參考文稿講稿

24卷6200512

中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)

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No廖中凱 周建業(yè)高中國醫(yī)學(xué)中國協(xié)和醫(yī)學(xué)阜外心血管病醫(yī)院瓣膜研究室,摘要:目的觀察脫細(xì)胞處理對(duì)牛心包體內(nèi)生物相容性及鈣化的影響并與戊二醛處理的牛心包進(jìn)行比較材料和方法對(duì)新鮮牛心包隨機(jī)分為三組,A、戊二醛處理組新鮮牛心包采0.5%的戊二醛進(jìn)行處理B、新鮮牛心包組新鮮牛心包保存于抗生素液中C、脫細(xì)胞組新鮮牛心包酶去污劑聯(lián)合脫細(xì)胞后保存于抗生素液中。上述處理后的牛心包經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng),顯示無細(xì)菌生長后,植入雄性小鼠皮下三周觀察炎性浸潤及鈣化情況。用vonKossa鈣染色檢查進(jìn)行定性分析原子吸收光譜檢查進(jìn)行鈣含量定量分析。同時(shí)體外對(duì)三組牛心包進(jìn)行力學(xué)和熱皺縮溫度進(jìn)試。結(jié)果 三組間炎性浸潤程度明顯不同,0.5%的戊二醛處理組鈣化程度明顯增高,每克干72mP001,(1.41mgg干重)間鈣化程度方面亦有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.001)。組織學(xué)鈣染色光鏡下檢查顯示三組間黑色顆粒有明顯差異,支持三組間鈣含量定量結(jié)果的差異。戊二醛處理組的力學(xué)性能與優(yōu)于新鮮組和脫細(xì)胞處理組,熱皺縮溫度高于新鮮組和脫細(xì)胞處理組。結(jié)論 新鮮牛心包脫細(xì)胞處理后鈣化顯著降低,免疫源性降低,有很好的生:脫細(xì)PericardiumwithDifferentTreatmentMethodsLIAOZhongKaiHUShengShou＊ZHOUJianYeGAOeatentsne,SciencesandPekingUnionMedicalCollege,Beijing00037)ObjectiveToevaluate Mteilsthreegroups,AgltaadeydetreatedgroupBfrehgroupC:accellulargroupAterconfirmednoinvivocalcificationTheywereexplantedthreeweekslater,thenusedvonKossastainandatomicabsorbentspectrumtoyzecalcificationqualitativelyandtativelyThemechanicpropertiesofthreegroupswereevauedesultsInflammatoryinfiltrationwasdifferentamongthreegroupsCalcfiaondifferenceswereCalcimTonusonfamatoryhro ＊＊通訊作者:Ealhss@63bj 中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué) 24a號(hào) 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 文章編號(hào)02588021(2005)060747引牛心包材料在臨應(yīng)用廣泛。例如作為血管補(bǔ)片、心臟瓣膜以及疝修補(bǔ)材料等。目前臨床應(yīng)用源性并防止酶對(duì)其降解,然而由于戊二醛的細(xì)胞毒性,導(dǎo)致牛心包材料在植入體內(nèi)后不能形成有生物活性的組織,最終導(dǎo)致移植物衰竭和鈣化。本研究響及機(jī)制的探討,并評(píng)價(jià)其生物相容性。材料和牛心包與處從屠宰場(chǎng)新鮮的牛心包,冰鹽水保存,8h～10h后剔除心包表面殘留的脂肪及其他結(jié)締組05B組浸泡于抗生素青霉素、鏈霉素、丁胺卡那霉素、B)溶液中C合脫細(xì)胞處理1。片上隨機(jī)截取10個(gè)試條,然后在SANSCMT2502型拉力機(jī)上做拉伸實(shí)驗(yàn)。測(cè)試條件如下:25020m抗拉負(fù)荷抗拉強(qiáng)度和伸長率等指標(biāo)。取650mm3mm的試條,以蒸餾水為介質(zhì),在GJ9D1型皮革收縮溫度測(cè)定儀上測(cè)定其熱皺縮溫度。溫度上升速度2℃min。采用小鼠,均為雄性,3周左右,體重25g～30g15只。分為A、B、C三組,A組4只,B組5只,組6只。將安定等體積混合,按氯胺酮30mgkg體重注入小鼠腹腔進(jìn)行麻醉,在小鼠背部皮下植入心包片,片,每片約1010cm2

大小,組手術(shù)后一只,余14只小鼠飼養(yǎng)三周然后直接斷頸處死小鼠,取出植入的牛心包片。標(biāo)本檢標(biāo)本送HE染色及組織學(xué)鈣vonKossa染色處9040h烘干標(biāo)本精確稱11V后過氧化氫充分氧化,溶液定容后采用日立Z800進(jìn)行鈣含量定量測(cè)定。結(jié)組織學(xué)HE染色檢查結(jié)果顯示小鼠機(jī)體對(duì)戊二醛處理A組牛心包的浸潤程度最輕然后是脫細(xì)胞牛心包組C組,而新鮮組B組的浸潤程度1AC1牛心包小鼠3HE染色100)

