第七章紫外-可見(jiàn)分光光度法2

紫外吸收光譜的基本概念1紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理2紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)3分析條件的選擇456定性定量分析方法UV在有機(jī)藥物分析中的應(yīng)用21第七章紫外-可見(jiàn)分光光度法與檢測(cè)技術(shù)第七章紫外-可見(jiàn)分光光度法◆學(xué)習(xí)目標(biāo)⊙◆知識(shí)要求⊙◆能力要求⊙◆學(xué)習(xí)目標(biāo)通過(guò)學(xué)習(xí)光譜分析法概論、紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理、分光光度計(jì)的基本構(gòu)造、降低測(cè)量誤差的方法、常用的定性、定量方法等知識(shí)，了解光學(xué)分析法的知識(shí)體系，熟悉紫外-可見(jiàn)分光光度法的實(shí)際應(yīng)用，會(huì)用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定溶液的吸光度，并對(duì)有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析，為學(xué)習(xí)紅外分光光度法、熒光分光光度法、核磁共振波譜法及藥物分析課中有關(guān)藥品的定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定方法奠定基礎(chǔ)。

◆知識(shí)要求1．掌握光的吸收定律概念、表達(dá)式及條件，吸光系數(shù)和吸收光譜的意義，常用定量分析方法的原理和應(yīng)用。2．熟悉紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)、吸光度測(cè)量條件的選擇、偏離光的吸收定律的主要因素。3．了解光譜分析法的分類、紫外-可見(jiàn)吸收光譜的產(chǎn)生機(jī)制、定性分析的依據(jù)和方法?！裟芰σ?.能夠用光的吸收定律解決定量計(jì)算問(wèn)題

。2.能夠繪制吸收光譜曲線，找出被測(cè)組分的最大吸收波長(zhǎng)。3.能夠繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并能應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)樣品進(jìn)行定量分析。4.會(huì)使用常見(jiàn)的紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定溶液的吸光度。

案例導(dǎo)入

在夏天參加戶外活動(dòng)時(shí)，如果天氣晴朗，就應(yīng)該注意保護(hù)皮膚，否則，暴露在火辣辣太陽(yáng)之下的皮膚，數(shù)小時(shí)后就會(huì)出現(xiàn)紅腫、瘙癢、發(fā)熱、刺痛癥狀，數(shù)日后出現(xiàn)蛻皮現(xiàn)象，這表明太陽(yáng)光中有一種光線能傷害生物細(xì)胞。科學(xué)家研究證實(shí)，這種光線是紫外線。

根據(jù)可見(jiàn)光、紫外光與物質(zhì)分子的相互作用建立了紫外-可見(jiàn)分光光度法。

第一節(jié)紫外吸收光譜的基本概念根據(jù)待測(cè)物質(zhì)（原子或分子）發(fā)射或吸收的電磁輻射，以及待測(cè)物質(zhì)與電磁輻射的相互作用而建立起來(lái)的定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法，統(tǒng)稱為光學(xué)分析法。利用光譜進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析的方法稱為光譜分析法，簡(jiǎn)稱光譜法。

第一節(jié)紫外吸收光譜的基本概念一、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收從本質(zhì)上講，光是一種電磁輻射，又稱電磁波，具有波動(dòng)性和粒子性，即波粒二象性。波動(dòng)性：反射、折射、干涉、偏振粒子性：吸收、發(fā)射、光電效應(yīng)電磁波譜分區(qū)表輻射區(qū)段波長(zhǎng)范圍輻射區(qū)段波長(zhǎng)范圍射線10-3~0.1nm射線遠(yuǎn)紫外輻射紫外輻射可見(jiàn)光0.1~10nm10~200nm200~400nm400~760nm近紅外輻射中紅外輻射遠(yuǎn)紅外輻射微波無(wú)線電波0.76~2.5m2.5~50m50~300m0.3mm~1m1~1000m

電磁輻射電磁輻射是一種以電磁波的形式在空間高速傳播的粒子流，具有波動(dòng)性和微粒性。磁場(chǎng)電場(chǎng)傳播方向電磁輻射的波動(dòng)性電磁輻射與其它波，如聲波不同，電磁波不需傳播介質(zhì)，可在真空中傳輸。

c=λv電磁輻射的微粒性電磁輻射是由一顆顆不連續(xù)的光子構(gòu)成的粒子流。當(dāng)物質(zhì)吸收或發(fā)射一定波長(zhǎng)的電磁波時(shí)，是以吸收或發(fā)射一顆顆量子化的光子形式進(jìn)行的。一、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收

