檢測系統(tǒng)及分析性能評價(jià)

自建檢測系統(tǒng)及

分析性能評價(jià)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院高社軍行業(yè)要求國家衛(wèi)生行政管理部門，《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法》，第三章24條：20.1是否對檢測系統(tǒng)(儀器設(shè)備、試劑、校準(zhǔn)品)進(jìn)行了有效性的評價(jià)？包括對準(zhǔn)確度、精密度、分析測量范圍、參考范圍、分析干擾等的評估。認(rèn)可要求ISO15189認(rèn)可要求5.5檢驗(yàn)過程5.5.1檢驗(yàn)程序的選擇、驗(yàn)證和確認(rèn)5.5.1.1總則5.5.1.2檢驗(yàn)程序驗(yàn)證在常規(guī)應(yīng)用前，應(yīng)由實(shí)驗(yàn)室對未加修改而使用的已確認(rèn)的檢驗(yàn)程序進(jìn)行獨(dú)立驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)從制造商或方法開發(fā)者獲得相關(guān)信息，以確定檢驗(yàn)程序的性能特征。實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的獨(dú)立驗(yàn)證，應(yīng)通過獲取客觀證據(jù)（以性能特征形式）證實(shí)檢驗(yàn)程序的性能與其聲明相符。驗(yàn)證過程證實(shí)的檢驗(yàn)程序的性能指標(biāo)，應(yīng)與檢驗(yàn)結(jié)果的預(yù)期用途相關(guān)。ISO15189認(rèn)可要求5.5檢驗(yàn)過程5.5.1檢驗(yàn)程序的選擇、驗(yàn)證和確認(rèn)5.5.1.1總則5.5.1.2檢驗(yàn)程序驗(yàn)證

5.5.1.3檢驗(yàn)程序的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對以下來源的檢驗(yàn)程序進(jìn)行確認(rèn)：a)非標(biāo)準(zhǔn)方法；b)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)或制定的方法；c)超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法；d)修改過的確認(rèn)方法。概念評估（Evaluation）：實(shí)驗(yàn)室通過實(shí)驗(yàn)，測量新方法的分析性能。確認(rèn)（Validation）：通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認(rèn)定。驗(yàn)證（Verification）：提供客觀證據(jù)對規(guī)定要求得到滿足的認(rèn)定。系統(tǒng)的確認(rèn)和驗(yàn)證檢測系統(tǒng)什么是檢測系統(tǒng)？完成一個(gè)項(xiàng)目檢測涉及的儀器、試劑、校準(zhǔn)品、測定方法、質(zhì)量控制、保養(yǎng)計(jì)劃等的（規(guī)定）組合。如果是手工操作，則還必須包括操作人員。檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)分類：貝克曼LX20生化儀貝克曼的檢測試劑盒貝克曼的校準(zhǔn)品葡萄糖氧化酶法貝克曼LX20生化儀羅氏的檢測試劑盒貝克曼的校準(zhǔn)品葡萄糖氧化酶法標(biāo)準(zhǔn)檢測系統(tǒng)自建檢測系統(tǒng)兩個(gè)不同的檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)的要素校準(zhǔn)品試劑分析儀均值與真值相接近的程度偏倚(Bias)系統(tǒng)誤差重復(fù)測定結(jié)果之間接近的程度標(biāo)準(zhǔn)差SD，CV隨機(jī)誤差儀器主要技術(shù)性能驗(yàn)證建立相關(guān)檔案記錄建立相關(guān)SOP并培訓(xùn)、授權(quán)環(huán)境條件設(shè)備檔案

檢測系統(tǒng)支持文件設(shè)備檔案大型儀器設(shè)備登記表：儀器名稱、型號(hào)、序列號(hào)、購買時(shí)間、價(jià)格、附加說明、使用專業(yè)組等小型儀器設(shè)備登記表儀器和項(xiàng)目SOP儀器校驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)

