- 被代替
- 已被新標(biāo)準(zhǔn)代替,建議下載現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23197-2022
- 2008-12-31 頒布
- 2009-05-01 實(shí)施
下載本文檔
文檔簡介
犐犆犛11.220
犅41
中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)
犌犅/犜23197—2008
雞傳染性支氣管炎診斷技術(shù)
犇犻犪犵狀狅狊狋犻犮狋犲犮犺狀犻狇狌犲狊犳狅狉犪狏犻犪狀犻狀犳犲犮狋犻狅狌狊犫狉狅狀犮犺犻狋犻狊
20081231發(fā)布20090501實(shí)施
中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局
發(fā)布
中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
書
犌犅/犜23197—2008
前言
本標(biāo)準(zhǔn)對(duì)應(yīng)于OIE《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗手冊》(2004)2.7.6雞傳染性支氣管炎(avianinfec
tiousbronchitis),其一致性程度為非等效。在此基礎(chǔ)上,根據(jù)國內(nèi)科研成果增加了反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反
應(yīng)和氣管環(huán)組織培養(yǎng)血清中和試驗(yàn),用于病原的鑒定和抗體檢測。
本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄,附錄B為資料性附錄。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)(SAC/TC181)歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:吳延功、廖明、王志亮、郭霄峰、劉佩蘭、王永玲、孫承英。
Ⅰ
書
犌犅/犜23197—2008
雞傳染性支氣管炎診斷技術(shù)
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雞傳染性支氣管炎病毒分離、反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、微量血凝抑制試驗(yàn)以及氣管環(huán)
組織培養(yǎng)血清中和試驗(yàn)等四種診斷方法的技術(shù)要求。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于雞傳染性支氣管炎的診斷和檢疫。
2臨床診斷
2.1雞傳染性支氣管炎是雞的一種急性、接觸性傳染病,臨床上有多種表現(xiàn)形式,根據(jù)病變類型,可將
其分為:呼吸道型、腎型等,但以經(jīng)典的呼吸道型發(fā)生的最為普遍。
2.2呼吸道型表現(xiàn)為呼吸困難,有羅音或喘鳴音,雛雞感染可引起死亡。
2.3青年雞和產(chǎn)蛋雞感染后,可引起產(chǎn)蛋雞停產(chǎn)或產(chǎn)蛋下降。表現(xiàn)為產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋下降,產(chǎn)軟皮蛋、砂殼
蛋或畸形蛋,蛋清稀薄如水。
2.4腎型表現(xiàn)為病雞排白色稀糞,脫水,死亡率高。
2.5符合上述臨床癥狀之一者,可以懷疑雞群感染雞傳染性支氣管炎病毒,確診需經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。
3病原的分離
3.1樣品的采集
3.1.1對(duì)于急性呼吸道型的病雞,應(yīng)采取氣管滲出物;對(duì)于剛撲殺的病雞則采取支氣管和肺組織。
3.1.2對(duì)于腎型和產(chǎn)蛋下降型的病雞,應(yīng)采取發(fā)病雞的腎臟或輸卵管。也可從大腸,尤其是盲腸扁桃
體或糞便分離病毒,但從消化道分離到的病毒未必與現(xiàn)流行或發(fā)生的病毒有直接關(guān)系。
3.2樣品的處理
3.2.1將病料放在含有10000IU/mL青霉素和10mg/mL鏈霉素的pH值為7.4的磷酸緩沖鹽水
(PBS)內(nèi),置冰盒內(nèi)送往實(shí)驗(yàn)室。pH值為7.4的PBS的配方見附錄A。
3.2.2將病料磨碎,加含抗菌素的PBS制成體積分?jǐn)?shù)為20%的組織懸液,凍融3次,以3000犵離心
20min,取上清液,加入終濃度為1000IU/mL的青霉素和終濃度為1mg/mL的鏈霉素,37℃下作用
1h后用于雞胚接種。
3.3分離培養(yǎng)
3.3.1取病料上清液,接種于5枚9日齡~11日齡的SPF雞胚尿囊腔內(nèi),另5枚接種PBS,接種量均
為0.2mL/枚。37℃孵育。每天照蛋,24h內(nèi)死亡的雞胚棄去。收集接種后3d~7d的雞胚尿囊液,
將所有尿囊液混合,用含1000IU/mL青霉素和1mg/mL鏈霉素的PBS稀釋5倍~10倍,繼續(xù)在雞
胚內(nèi)傳代。典型的野毒株通常在雞胚中傳至第2代或第3代時(shí),可見侏儒胚,傳至第3代,某些雞胚可
出現(xiàn)死亡。含毒尿囊液置-60℃以下可長期保存,也可以凍干4℃保存。
3.3.2將分離物經(jīng)雞胚傳至3代或3代以上,收獲接種后7d仍存活的雞胚,取胎兒,用剪刀剪除胎兒
體外的附屬物,并用吸水紙吸干胎兒表面的液體。如接種胎兒重量比對(duì)照胚最輕胎兒重量少2g以上
者,可初步判定為有病毒感染。
3
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