單色光:

單一波長(zhǎng)的光束復(fù)合光:

含有多種波長(zhǎng)的光束電磁波譜:

以波長(zhǎng)大小順序排列的電磁波譜圖互補(bǔ)光：兩種適當(dāng)顏色單色光按一定比例混合，可以得到白光，則這兩種單色光互稱補(bǔ)色光。波長(zhǎng)10pm300pm200nm400nm800nm500mm1cm1m光譜射線X射線紫外光可見(jiàn)光紅外光微波無(wú)線電波方法

光譜法分光光度法光譜法核磁共振可見(jiàn)光

一、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收

綠560～500白光紫400～450青藍(lán)480～490橙610～650青480～500紅650～750黃560～610藍(lán)450～480光的互補(bǔ)色示意圖課堂互動(dòng)1.硫酸銅能夠吸收白色光中的黃色光而呈現(xiàn)-------色2.一束白光透過(guò)高錳酸鉀溶液后，何種顏色的光被吸收了？

光的三原色白光的色散二、透光率與吸光度當(dāng)一束平行的單色光照射溶液時(shí)

I0＝Ia+It

二、透光率與吸光度透射光強(qiáng)度It與入射光強(qiáng)度I0的比值稱為透光率或透光度TT=It∕I0透光率的負(fù)對(duì)數(shù)為吸光度A

三、吸收光譜曲線

概念：以波長(zhǎng)λ為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)所描繪的曲線，稱為吸收光譜曲線，簡(jiǎn)稱吸收光譜，或A-λ曲線。特點(diǎn)：在相同條件下，同一物質(zhì)的不同濃度的溶液，其吸收光譜曲線相似，且λmax相同。這是定性分析的基礎(chǔ)。三、吸收曲線（吸收光譜）吸收光譜能準(zhǔn)確地描述物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收的情況最大吸收波長(zhǎng)定性依據(jù)：不同物質(zhì)因分子結(jié)構(gòu)不同而具有不同的特征吸收曲線定量依據(jù)：同波長(zhǎng)下吸光度隨濃度增大而增大一般情況下選擇最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定動(dòng)畫

三、吸收光譜曲線

吸收光譜曲線示意圖A480520560nmmax=515吸收曲線的討論1.同一種物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸光度不同。吸光度最大處對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)稱為最大吸收波長(zhǎng)λmax2.不同濃度的同一種物質(zhì)，其吸收曲線形狀相似λmax不變。而對(duì)于不同物質(zhì)，它們的吸收曲線形狀和λmax則不同。3.③吸收曲線可以提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，并作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)之一。4.不同濃度的同一種物質(zhì)，在某一定波長(zhǎng)下吸光度A有差異，在λmax處吸光度A的差異最大。此特性可作為物質(zhì)定量分析的依據(jù)5.在λmax處吸光度隨濃度變化的幅度最大，所以測(cè)定最靈敏。吸收曲線是定量分析中選擇入射光波長(zhǎng)的重要依據(jù)。第一節(jié)紫外吸收光譜的基本概念四、紫外-可見(jiàn)分光光度的特點(diǎn)特點(diǎn)靈敏度高準(zhǔn)確度高精密度好選擇性好易于普及應(yīng)用廣泛儀器簡(jiǎn)單操作簡(jiǎn)便價(jià)格低廉測(cè)定快速點(diǎn)滴積累1.光的本質(zhì)是電磁波，物質(zhì)對(duì)光的吸收具有選擇性2.吸光度是透光率倒數(shù)的對(duì)數(shù)，或是透光率的負(fù)對(duì)數(shù)3.吸收曲線是溶液在一定條件下的吸收度隨入射光波長(zhǎng)變化而變化的曲線。他與溶液的性質(zhì)有關(guān)，因此A-λ曲線的形狀和最大吸收波長(zhǎng)可以作為物質(zhì)定性的輔助依據(jù)。課堂活動(dòng)1．紫外-可見(jiàn)光的波長(zhǎng)范圍是