河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院儀器校驗(yàn)零點(diǎn)漂移吸光度準(zhǔn)確度吸光度重復(fù)性雜散光吸光度線性試劑艙溫度樣本針攜帶污染……河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院儀器校驗(yàn)河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院檢驗(yàn)科試劑和校準(zhǔn)品試劑三證試劑出入庫管理試劑開瓶時(shí)間試劑評價(jià)溯源性最準(zhǔn)確可靠的結(jié)果就是：在參考實(shí)驗(yàn)室,用國際公認(rèn)的參考方法對新鮮的血清標(biāo)本做出的值溯源性就是通過一條不間斷的比較鏈（方法學(xué)比較），使檢測結(jié)果或檢測標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是與國家標(biāo)準(zhǔn)或國際標(biāo)準(zhǔn)一致.一級校準(zhǔn)品制造廠商在生產(chǎn)時(shí)所使用的校準(zhǔn)品一級參考方法二級參考方法制造廠商所推薦的測定操作法二級校準(zhǔn)品制造廠商在銷售時(shí)所使用的校準(zhǔn)品制造廠商所常用的測定操作法用戶的日常檢驗(yàn)法日常樣品測定結(jié)果SI單位的定義不準(zhǔn)確度的大小溯源的體系圖檢測系統(tǒng)性能評價(jià)的參考標(biāo)準(zhǔn)NCCLS(美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì))

－NationalCommitteeforClinicalLaboratoryStandardsCLSI(臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì))

－ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute分析性能評價(jià)指標(biāo)準(zhǔn)確度精密度（NCCLSEP5）線性范圍（NCCLSEP6）參考區(qū)間（NCCLSC-28A)初步評價(jià)（NCCLSEP10）抗干擾能力（NCCLSEP7）基質(zhì)效應(yīng)（NCCLSEP14）定性實(shí)驗(yàn)方法的評價(jià)（NCCLSEP-12P）比對及偏差（NCCLSEP9）EP5-A（臨床化學(xué)設(shè)備操作精密度評價(jià)核準(zhǔn)指南）-EvaluationofPrecisionPerformanceofClinicalChemistryDevices;ApprovedGuidelineEP6-P2(定量分析方法的線性評價(jià)：統(tǒng)計(jì)方法，提議指南)-EvaluationoftheLinearityofQuantitativeAnalyticalMethods:AStatisticalApproach;ProposedGuideline

EP7-P

(臨床化學(xué)干擾試驗(yàn)；建議指南)-InterferenceTestinginClinicalChemistry;ProposedGuideline

EP10-A

(定量臨床實(shí)驗(yàn)室方法的初步評價(jià)，核準(zhǔn)指南)

-PreliminaryEvaluationofQuantitativeClinicalLaboratoryMethods;ApprovedGuideline

EP12-P

(用于定性實(shí)驗(yàn)評價(jià)的用戶協(xié)議，提議指南)-UserProtocolforEvaluationofQualitativeTesterformance;ProposedGuideline精密度評價(jià)：EP5-A概念：精密度先做一個(gè)初步的批內(nèi)精密度測定，即一個(gè)標(biāo)本重復(fù)測定20次，計(jì)算出均值，標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。分別準(zhǔn)備正常值血清和病理值血清，并分裝凍存。每天分別取出正常值血清和病理值血清各一支，室溫復(fù)溶、混勻待測。EP5-A2個(gè)標(biāo)本每天測定2次(2次測定間隔不得少于2小時(shí))，每次測定均作雙份，共測定20天。每次測定至少做一個(gè)質(zhì)控。數(shù)據(jù)整理于精密度實(shí)驗(yàn)方案表。離群點(diǎn)的檢查：“離群點(diǎn)”應(yīng)棄去或重做。統(tǒng)計(jì)分析：數(shù)據(jù)錄入精密度實(shí)驗(yàn)方案表后，按EP5-A文件中計(jì)算公式計(jì)算總精密度ST，批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差Swr，批間標(biāo)準(zhǔn)差Srr，日間標(biāo)準(zhǔn)差Sdd。精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)-基本方法分析物:肌酐樣本:低/中/高值血清；HN1530/HE1532儀器:OlympusAU400試劑來源/批號(hào):Lot12-1218P校準(zhǔn)物來源/批號(hào):RandoxCAL2351/Lot476UE以肌酐酶法試劑為例，驗(yàn)證EP5-A2基本方法精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)-基本方法天數(shù)(I)第一批Run1第二批Run2日均值XiXi11Xi12批均值Xi1Xi21Xi22批均值Xi212……20總均值

