GB/T 28630.2-2012白斑綜合征(WSD)診斷規(guī)程第2部分：套式PCR檢測法

ICS6502030

B41..

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB/T286302—2012

.

白斑綜合征WSD診斷規(guī)程

()

第2部分套式PCR檢測法

:

Diagnosticprotocolsforwhitespotdisease—

Part2NestedPCRmethod

:

2012-07-31發(fā)布2012-11-01實(shí)施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布

中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T286302—2012

.

前言

白斑綜合征診斷規(guī)程分為五個(gè)部分

GB/T28630《(WSD)》:

第部分核酸探針斑點(diǎn)雜交檢測法

———1:;

第部分套式檢測法

———2:PCR;

第部分原位雜交檢測法

———3:;

第部分組織病理學(xué)診斷法

———4:;

第部分新鮮組織的染色法

———5:T-E。

本部分為的第部分

GB/T286302。

本部分按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

本部分由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部提出

。

本部分由全國水產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口

(SAC/TC156)。

本部分起草單位中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所農(nóng)業(yè)部全國水產(chǎn)技術(shù)推廣總站

:、。

本部分主要起草人黃倢楊冰陳愛平宋曉玲史成銀楊叢海魏琦劉莉

:、、、、、、、。

Ⅰ

GB/T286302—2012

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白斑綜合征WSD診斷規(guī)程

()

第2部分套式PCR檢測法

:

警告使用本標(biāo)準(zhǔn)的人員應(yīng)有正規(guī)實(shí)驗(yàn)室工作的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)本標(biāo)準(zhǔn)并未指出所有可能的安全問題

:,。

使用者有責(zé)任采取適當(dāng)?shù)陌踩徒】荡胧┎⒈ＷC符合國家有關(guān)法規(guī)規(guī)定的條件

,。

1范圍

的本部分規(guī)定了白斑綜合征病原的套式檢測方法所需試劑與材料儀器設(shè)備

GB/T28630PCR、、

操作步驟和結(jié)果判定

。

本部分適用于在對(duì)蝦的各種樣品環(huán)境生物和餌料生物的各種樣品以及其他各種非生物樣品中對(duì)

、,

白斑綜合征病原帶毒情況的高靈敏度定性檢測以進(jìn)行病原篩查和疾病的確診

,。

本部分單獨(dú)使用時(shí)不適用于對(duì)病毒量或感染活性的估測以及宿主感染程度的評(píng)估

。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的凡是注日期的引用文件僅注日期的版本適用于本文

。,

件凡不注日期的引用文件其最新版本包括所有修改單適用于本文件

。,()。

白斑綜合征診斷規(guī)程第部分組織病理學(xué)診斷法

GB/T28630.4—2012(WSD)4:

3原理

31白斑綜合征的病原和病理學(xué)特征

.

見的

GB/T28630.4—20122.1。

32技術(shù)原理

.

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是以待測樣品的一段作為模板以與模板

(polymerasechainreaction,PCR)DNA,

兩端序列互補(bǔ)的一對(duì)特異性寡核苷酸序列作為引物在四種脫氧核糖核苷三磷酸存在下利用依賴

,,

的聚合酶的合成作用經(jīng)過數(shù)十次變性退火和延伸的反應(yīng)循環(huán)使模板上介于兩個(gè)引物

DNADNA。、,

之間的片段得到特異性地級(jí)數(shù)擴(kuò)增再通過電泳等手段檢測到被特異性擴(kuò)增的片段從而可揭示

DNA,,

微量病毒的存在套式是在第一步擴(kuò)增的產(chǎn)物內(nèi)再用一對(duì)引物進(jìn)行第二步擴(kuò)

DNA。PCRPCR,PCR

增套式可大大增加檢測的靈敏度和反應(yīng)特異性

。PCRPCR。

4試劑和材料

41除非另有說明在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的化學(xué)試劑和蒸餾水或去離子水或相當(dāng)純度的水

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