A．200~400nmB．400~760nmC．200~760nmD．360~800nm2．下列敘述錯(cuò)誤的是

A．光的能量與其波長(zhǎng)成反比

B．有色溶液越濃，對(duì)光的吸收也越強(qiáng)烈

C．物質(zhì)對(duì)光的吸收有選擇性

D．光的能量與其頻率成反比第一節(jié)概述課堂活動(dòng)3．紫外-可見(jiàn)分光光度法屬于A．原子發(fā)射光譜法B．原子吸收光譜法

C．分子發(fā)射光譜法D．分子吸收光譜法4．分子吸收可見(jiàn)-紫外光后，可發(fā)生哪種類型的分子能級(jí)躍遷

A．轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷B．振動(dòng)能級(jí)躍遷

C．電子能級(jí)躍遷D．以上都能發(fā)生

第一節(jié)概述第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理一、光的吸收定律

當(dāng)一束平行的單色光通過(guò)均勻、無(wú)散射的含有吸光性物質(zhì)的溶液時(shí)，在入射光的波長(zhǎng)、強(qiáng)度及溶液的溫度等條件不變的情況下，該溶液的吸光度A與溶液的濃度c及液層厚度L的乘積成正比，即：A＝K·L

·c

。稱為光的吸收定律（朗伯-比爾定律）。光的吸收定律是定量分析的理論依據(jù)。朗伯-比爾定律不僅適用于可見(jiàn)光，而且也適用于紫外光和紅外光；不僅適用于均勻、無(wú)散射的溶液，而且也適用于均勻、無(wú)散射的固體和氣體。實(shí)驗(yàn)證明：溶液對(duì)光的吸光度具有加和性。如果溶液中同時(shí)存在兩種或兩種以上的吸光性物質(zhì)，則測(cè)得的該溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物質(zhì)吸光度的總和，即：

A（a+b+c）＝Aa＋Ab＋Ac

第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理課堂活動(dòng)

某化合物溶液遵守光的吸收定律，當(dāng)濃度為c時(shí)，透光率為T，試計(jì)算：當(dāng)濃度為0.5c、2c時(shí)所對(duì)應(yīng)的透光率。

第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理二、吸光系數(shù)摩爾吸光系數(shù)：在入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時(shí)所測(cè)得的吸光度稱為摩爾吸光系數(shù)，常用ε表示。光吸收系數(shù)在入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液濃度為1g/L，液層厚度為1cm時(shí)的吸光度，稱為光吸收系數(shù)，常用表示，其量綱為L(zhǎng)/(g·cm)。

第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理百分吸光系數(shù)：在入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，溶液濃度為1﹪（W/V）、層厚度為1cm時(shí)所測(cè)得的吸光度稱為百分吸光系數(shù)，常用表示。

二者的關(guān)系：

課堂活動(dòng)用雙硫腙測(cè)定Cd2+溶液的吸光度A時(shí)，Cd2+（Cd的原子量為112）的濃度為140μg/L，在λ＝525nm波長(zhǎng)處，用L＝1cm的吸收池，測(cè)得吸光度A＝0.220，試計(jì)算摩爾吸光系數(shù)和百分吸收系數(shù)。

第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理課堂互動(dòng)某有色溶液的物質(zhì)的量濃度濃度為c，在一定條件下用1cm比色杯測(cè)得吸光度為A，則摩爾吸光系數(shù)應(yīng)為：

A．cAB．cMC．A/CD．C/A第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理三、偏離光的吸收定律的主要因素化學(xué)因素:(1)溶液的濃度(2)物質(zhì)的化學(xué)變化(3)溶劑的影響光學(xué)因素:(1)非單色光

(2)雜散光

(3)非平行光(4)反射現(xiàn)象

(5)散射現(xiàn)象第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理偏離光的吸收定律示意圖第二節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度法的基本原理點(diǎn)滴積累1．光的吸收定律表明了吸光度與液層厚度和濃度之間的關(guān)系，它是吸收光譜法定量分析的依據(jù)。2．吸光系數(shù)的表示方法有多種，隨待測(cè)溶液濃度的不同標(biāo)度而不同。3．偏離光的吸收定律的因素主要有化學(xué)因素和光學(xué)因素。第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)一、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的主要部件：光源—單色器—吸收池—檢測(cè)器—訊號(hào)處理與顯示器