X

●●●數(shù)據(jù)記錄表格精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)-基本方法肌酐酶法試劑精密度評價(jià)-低值血清μmol/l天數(shù)第一批第二批XiXi11Xi12Xi1Xi21Xi22Xi2181.079.980.580.780.880.880.6280.378.979.681.080.680.880.2380.079.679.880.281.380.880.3479.379.479.479.479.579.579.4579.279.979.680.078.979.579.5679.779.479.679.379.379.379.4778.178.478.378.178.078.178.2878.678.678.680.179.079.679.1979.180.079.681.080.080.580.01080.780.180.479.279.579.479.91178.478.878.681.481.181.379.91281.881.081.481.981.681.881.61381.179.980.582.981.382.181.31479.881.680.781.080.080.580.61580.079.579.879.480.179.879.81679.880.780.379.779.579.679.91780.381.180.779.479.979.780.21880.180.680.479.378.679.079.71978.278.278.278.678.678.678.42079.980.380.178.076.777.478.7總均值79.8精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)-基本方法天數(shù)第一批第二批（第一批均數(shù)－第二批均數(shù)）2（每天均數(shù)-總均數(shù)）2（Xi11-Xi12）2（Xi21-Xi22）2（Xi1-Xi2）2（Xi●●-X●●●）211.210.010.090.6021.960.161.440.1430.161.210.900.2040.010.010.010.1850.491.210.010.1160.0900.060.1670.090.010.042.81801.210.900.5790.8110.900.04100.360.091.100.00110.160.097.020.01120.640.090.123.05131.442.562.562.17143.2410.040.60150.250.490.000.01160.810.040.420.01170.640.251.100.12180.250.491.960.0319000.162.04200.161.697.561.22求和12.7711.6126.4214.06（1）（2）（3）（4）精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)-基本方法重復(fù)性

其中：I 總的運(yùn)行天數(shù)（通常為20）j 為每日的批次（1或者2）Xij1

為第i日第j批第1次的結(jié)果Xij2 為第i日第j批第2次的結(jié)果=0.55精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)-基本方法室內(nèi)精密度評價(jià)

I ＝總的運(yùn)行天數(shù)（有兩個(gè)批次）Xi1●

＝第i日第1批運(yùn)行結(jié)果的均值Xi2● ＝第i日第2批運(yùn)行結(jié)果的均值

=0.81精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)-基本方法室內(nèi)精密度評價(jià)

I ＝總的運(yùn)行天數(shù)Xi●●

＝第i日所有結(jié)果的均值X

●●● ＝所有結(jié)果的均值

=0.86精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)-基本方法室內(nèi)精密度評價(jià)=0.642=0.712精密度評價(jià)實(shí)驗(yàn)-基本方法室內(nèi)精密度評價(jià)其中：

Sdd為日間標(biāo)準(zhǔn)差Srr為批間標(biāo)準(zhǔn)差Sr為重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)差（批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差）=1.11舉例-酶法肌酐精密度評價(jià)肌酐酶法試劑

