中國(guó)蛇島蝮蛇毒腺部分ESTs分析-葛貝

中國(guó)蛇島蝮蛇毒腺部分表達(dá)序列標(biāo)簽單向測(cè)序及ESTs分析

生物技術(shù)3班葛貝研究背景蛇毒（snakevenom,SV）具有抗凝止血、鎮(zhèn)痛、影響血小板聚集、誘導(dǎo)出血或溶血、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、刺激水腫形成、抗病毒、抗腫瘤、抗菌消炎、抗HIV活性等多種生物學(xué)活性[1-10]，具有很好的臨床應(yīng)用前景和開發(fā)價(jià)值。蛇毒中主要的活性及毒性成分是蛋白（酶），獲得蛇毒蛋白進(jìn)行功能研究顯得尤為重要。研究?jī)?nèi)容前期采用SMART（Switchingmechanismat5’endofRNAtranscript）技術(shù)，成功構(gòu)建了中國(guó)蛇島蝮蛇（Gloydiusshedaoensisshedaoensis,GSS）毒腺（GSSG）的cDNA(GSSG-cDNA)文庫(kù)。從構(gòu)建的GSSG-cDNA文庫(kù)中隨機(jī)挑選單克隆進(jìn)行5，端表達(dá)序列標(biāo)簽（EST）單向測(cè)序，獲得高質(zhì)量的ESTs，最后通過NCBInr數(shù)據(jù)庫(kù)BlastX作比對(duì)進(jìn)行分析。研究基本條件GSSG-cDNA文庫(kù)由本實(shí)驗(yàn)室保存；DNAMarker、RnaseA酶；胰蛋白胨、酵母提取物；三羥甲基氨基甲烷（Tris）；十二烷基磺酸鈉（SDS）、EB、苯酚、瓊脂糖。研究方法（一）采用SMART技術(shù)構(gòu)建中國(guó)蛇島蝮蛇毒腺的cDNA文庫(kù)[19]（二）cDNA克隆的序列測(cè)定1.cDNA文庫(kù)菌液涂板擴(kuò)增2.采用堿裂解法提取質(zhì)粒3.利用測(cè)序儀(AmershamPharmaciaBiotechInc,USA)進(jìn)行cDNA克隆的序列測(cè)定（三）ESTs序列分析預(yù)期的結(jié)果與意義根據(jù)NCBInr數(shù)據(jù)庫(kù)BlastX比對(duì)分析，可以得到克隆為已知功能基因、未知功能基因、新基因，獲得GSSG的部分ESTs序列，為GSS蛋白活性組分基因的克隆、表達(dá)和功能研究奠定了一定基礎(chǔ)。參考文獻(xiàn)劉淑清，郭春梅，徐躍飛，等.金屬離子對(duì)蛇毒蛋白生物活性及結(jié)構(gòu)效應(yīng)的影響[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào),2009,30(9):1773-1778.LiuS,SunM-Z,SunC,etal.AnovelserineproteasefromthesnakevenomofAgkistrodonblomhoffiiussurensis[J].Toxicon,2008,52(7):

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