第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)

二、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的光學(xué)性能1．測(cè)光方式2．波長(zhǎng)范圍3．狹縫或光譜帶寬4．雜散光5．波長(zhǎng)準(zhǔn)確度6．吸光度范圍7．波長(zhǎng)重復(fù)性8．測(cè)光準(zhǔn)確度9．光度重復(fù)性10．分辨率

第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)三、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的類型1.可見(jiàn)分光光度計(jì)721型

第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)三、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的類型1.可見(jiàn)分光光度計(jì)

722型第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)三、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的類型2.紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（1）單波長(zhǎng)分光光度計(jì)單光束分光光度計(jì)雙光束分光光度計(jì)第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)課堂活動(dòng)

1.試述紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的主要部件及其作用？

2.紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)有哪些類型？第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)第三節(jié)紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)點(diǎn)滴積累紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)相同，都由光源、單色器、吸收池、檢測(cè)器、訊號(hào)處理與顯示器等主要部件構(gòu)成，但不同型號(hào)儀器的外形差別很大，質(zhì)量和價(jià)格相差懸殊，操作方法迥異，使用之前應(yīng)仔細(xì)閱讀儀器使用說(shuō)明書。

第四節(jié)分析條件的選擇一、儀器測(cè)量條件的選擇

1.應(yīng)選擇最大吸收波長(zhǎng)作為入射光。

2.應(yīng)控制吸光度讀數(shù)范圍：吸光度在0.2~0.7之間；透光率在20%~65%之間。第四節(jié)分析條件的選擇二、顯色反應(yīng)條件的選擇1.對(duì)顯色劑及顯色反應(yīng)的要求

2.控制合適的顯色反應(yīng)條件

三、參比溶液的選擇1.溶劑參比溶液2.試樣參比溶液3.試劑參比溶液4.平行操作參比溶液第四節(jié)分析條件的選擇課堂活動(dòng)測(cè)定試樣時(shí)，吸光度的讀數(shù)應(yīng)控制在0.2～0.7范圍內(nèi)。若吸光度讀數(shù)不在此范圍，可采用哪些方法進(jìn)行調(diào)整?第四節(jié)分析條件的選擇點(diǎn)滴積累1．選擇吸光性物質(zhì)的最大吸收波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。2．使用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)時(shí)，讀數(shù)范圍應(yīng)控制在吸光度為0.2～0.7，透光率為65%～

20%之間。3．待測(cè)物質(zhì)在紫外-可見(jiàn)光區(qū)無(wú)吸收時(shí)，應(yīng)加顯色劑。顯色劑不得有干擾，反應(yīng)必須完全。4．一般用溶劑作參比溶液。必要時(shí)采用試樣參比溶液、試劑參比溶液或平行操作參比溶液。

第五節(jié)定性定量方法一、定性分析方法定性的基本依據(jù)：比較光譜的一致性。未知物和標(biāo)準(zhǔn)品的吸收光譜曲線，對(duì)比二者是否一致。

比較吸收光譜的特征數(shù)據(jù)及比值的一致性。二、雜質(zhì)檢查：將藥品光譜與藥品標(biāo)準(zhǔn)光譜相對(duì)照，利用雜質(zhì)的特征吸收，可以檢測(cè)出微量雜質(zhì)及其含量。案例分析貝諾酯的定性鑒別中國(guó)藥典(2010年版)規(guī)定：貝諾酯加無(wú)水乙醇制成每1ml約含7.5μg的溶液，在240nm處有最大吸收，相應(yīng)的百分吸光系數(shù)()應(yīng)為730～760。維生素B12也有三個(gè)吸收峰，分別在278nm、361nm、550nm波長(zhǎng)處，它們的吸光度比值應(yīng)為：A361nm/A278nm在1.70～1.88之間，A361nm/A550nm在3.15～3.45之間。

第五節(jié)定性定量方法案例分析葡萄糖注射液是臨床上常用的藥品之一。制備時(shí)需要高溫滅菌，葡萄糖會(huì)轉(zhuǎn)化為5-羥甲基糠醛而引入雜質(zhì)?！吨袊?guó)藥典》（2010年版）規(guī)定葡萄糖注射液在284nm波長(zhǎng)處的吸收度不得過(guò)0.32，以此控制其雜質(zhì)5-羥甲基糠醛的量。在284nm波長(zhǎng)處，葡萄糖無(wú)吸收，而雜質(zhì)5-羥甲基糠醛在此波長(zhǎng)處有最大吸收，可以通過(guò)控制供試品溶液在此波長(zhǎng)處的吸收度來(lái)控制雜質(zhì)的含量。

第五節(jié)定性定量方法第五節(jié)定性定量方法三、定量分析方法定量分析的依據(jù):A＝K·c·L（光的吸收定律）（一）單組分溶液的定量方法1.