精密度評價(jià)-低值血清μmol/l天數(shù)I20

批均值標(biāo)準(zhǔn)差A(yù)0.81

日均值標(biāo)準(zhǔn)差B0.86

總均值meanX

●●●

79.8

CV重復(fù)性RepeatabilitySr0.550.7%批間精密度Between-runSrr0.710.9%日間精密度Between-daySdd0.640.8%室內(nèi)精密度Within-laboratoryST1.111.4%舉例-酶法肌酐精密度評價(jià)研發(fā)4度試劑精密度評價(jià)(μmol/l)SerumPrecisionHN1530HE1532Serum1Serum2Serum3NO.ofDataPoints8080808080Mean(μmol/l)128.3375.879.8184.1379.5Within-RunSD0.842.130.551.172.15CV%0.70.60.70.60.6Within-LaboratorySD1.343.531.111.924.17CV%1.00.91.41.01.1依據(jù)EP-5A2文件要求，測定試劑精密度臨床實(shí)驗(yàn)室精密度驗(yàn)證結(jié)果判定與廠家聲明的批內(nèi)不精密度和室內(nèi)不精密度比較與國家標(biāo)準(zhǔn)比較與CLIA’88推薦的允許總誤差比較實(shí)驗(yàn)室自定標(biāo)準(zhǔn)線性評價(jià)：EP6-P2概念：線性范圍、可報(bào)告范圍、臨床可報(bào)告范圍將H和L樣品按：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H關(guān)系各自配制混合，形成系列評價(jià)樣品。一天內(nèi)做兩次實(shí)驗(yàn)，第一次實(shí)驗(yàn)由低到高重復(fù)測定3次，第二次實(shí)驗(yàn)由高到低重復(fù)測定3次，即每個(gè)實(shí)驗(yàn)樣品做6次重復(fù)測定。綜合所有結(jié)果作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。EP6-P2依照稀釋關(guān)系，計(jì)算各實(shí)驗(yàn)樣品的預(yù)期值。按實(shí)驗(yàn)要求，每個(gè)樣品做6次重復(fù)測定，得6個(gè)實(shí)測值，它們和預(yù)期值形成6對數(shù)據(jù)。用直線回歸對6對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，得直線回歸方程Y=bX+a，若b在0.97～1.03范圍內(nèi)，a接近于0，則可直接判斷測定方法可報(bào)告范圍在實(shí)驗(yàn)已涉及濃度。若不符合，可去除某點(diǎn)，縮小分析范圍作為真實(shí)的可報(bào)告范圍。準(zhǔn)確度評價(jià)準(zhǔn)確度：檢測結(jié)果與被測量物真值之間的一致程度。方法學(xué)比對：EP-9A（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；標(biāo)準(zhǔn)方法比對；回收試驗(yàn)）回收試驗(yàn)室間質(zhì)評準(zhǔn)確度確認(rèn)若采用某項(xiàng)目的Cal當(dāng)樣品進(jìn)行檢測，該校準(zhǔn)品的檢測值與靶值間的差異，可認(rèn)為該項(xiàng)目的不準(zhǔn)確度。準(zhǔn)確度確認(rèn)回收實(shí)驗(yàn)回收率%=回收濃度/加入濃度×100%

標(biāo)準(zhǔn)液體積加入濃度=標(biāo)準(zhǔn)液濃度×

基礎(chǔ)樣本體積+標(biāo)準(zhǔn)液體積

回收濃度=樣本最終測定濃度-基礎(chǔ)樣本濃度參考范圍參考范圍的建立：新分析物或新分析方法參考范圍的轉(zhuǎn)移與驗(yàn)證：已獲得測量的、可靠性公認(rèn)的分析物

項(xiàng)目參考范圍來源紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)男：（4.00~5.50）×1012/L女：（3.50~5.00）×1012/L全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第二版），第8頁血紅蛋白(Hb)男：120~160g/L女：110~150g/L全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第二版），第8頁紅細(xì)胞比容(Hct)男：0.370~0.500女：0.350~0.450MCV(fl)男：79.0~101.0女：79.0~101.0MCH(pg)26.0~35.0MCHC(g/L)310~370RDW(%)11.5~14.5白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)男：（4.0~10.0）×109/L女：（4.0~10.0）×109/L河北省臨床檢驗(yàn)管理與技術(shù)規(guī)程，第64頁我們的參考范圍從哪里來的？建立參考范圍的要點(diǎn)納入標(biāo)準(zhǔn)（供參考）