組織學(xué)鈣染色光鏡下顯示0.5%的戊二醛處理A2AB、C)。2牛心包小鼠3vonKossa染色100)05%的戊二醛處理組A組每克干重牛心包平均含鈣量71.2mg,較其他兩組有明顯差異P<001,新鮮牛心包組B組和脫細(xì)胞組C組間鈣P.01,1鈣元素原子吸收光譜單位mgg干重分 x 7202 220 0 =87 P<0=9 P<0=5 P<06 廖中凱等不同方法處理的牛心包生物相容性和鈣化結(jié)果分

體外力學(xué)性能BC比較其抗拉負(fù)荷、抗拉強(qiáng)度、伸長率等無顯著性差P00,A顯著性差異見表2。2不同方法處理牛心包力學(xué)性能比較x±s,n10)分ABC抗拉負(fù)荷N2423894283Mp20263324323伸長453883860937024 A86068006C67805℃。BC兩組無顯著性差異。A組與BC兩組相比較有顯著性差異P001。討牛心包采用戊二醛處理,產(chǎn)生交聯(lián)以減少宿主移植物的反應(yīng),包括減少抗原性并改善移植物的使用2。由于其細(xì)胞毒性導(dǎo)致在植入體內(nèi)后不能形成有生物活性的組織,最終導(dǎo)致移植物衰竭和鈣化,一些患者因此不得不再次進(jìn)行手術(shù),為了解決移植物衰竭和鈣化的問題,國內(nèi)外學(xué)者對(duì)此進(jìn)行了有益的探索。其一是戊二醛處理的牛心包進(jìn)行減毒處理,戊二醛含量,并在其上種植血管內(nèi)皮細(xì)胞以達(dá)到形成有活性的生物組織,取得了一定進(jìn)展仍有待長期觀察;同時(shí)對(duì)鈣化的機(jī)制進(jìn)行了研究,有些學(xué)者認(rèn)為鈣化與氨基酸羧基游離端有一定關(guān)系。另外通過對(duì)內(nèi)纖維間隙及細(xì)胞是鈣化的早期部位3。氨基酸氨基問題。鈣化也是組織經(jīng)戊二醛處理后形成的死細(xì)胞不能維持細(xì)胞內(nèi)低鈣水平的直接結(jié)果,最終在富含磷脂的細(xì)胞膜和它們的殘余物處形成鈣磷結(jié)晶,膠原和彈性蛋白也開始鈣化。組織的鈣化有宿主、移植物和機(jī)械作用這些復(fù)雜的因素參與。在缺乏結(jié)構(gòu)基質(zhì)生理修復(fù)機(jī)制的情況下,非鈣化的降解也作

他方法處理牛心包來解決移植物衰竭和鈣化問題,例如脫細(xì)胞方法,光氧化方法等等。本研究采用酶去污劑聯(lián)合脫細(xì)胞處理牛心包,主要是因?yàn)槊摷?xì)胞處理方其免疫源性而保留了牛心包本身的纖維結(jié)構(gòu)成分,而纖維結(jié)構(gòu)成分是牛心包力學(xué)性能的重要組成部分,因此脫細(xì)胞并不對(duì)牛心包的力學(xué)強(qiáng)度產(chǎn)生明顯影響,實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示新鮮牛心包脫細(xì)胞二醛處理后力學(xué)性能明顯增強(qiáng),主要是通過增加6。膠原蛋白殘基如氨基端與羧基端在戊二醛作用下發(fā)生化學(xué)交聯(lián)反應(yīng),膠原纖維彼此聯(lián)接后力學(xué)性能得到了增強(qiáng)。從這次實(shí)驗(yàn)HE染色的結(jié)果來看,小鼠機(jī)體對(duì)戊二醛處理A組牛心包的浸潤程度最輕,然后是脫細(xì)胞牛心包組C組,而新鮮組B組,可能與牛心包戊二醛處理后膠原纖維產(chǎn)生交聯(lián)后組織間隙變小,炎癥細(xì)胞很難浸潤滲透到牛心包組織內(nèi)部,而且殘留的醛基有細(xì)胞毒性,機(jī)體的細(xì)胞很難在戊二醛處理后的牛心包內(nèi)存活;脫細(xì)胞處理后去除了細(xì)胞成分,細(xì)胞上的抗原也被除去,因而機(jī)體對(duì)其炎癥反應(yīng)程度減輕,同時(shí)炎癥細(xì)胞以外的細(xì)胞也可以進(jìn)入到牛心包組織內(nèi)部,而新鮮的牛心包因有細(xì)胞成分存在,有很強(qiáng)的免疫源性,可以見到明顯的淋巴細(xì)胞,浸潤程度也最重。鈣化A組高于脫細(xì)胞牛心包組C組及新鮮組B組,脫細(xì)胞過程中去除了細(xì)胞膜成分細(xì)胞膜的磷脂可以與鈣結(jié)合形成鈣鹽結(jié)晶因此鈣化程度減少可能與之有關(guān)同時(shí)原子吸收光譜的鈣含量結(jié)果亦有顯著的差異這也說明了定量和定性結(jié)果具有一致性。結(jié)新鮮牛心包脫細(xì)胞處理后體內(nèi)鈣化顯著降低,免疫源性降低有很好的生物相容性。參考[]周建業(yè),,,等.牛心包材料脫細(xì)胞的初步究[J].中國循環(huán),99143):76.[2]AranL,LeeC,EarlesKetalAnnvrobovnepercardalheocopablyesngsyse[J]JHearValveDs998May,7

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