標(biāo)準(zhǔn)曲線法：是紫外-可見(jiàn)分光光度法中最經(jīng)典的定量方法。

第五節(jié)定性定量方法標(biāo)準(zhǔn)曲線法的方法和步驟如下:（1）配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，選擇合適的參比溶液，在相同條件下，以待測(cè)組分的最大吸收波長(zhǎng)作為入射光，分別測(cè)定各標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的吸光度。（2）以濃度c為橫坐標(biāo)、吸光度A為縱坐標(biāo)描繪標(biāo)準(zhǔn)曲線。第五節(jié)定性定量方法

（3）按照相同的實(shí)驗(yàn)條件和操作程序，用待測(cè)溶液配制未知試樣溶液并測(cè)定其吸光度A樣，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找到與之對(duì)應(yīng)的未知試樣溶液的濃度c樣。

如右圖。

第五節(jié)定性定量方法2.標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法:在相同的條件下，配制濃度為cs的標(biāo)準(zhǔn)溶液和濃度為cx的試樣溶液，在最大吸收波長(zhǎng)處，分別測(cè)定二者的吸光度值為As、Ax

，依據(jù)朗伯-比爾定律得：As=csLAx=cxL

則:第五節(jié)定性定量方法3.吸光系數(shù)法:吸光系數(shù)法直接利用朗伯-比爾定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式A＝KcL進(jìn)行計(jì)算的定量分析方法。在手冊(cè)中查出待測(cè)物質(zhì)在最大吸收波長(zhǎng)處的吸光系數(shù)或,并在相同條件下測(cè)量樣品溶液的吸光度A，則其濃度為：

或第五節(jié)定性定量方法有時(shí)也可以將待測(cè)樣品溶液的吸光度換算成樣品組分的吸光系數(shù)，計(jì)算與標(biāo)準(zhǔn)品的吸光系數(shù)的比值，求出樣品中待測(cè)組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)?；虻谖骞?jié)定性定量方法實(shí)例：維生素B12水溶液在=361nm處的百分吸光系數(shù)=207。取維生素B12樣品30.0mg，加純化水溶解，用1L的容量瓶定容。將溶液盛于1cm的吸收池，測(cè)得361nm波長(zhǎng)處的吸光度A=0.600，試求樣品中維生素B12的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。解：第五節(jié)定性定量方法（二）二元組分溶液的定量方法

1.解聯(lián)立方程組法

當(dāng)試樣溶液中各待測(cè)組分相互干擾不太嚴(yán)重時(shí)，可根據(jù)吸光度具有加和性的特點(diǎn)，在同一試樣溶液中同時(shí)測(cè)定兩個(gè)或兩個(gè)以上的待測(cè)組分。假設(shè)要測(cè)定試樣中有兩個(gè)待測(cè)組分a和b，如果分別繪制a、b兩個(gè)純物質(zhì)的吸收光譜，則有三種情況。

第五節(jié)定性定量方法第五節(jié)定性定量方法（Ⅰ）表明，兩個(gè)待測(cè)組分在各自的最大吸收波長(zhǎng)處，另一組分沒(méi)有吸收，可以用測(cè)定單組分溶液的方法，分別在λ1和λ2波長(zhǎng)處測(cè)定組分a、b的吸收度,由光的吸收定律求得ca、cb。測(cè)定時(shí)兩組分互不干擾。（Ⅱ）表明，在組分a的最大吸收波長(zhǎng)λ1處，組分b對(duì)組分a的測(cè)定無(wú)干擾，而在組分b的最大吸收波長(zhǎng)λ2處，組分a對(duì)組分b的測(cè)定有干擾。這時(shí)，先在λ1波長(zhǎng)處單獨(dú)測(cè)量組分a；然后在λ2波長(zhǎng)處測(cè)量組分a、b的總吸光度，根據(jù)吸光度的加和性，從而可以求出cb。