沒有影響檢測結(jié)果的生理指征無服用藥物或進(jìn)行飲食治療發(fā)育正常，無器質(zhì)性疾病

3個(gè)月內(nèi)無輸血、手術(shù)史婦女不在妊娠期及哺乳期選取人數(shù)（隨機(jī)至少120個(gè)觀察對象）

確定參考范圍的最小樣本量檢測：統(tǒng)計(jì)分析：參考對象群體值的特定百分?jǐn)?shù)（通常是95％）

非參數(shù)和參數(shù)分析：是否正態(tài)分布參考范圍的轉(zhuǎn)移和確認(rèn)

使用相同類型的分析體系使用不同分析體系同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)從一個(gè)實(shí)驗(yàn)室到另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測對象相同的地理區(qū)域和相同的統(tǒng)計(jì)學(xué)總體

觀測對象及方法學(xué)是一致或可比的

基于已確立的有效參考范圍，轉(zhuǎn)移是可行、節(jié)約的參考范圍轉(zhuǎn)移拿來主義

通過調(diào)查評估轉(zhuǎn)移的可接受性，無需確認(rèn)而進(jìn)行轉(zhuǎn)移

檢測較小參考個(gè)體的樣本量（n＝20）評估確認(rèn)轉(zhuǎn)移

檢測參考個(gè)體（n＝60）評估和確認(rèn)轉(zhuǎn)移

三種基本方法轉(zhuǎn)移有前提對象的一致性方法的一致性不多于2個(gè)落在參考限值外確認(rèn)有效3個(gè)以上結(jié)果落在參考限值之外重新取20個(gè)樣本不多于2個(gè)落在參考限值之外3個(gè)或更多的值落在限值外生物學(xué)特性不同建立參考范圍20個(gè)檢測值確認(rèn)有效初步性能評價(jià)：EP10-AEP9-A（用患者樣本進(jìn)行方法對比及偏差評估—批準(zhǔn)指南）

-MethodComparisonandBiasEstimationUsingPatientSamples;ApprovedGuideline

方法對比試驗(yàn)

目的：方法對比試驗(yàn)的主要目的是獲得候選方法的系統(tǒng)誤差的偏倚估計(jì)，即準(zhǔn)確度的評估。方法應(yīng)是參考方法或推薦方法,如該測定沒有參考方法或推薦方法，亦可以用公認(rèn)的常規(guī)方法。但須具備:(1)比對試驗(yàn)方法有更好的精密度。

(2)干擾影響已知。

(3)與試驗(yàn)方法使用相同的計(jì)量單位。對比方法的選擇

應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉所用的儀器、試驗(yàn)方法、比較方法及比較方案。比對前的準(zhǔn)備工作實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的選擇1）收集新鮮的正常和異常的臨床標(biāo)本,樣品大小至

少為40個(gè)標(biāo)本。2）足夠?qū)挼臐舛确秶?各濃度應(yīng)有合適的比例（部分項(xiàng)目見表1）。

注意：盡可能使50%的實(shí)驗(yàn)標(biāo)本分析物含量不在參考范圍內(nèi)，分析物含量分布越寬越好。若不能及時(shí)測定需保存標(biāo)本，應(yīng)確保它們的穩(wěn)定性。只能使用一種能符合兩個(gè)方法要求的保存條件，以免因條件不一引出新的變異。

