GB/T 31805-2015豇豆重花葉病毒檢疫鑒定方法

ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標準

GB/T31805—2015

豇豆重花葉病毒檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofCowpeaseveremosaicvirus

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T31805—2015

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任

。。

本標準由全國植物檢疫標準化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標準起草單位中華人民共和國廈門出入境檢驗檢疫局中華人民共和國江蘇出入境檢驗檢

:、

疫局

。

本標準主要起草人陳青李彬方志鵬黃峰廖富榮陳紅運林石明

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T31805—2015

豇豆重花葉病毒檢疫鑒定方法

1范圍

本標準規(guī)定了豇豆重花葉病毒檢疫鑒定的血清學(xué)生物學(xué)和分子檢測方法

、。

本標準適用于可能攜帶有豇豆重花葉病毒的植物繁殖材料種子植株和產(chǎn)品的檢疫鑒定

(、)。

2儀器設(shè)備和主要試劑

21儀器設(shè)備

.

儀定量儀滅菌鍋制冰機超低溫冰箱常規(guī)冰箱旋渦震蕩器電泳儀凝膠成像系

PCR、PCR、、、、、、、

統(tǒng)微量研磨儀酶標儀洗板機微量天平感量水平電泳槽高速冷凍臺式離心機水浴槽

、、、、(:0.001g)、、、、

計移液器孔酶標板研缽等防蟲溫室

pH、(1000μL、200μL、20μL、2μL)、96、;。

22主要試劑

.

除另有規(guī)定外所有試劑均為分析純緩沖液

,。PCR、dNTPs(dATP、dTTP、dCTP、dGTP)、DNA

聚合酶引物和探針瓊脂酶聯(lián)檢測試劑見附錄

、、,B。

3檢測樣品的制備

31種子

.

挑取畸形種子播于滅菌土中待長出片片葉后將表現(xiàn)癥狀的植株編號未表現(xiàn)癥狀的植株

,3~4,,

分組株為組并編號采集的葉片分成份根據(jù)需要分別用于酶聯(lián)測定和分子檢測

(101)。2,。

32植株

.

有癥狀如葉片畸形花葉斑駁等的植株編號單獨檢測沒有癥狀的分組并編號檢測分組方法

(、、)。,

和檢測方法同雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定

3.1。。

4檢測與鑒定

41雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定

.

把制備的樣品上清液加入已包被抗體的酶聯(lián)板中進行每個樣品平行加到

CPSMV,DAS-ELISA。

兩個孔中設(shè)陰性對照和陽性對照健康的植物組織作陰性對照感染了的植物組織作陽性對

。[,CPSMV

照其中陰性對照種類和材料如種子或葉片應(yīng)盡量與檢測樣品一致樣品提取緩沖液作空白對照不

,()],,

同的檢測試劑或試劑盒按說明操作具體操作見附錄

。B。

42RT-PCR

.

分別提取樣品和對照的總反轉(zhuǎn)錄合成后進行擴增健康的植物組織作陰性對

RNA,cDNA,PCR。

照感染的植物組織作陽性對照