第五節(jié)定性定量方法（Ⅲ）表明，兩個(gè)待測(cè)組分彼此相互干擾，此時(shí)，在波長(zhǎng)λ1和λ2處分別測(cè)定試樣溶液的總吸光度及，同時(shí)測(cè)定a、b純物質(zhì)的吸光系數(shù)、和、，根據(jù)吸光度的加和性，則由聯(lián)立方程組求得ca、cb。

第五節(jié)定性定量方法2.等吸收波長(zhǎng)消去法（雙波長(zhǎng)分光光度法）當(dāng)試樣中兩個(gè)待測(cè)組分的相互干擾比較嚴(yán)重時(shí)，用解聯(lián)立方程組的方法進(jìn)行定量分析會(huì)產(chǎn)生較大的誤差，這時(shí)可以用等吸收波長(zhǎng)消去法進(jìn)行測(cè)定。在試樣中含有兩個(gè)待測(cè)組分a和b時(shí)，若要測(cè)定組分b，組分a有干擾，應(yīng)設(shè)法消除組分a的吸收干擾。首先選擇待測(cè)組分b的最大吸收波長(zhǎng)λ2作為測(cè)量波長(zhǎng)，然后用作圖的方法選擇參比波長(zhǎng)λ1，使組分a在這兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度相等。

第五節(jié)定性定量方法試樣溶液在λ2和λ1兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光度之差，只與待測(cè)組分b（a）的濃度成正比，而與干擾組分的濃度無(wú)關(guān)。

3.差示分光光度法當(dāng)待測(cè)組分含量過(guò)高時(shí)，吸光度超出了準(zhǔn)確測(cè)量的讀數(shù)范圍，可以采用差示分光光度法。具體方法是用一個(gè)比試樣溶液濃度稍低的標(biāo)準(zhǔn)溶液作為參比溶液，將分光光度計(jì)調(diào)零（透光率100%），測(cè)得的吸光度就是被測(cè)試樣溶液試液與參比溶液的吸光度差值（相對(duì)吸光度）。根據(jù)光的吸收定律得：△A＝Ax－As＝ΕL(cx－cs)即：待測(cè)溶液與參比溶液的吸光度差值與兩溶液的濃度之差成正比。第五節(jié)定性定量方法第五節(jié)定性定量方法課堂活動(dòng)1.在紫外-可見(jiàn)分光光度法中，影響吸光系數(shù)的因素是A．溶劑的種類和性質(zhì)B．溶液的物質(zhì)量濃度

C．物質(zhì)的本性和光的波長(zhǎng)D．吸收池大小

E．待測(cè)物的分子結(jié)構(gòu)2.紫外-可見(jiàn)分光光度法常用的定量分析方法有

A．間接滴定法B．標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法C．標(biāo)準(zhǔn)曲線法

D．直接電位法E．吸光系數(shù)法第五節(jié)定性定量方法課堂互動(dòng)3．在符合朗伯-比爾定律的條件下，有色物質(zhì)的濃度、最大吸收波長(zhǎng)、吸光度三者的關(guān)系是A．增加、增加、增加B．增加、減小、不變

C．減小、增加、減小D．減小、不變、減小4．維生素D2的摩爾吸收系數(shù)264nm=18200。用2.0cm吸收池測(cè)定，如果要控制吸光度A在0.699～0.187范圍內(nèi)，應(yīng)使維生素D2溶液的濃度在什么范圍內(nèi)？第五節(jié)定性定量方法點(diǎn)滴積累（1）紫外-可見(jiàn)分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點(diǎn)：1．標(biāo)準(zhǔn)曲線法的優(yōu)點(diǎn)：測(cè)定大批量樣品時(shí)，操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、快速。缺點(diǎn)：不同人處理相同的測(cè)量數(shù)據(jù)，得到的結(jié)果不易完全相同。2．標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法的優(yōu)點(diǎn)：測(cè)量數(shù)據(jù)相同，任何人都能得到完全一致的結(jié)果。缺點(diǎn)：隨機(jī)誤差較大。3．吸光系數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)：與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法的優(yōu)點(diǎn)相同。缺點(diǎn)：測(cè)定條件不易與文獻(xiàn)完全一致，從而引入誤差。