項(xiàng)目A組B組C組D組E組

Glu(mg/dl)<50(10%)51～110(40%)111-150(30%)151-251(10%)251-SL(10%)BUN(mg/dl)<15(10%)12～25(40%)26-50(20%)51-100(20%)101-SL(10%)Cr(mg/dl)<1.0(20%)1.1～2.5(30%)2.6-5.0(20%)5.1-10(20%)10-SL(10%)Na(mmol/L)120～130(20%)131～140(40%)141-150(30%)151-160(10%)K(mmol/L)<3.0(20%)3～4.5(40%)4.5-6.0(30%)>6(10%)Cl(mol/L)80～95(30%)96～105(40%)106-120(30%)

TP(g/L)<50(10%)51～70(40%)71-90(40%)>90(10%)Alb(g/L)<30(10%)31～40(40%)41-50(40%)>50(10%)

GGT(U/L)0～NL(40%)NL～2NL(40%)2NL～4NL(10%)4NL～SL(10%)表1：部分項(xiàng)目濃度范圍建議注SL=可測范圍上限NL=正常范圍上限

1）每天測定8個(gè)標(biāo)本,雙份測定時(shí)第一次按順序1,2……7,8,

第二次,8，7……2,1,共測5天。

２）整理數(shù)據(jù)成表2（以ALT測定為例）。實(shí)驗(yàn)操作樣品實(shí)驗(yàn)方法比較方法實(shí)驗(yàn)方法比較方法

結(jié)果1結(jié)果2結(jié)果1結(jié)果2結(jié)果1-2（

DYi）

結(jié)果1-2（DXi）11415161511202221232235373235233575659561348082797623524524023224058678671173330313332...4015114815615036表2實(shí)驗(yàn)方法與比較方法測定ALT結(jié)果比較結(jié)果處理方法內(nèi)離群點(diǎn)的檢查方法間離群點(diǎn)的檢查作圖線性相關(guān)的目測檢查X取值范圍檢查線性回歸計(jì)算預(yù)期偏差和相對偏差結(jié)論方法內(nèi)離群點(diǎn)的檢查1、絕對偏差界限的計(jì)算

X-對比儀器結(jié)果Y-實(shí)驗(yàn)儀器結(jié)果

>4：離群點(diǎn)2、相對的絕對偏差界限的計(jì)算

>4：離群點(diǎn)方法間離群點(diǎn)的檢查1、絕對偏差界限計(jì)算

>4為離群點(diǎn)2、相對的絕對偏差界限計(jì)算

>4為離群點(diǎn)

離群點(diǎn)處理如果只有一個(gè)離群點(diǎn)，可將此樣品的全部數(shù)據(jù)(X、Y)進(jìn)行刪除，繼續(xù)進(jìn)行下面的分析。如果超過兩個(gè)以上的離群點(diǎn)，則需查找原因，如果僅僅是樣品的因素，則替換這些離群點(diǎn)數(shù)據(jù)或重新分析所有數(shù)據(jù)。1、對的散點(diǎn)圖

2、所有結(jié)果的散點(diǎn)圖

以每次測定的Y值為Y軸，雙份測定的X的均值為X軸3、偏差圖以每個(gè)樣本兩種儀器雙份測定的均值差(Yi一Xi)為Y軸；對比儀器每樣本雙份測定的均值(Xi)為x軸，以直線X=0為水平中線作圖4.偏差圖

以每個(gè)樣本兩種儀器每次測定的差(Yi一Xi)為Y軸；對比儀器每樣本雙份測定的均值(Xi)為X軸，以直線X=0為水平中線作圖

作為比較方法,理論上要求應(yīng)該沒有誤差,但在臨床實(shí)驗(yàn)室這是不可能達(dá)到的,EP9A文件指出,可用相關(guān)系數(shù)(r)來粗略估計(jì)X取值范圍是否足夠?qū)?。r≥0.975(或者是r2≥0.95)則認(rèn)為X范圍適合。用相關(guān)系數(shù)r的計(jì)算公式附注：如r<0.975,則使用部分個(gè)別差異法計(jì)算平均偏差。X