實驗二環(huán)境中的微生物

實驗二環(huán)境中的微生物第一頁，共二十六頁，2022年，8月28日概述

因為微生物是肉眼看不見的，所以大家常常忽略一些經(jīng)常接觸的微生物。比如：室內(nèi)外的空氣、水、土壤；試驗臺面、椅子以及皮膚、頭發(fā)、口腔等等。這些菌群大多屬于正常菌群，與人們朝夕相處，但有些時候也能引起傳染（條件致病菌），因此大家在以后的學(xué)習(xí)與實驗中一定要特別注意操作步驟。第二頁，共二十六頁，2022年，8月28日實驗室環(huán)境和人體表面微生物的檢查一、實驗?zāi)康淖C明實驗室環(huán)境和人體表面存在微生物；比較來自不同場所與不同條件下細(xì)菌的數(shù)量與類型；觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征；體會無菌操作的重要性。第三頁，共二十六頁，2022年，8月28日二、實驗原理什么叫菌落？

平板培養(yǎng)基含有細(xì)菌生長所需要的營養(yǎng)成分，當(dāng)取自不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在適宜的條件下，1～2d內(nèi)每一個菌體能通過細(xì)胞分裂（2n）而進(jìn)行繁殖，形成一個肉眼可見的有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞的群落,稱為菌落。第四頁，共二十六頁，2022年，8月28日每一種菌落都有它自己的特征（如大小、形狀、邊緣、表面、質(zhì)地、顏色等），是衡量菌種純度、辨認(rèn)和鑒定菌種的重要依據(jù)?？赏ㄟ^平板培養(yǎng)來檢查環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量和類型。第五頁，共二十六頁，2022年，8月28日菌落的形態(tài)結(jié)構(gòu)、大小、色澤、透明度、黏稠度、色素及邊緣情況等，因各種細(xì)菌而異。每一種細(xì)菌保持有一定的菌落特征，這些菌落特征的區(qū)別點都可作為鑒別細(xì)菌的依據(jù)之一。菌落特征為有呈圓形、凸起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤、有卵黃中心、直徑2～3mm、不透明菌落、周圍為一混濁帶，外層有一透明帶。第六頁，共二十六頁，2022年，8月28日第七頁，共二十六頁，2022年，8月28日細(xì)菌、酵母菌不形成菌絲，其菌落僅生長在固體培養(yǎng)基表面，可用接種工具將其全部挑起，即與培養(yǎng)基結(jié)合不緊密；而放線菌、霉菌的菌體大多分化為營養(yǎng)菌絲與繁殖菌絲，其營養(yǎng)菌絲深入培養(yǎng)基中吸取營養(yǎng)，故具有與培養(yǎng)基結(jié)合較緊，不易挑起等特征。第八頁，共二十六頁，2022年，8月28日三、儀器與材料1.牛肉膏蛋白胨瓊脂平板（2個/人）、肥皂、標(biāo)簽紙、記號筆。2.儀器培養(yǎng)箱、酒精燈（1個/組）、滅菌棉簽、接種環(huán)等。第九頁，共二十六頁，2022年，8月28日四、操作步驟（一）寫標(biāo)簽

在各自的培養(yǎng)皿皿底上貼上標(biāo)簽，標(biāo)明樣品來源、姓名、日期。注意不要貼在中間！第十頁，共二十六頁，2022年，8月28日1.空氣中細(xì)菌的檢查（老師準(zhǔn)備）2.實驗臺上細(xì)菌的檢查3.手指上細(xì)菌的檢查4.頭發(fā)上細(xì)菌的檢查5.口腔中細(xì)菌的檢查（二）細(xì)菌的檢查第十一頁，共二十六頁，2022年，8月28日1.空氣中細(xì)菌的檢查將平板放在實驗室臺面上，移去皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露于空氣中，0.5h后蓋上皿蓋，倒置于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)。第十二頁，共二十六頁，2022年，8月28日2.實驗臺上細(xì)菌的檢查在酒精燈附近操作，劃線的角度要小，移動的壓力不能太大。

①在培養(yǎng)皿底畫線，將其一分為二，并貼上相應(yīng)的標(biāo)簽；②取出棉簽（動作要迅速）；③先在無菌平板的一個區(qū)域內(nèi)試劃幾下；④然后用同一根棉簽在實驗臺面擦拭2cm2的范圍；⑤在培養(yǎng)皿的另一區(qū)域同樣劃線。第十三頁，共二十六頁，2022年，8月28日3.手指上細(xì)菌的檢查①用記號筆在平板底部畫線，將其平均分成兩部分，標(biāo)明洗手前與洗手后及姓名、日期；②移去皿蓋，將未洗過的手指在瓊脂平板表面輕輕地來回劃線，蓋上皿蓋。③用肥皂將手清洗干凈，自然干燥后，在平板的另外一部分同樣劃線。第十四頁，共二十六頁，2022年，8月28日4.頭發(fā)上細(xì)菌的檢查在揭開皿蓋的平板上方，用手將頭發(fā)撥動數(shù)次，使細(xì)菌降落到平板表面，然后蓋上皿蓋。第十五頁，共二十六頁，2022年，8月28日5.口腔中細(xì)菌的檢查將揭開皿蓋的平板放在離口約6～8cm處，對著瓊脂表面用力咳嗽，然后蓋上皿蓋。第十六頁，共二十六頁，2022年，8月28日（三）細(xì)菌的培養(yǎng)將所有的瓊脂平板翻轉(zhuǎn)，使皿底朝上，放入28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)1～2d。第十七頁，共二十六頁，2022年，8月28日（四）結(jié)果記錄1.菌落計數(shù)

