標(biāo)準(zhǔn)解讀
《GB/T 27536-2011 豬流感病毒分離與鑒定方法》是一項(xiàng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),旨在提供一套科學(xué)、系統(tǒng)的方法來(lái)從疑似感染豬流感的樣本中分離并鑒定豬流感病毒。該標(biāo)準(zhǔn)適用于獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室及研究機(jī)構(gòu)對(duì)豬流感病毒的研究工作。
根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn),首先明確了樣品采集的要求,包括但不限于鼻拭子、氣管和肺組織等樣本類型的選擇,以及如何正確保存這些樣本以確保其在運(yùn)輸過(guò)程中的穩(wěn)定性。接著,詳細(xì)描述了病毒分離的具體步驟,如使用特定細(xì)胞系(例如MDCK細(xì)胞)進(jìn)行培養(yǎng),并通過(guò)觀察細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)初步判斷是否存在病毒感染。
對(duì)于已成功分離出的病毒株,該標(biāo)準(zhǔn)還規(guī)定了一系列分子生物學(xué)技術(shù)用于進(jìn)一步確認(rèn)其身份,比如RT-PCR擴(kuò)增特定基因片段、測(cè)序分析以及血凝抑制試驗(yàn)(HI test)等。此外,也提到了利用單克隆抗體進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)(IFAT)或ELISA實(shí)驗(yàn)作為輔助手段之一。
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- 現(xiàn)行
- 正在執(zhí)行有效
- 2011-11-21 頒布
- 2012-03-01 實(shí)施
文檔簡(jiǎn)介
ICS11220
B41.
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
GB/T27536—2011
豬流感病毒分離與鑒定方法
Isolationandidentificationofswineinfluenzavirus
2011-11-21發(fā)布2012-03-01實(shí)施
中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布
中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)
GB/T27536—2011
前言
本標(biāo)準(zhǔn)按照給出的規(guī)則起草
GB/T1.1—2009。
本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部提出
。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)動(dòng)物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口
(SAC/TC181)。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所
:。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人喬傳玲楊煥良陳艷辛?xí)怨怅惢m
:、、、、。
Ⅰ
GB/T27536—2011
豬流感病毒分離與鑒定方法
1范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬流感病毒分離與鑒定方法
。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于各種亞型豬流感的病原分離和鑒定
。
2試驗(yàn)材料試劑
、
21剪刀鑷子
.、。
22注射器
.1mL。
23單道及多道微量移液器吸頭
.、。
24日齡雞胚
.9~11SPF。
25犬腎細(xì)胞
.(MDCK)。
26孔培養(yǎng)板
.6。
27培養(yǎng)基
.DMEM。
28緩沖液儲(chǔ)存液
.HEPES(1mol/L)。
29胎牛血清
.。
210胰蛋白酶胰蛋白酶經(jīng)處理
.TPCK-(TPCK)。
211磷酸鹽緩沖液參見(jiàn)附錄中
.0.01mol/LpH7.0~7.4(PBS)(AA.1)。
212磷酸鹽緩沖液參見(jiàn)附錄中
.(pH5.9)(AA.5)。
213生理鹽水參見(jiàn)附錄中
.0.85%(AA.2)。
214阿氏液參見(jiàn)附錄中
.(Alsevers)(AA.3)。
215紅細(xì)胞懸液參見(jiàn)附錄中
.0.5%(AA.4)。
216胎球蛋白參見(jiàn)附錄中
.(AA.6)。
217過(guò)碘酸鹽參見(jiàn)附錄中
.(AA.7)。
218亞砷酸鹽參見(jiàn)附錄中
.(AA.8)。
219硫代巴比妥酸參見(jiàn)附錄中
.(AA.9)。
220無(wú)菌蒸餾水或去離子水
.。
3儀器
31生物安全柜柜內(nèi)負(fù)壓有過(guò)濾器可避免細(xì)胞培養(yǎng)物污染及保護(hù)操作人員安全
.(,HEPA)。
32孵化器
.。
33培養(yǎng)箱
.CO2。
34臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)
.。
35水浴加熱器
.37℃。
36煮沸鍋
.。
37
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