biāo)濃度是否用RTE積分單擊"InsertAbove"輸入化合物輸入化合物(續(xù))內(nèi)標(biāo)指令用于:增加新級(jí)別級(jí)別再校正刪除級(jí)別更新校正表10。00010。000再校正分別選擇對(duì)濃度和保留時(shí)間是否再校正分別對(duì)濃度和保留時(shí)選擇再校正的方式（取代或平均）選擇再校正的級(jí)別選擇Recalibrate化合物信息-第1頁(yè)化合物信息-第2頁(yè)化合物信息-第3頁(yè)校正曲線校正曲線自動(dòng)定量數(shù)據(jù)庫(kù)定量報(bào)告選項(xiàng)“MultiView”窗口結(jié)果演示交叉定量1.選擇Method/EditMethod...2.選定"QuantReport"3.選定報(bào)告格式和目的地4.保存方法!!自動(dòng)生成定量報(bào)告使用Qedit手動(dòng)再積分當(dāng)前數(shù)據(jù)聲明顯示在所有報(bào)告中!修改數(shù)據(jù)狀態(tài)使用下列工具:TraceModeQuantLocateaPeak/LocateallCompoundsEasyID如果peaks/限定離子找不到,檢查:1.積分2.數(shù)據(jù)文件中的質(zhì)量數(shù)3.時(shí)間范圍4.信號(hào)相關(guān)窗口如果出現(xiàn)奇怪的校準(zhǔn)曲線,檢查:1.數(shù)量2.積分事件3.響應(yīng)定量數(shù)據(jù)庫(kù)故障排除查找峰/查找所有化合物修正保留時(shí)間校正離子比率設(shè)置信號(hào)萃取窗口EasyID點(diǎn)擊Quantitate/TraceModeQuant對(duì)痕量樣品進(jìn)行處理，列出所有相關(guān)化合物和內(nèi)標(biāo)的定量過(guò)程詳細(xì)資料TraceModeQuant當(dāng)每個(gè)化合物的變化相一致時(shí)