劃線的平板數(shù)最后1/2面積的菌落數(shù)；

非劃線平板直接數(shù)1/4面積的菌落數(shù)。2.特征描述觀察菌落的特點時要選擇分離很開的單個菌落。特征明顯的菌落可初步判斷屬于哪種微生物。第十八頁，共二十六頁，2022年，8月28日（五）實驗結(jié)果記錄將結(jié)果如實記錄，并清洗各自的平板。第十九頁，共二十六頁，2022年，8月28日描述菌落特征時須選擇稀疏、孤立的菌落，其項目包括大小、形狀、邊緣情況、隆起形狀、表面狀態(tài)、質(zhì)地、顏色和透明度等。多數(shù)細(xì)菌菌落圓形，小而薄，表面光滑、濕潤、較粘稠，半透明，顏色多樣，色澤一致，質(zhì)地均勻，易挑取，常有臭味。這些特征可與其他微生物菌落相區(qū)別。第二十頁，共二十六頁，2022年，8月28日不同細(xì)菌的菌落也具有自己的特有特征：對于產(chǎn)鞭毛、莢膜和芽孢的種類尤為明顯。例如，對無鞭毛、不能運動的細(xì)菌尤其是各種球菌來說，隨著菌落中個體數(shù)目的劇增，只能依靠“硬擠”的方式來擴大菌落的體積和面積，因而就形成了較小、較厚及邊緣極其圓整的菌落。對長有鞭毛的細(xì)菌來說，其菌落就有大而扁平、形態(tài)不規(guī)則和邊緣多缺刻的特征，運動能力強的細(xì)菌還會出現(xiàn)樹根狀甚至能移動的菌落。有莢膜的細(xì)菌，其菌落往往十分光滑，并呈透明的蛋清狀，形狀較大。凡產(chǎn)芽孢的細(xì)菌，因其芽孢引起的折光率變化而使菌落的外形變得很不透明或有“干燥”之感，并因其細(xì)胞分裂后常成鏈狀而引起菌落表面粗糙、有褶皺感，再加上它們一般都有周生鞭毛，因此產(chǎn)生了既粗糙、多褶、不透明，又有外形及邊緣不規(guī)則特征的獨特菌落。同一種細(xì)菌在不同條件下形成的菌落特征會有差別，但在相同的培養(yǎng)條件下形成的菌落特征是一致的。所以，菌落的形態(tài)特征對菌種的分類鑒定有重要的意義。菌落還常用于微生物的分離、純化、鑒定、計數(shù)及選種與育種等工作。第二十一頁，共二十六頁，2022年，8月28日不同種類的細(xì)菌其菌落形態(tài)互不相同，表現(xiàn)在大小、形狀、邊緣、隆起、光澤、質(zhì)地和顏色等方面。細(xì)菌菌落大小不一，小的不到1毫米，大的可以鋪滿整個培養(yǎng)皿；菌落形狀有圓形、不規(guī)則形、卷發(fā)狀、假根狀等；菌落的隆起形狀有擴展、臺狀、低凸、乳頭狀等；有的菌落有光澤、有的沒有；有的菌落較粘，有的則較脆；菌落一般呈灰色，少數(shù)為白色、黃色、紅色、綠色和棕色等。

第二十二頁，共二十六頁，2022年，8月28日各種菌落的菌落特征細(xì)菌的菌落

細(xì)菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、粘稠、光滑、較透明、易挑取、質(zhì)地均勻以及菌落正反面或邊緣與中央部位顏色一致等。細(xì)菌的菌落特征因種而異?？勺鳛殍b定細(xì)菌種的依據(jù)。

大腸桿菌第二十三頁，共二十六頁，2022年，8月28日霉菌由于霉菌的菌絲較粗而長，因而霉菌的菌落較大，有的霉菌的菌絲蔓延，沒有局限性，其菌落可擴展到整個培養(yǎng)皿，有的種則有一定的局限性，直徑1~2厘米或更小。菌落質(zhì)地一般比放線菌疏松，外觀干燥，不透明，呈現(xiàn)或緊或松的蛛網(wǎng)狀、絨毛狀或棉絮狀；菌落與培養(yǎng)基的連接緊密，不易挑?。痪湔疵娴念伾瓦吘壟c中心的顏色常不一致。

第二十四頁，共二十六頁，2022年，8月28日放線菌的菌落

放線菌在固體培養(yǎng)基上形成與細(xì)菌不同的菌落特征，放線菌菌絲相互交錯纏繞形成質(zhì)地致密的小菌落，干燥、不透明、難以挑取，當(dāng)大量孢子覆蓋于菌落表面時，就形成表面為粉末狀或顆粒狀的典型放線菌菌落，由于基內(nèi)菌絲和孢子常有顏色，使得菌落的正反面呈現(xiàn)出不同的色澤。

第二十五頁，共二十六頁，2022年，8月28日放線菌放線菌的菌落由菌絲體組成。放線菌菌絲纖細(xì)，生長緩慢，相互交錯，所以形成的菌落較小而且質(zhì)地致密