第五節(jié)定性定量方法點(diǎn)滴積累（2）紫外-可見(jiàn)分光光度法的各種定量方法的優(yōu)缺點(diǎn)：4．解聯(lián)立方程組法的優(yōu)點(diǎn)：可以不經(jīng)分離直接測(cè)定二元組分溶液。缺點(diǎn)：在兩個(gè)測(cè)定波長(zhǎng)處，要求兩個(gè)組分的吸光系數(shù)有較大的差別。5．等吸收波長(zhǎng)消去法的優(yōu)點(diǎn)：可以不經(jīng)分離直接測(cè)定二元組分溶液，還適于測(cè)定混濁液的測(cè)定。缺點(diǎn)：要求干擾組分的吸收光譜中有一個(gè)峰或谷。6．差示分光光度法的優(yōu)點(diǎn)：可以直接測(cè)定高濃度溶液。缺點(diǎn)：需要用高精密度的儀器。

第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介一、有機(jī)化合物的紫外-可見(jiàn)吸收光譜有機(jī)化合物的紫外-可見(jiàn)吸收光譜主要是由分子中價(jià)電子的能級(jí)躍遷而產(chǎn)生的。電子的能級(jí)躍遷有4個(gè)基本類型。第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介二、根據(jù)紫外-可見(jiàn)吸收光譜推斷官能團(tuán)

三、根據(jù)紫外-可見(jiàn)吸收光譜推斷異構(gòu)體（一）判別順?lè)串悩?gòu)體（二）測(cè)定某些化合物的互變異構(gòu)現(xiàn)象第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介點(diǎn)滴積累1．紫外-可見(jiàn)吸收光譜是化合物的價(jià)電子能級(jí)躍遷形成的。2．根據(jù)紫外-可見(jiàn)吸收光譜的光譜特征，可以推斷待測(cè)化合物的官能團(tuán)、順?lè)串悩?gòu)和互變異構(gòu)。

第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介一、選擇題（一）單項(xiàng)選擇題1．紫外-可見(jiàn)光的波長(zhǎng)范圍是：A.200~400nmB．400~760nmC．200~760nmD．360~800nm2．下列敘述錯(cuò)誤的是：A．光的能量與其波長(zhǎng)成反比B．有色溶液越濃，對(duì)光的吸收也越強(qiáng)烈C．物質(zhì)對(duì)光的吸收有選擇性D．光的能量與其頻率成反比

【目標(biāo)檢測(cè)】第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介3．紫外-可見(jiàn)分光光度法屬于：A．原子發(fā)射光譜B．原子吸收光譜C．分子發(fā)射光譜D．分子吸收光譜4．分子吸收紫外-可見(jiàn)光后，可發(fā)生哪種類型的分子能級(jí)躍遷：A．轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)躍遷B．振動(dòng)能級(jí)躍遷C．電子能級(jí)躍遷D．以上都能發(fā)生第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介5．某有色溶液的摩爾濃度為c，在一定條件下用1cm比色杯測(cè)得吸光度為A，則摩爾吸光系數(shù)為：A．cAB．cMC．D．6．某吸光物質(zhì)的摩爾質(zhì)量為M，其摩爾吸收系數(shù)與比吸收系數(shù)的換算關(guān)系是

A．＝·MB．＝/M

C．＝·M/10D．＝/M×10第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介7．關(guān)于光的性質(zhì)，描述正確的是：A．光具有波粒二象性B．光具有發(fā)散性C．光具有顏色D．本質(zhì)是單色光8．某吸光物質(zhì)的吸光系數(shù)很大，則表明：A．該物質(zhì)溶液的濃度很大B．測(cè)定該物質(zhì)的靈敏度高C．入射光的波長(zhǎng)很大D．該物質(zhì)的分子量很大第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介9．相同條件下，測(cè)定甲、乙兩份同一有色物質(zhì)溶液的吸光度。若甲溶液1cm吸收池，乙溶液2cm吸收池進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果吸光度相同，甲、乙兩溶液濃度的關(guān)系：A．c甲＝c乙B．c乙＝4c甲C．c甲＝2c乙D．c乙＝2c甲10．在符合光的吸收定律條件下，有色物質(zhì)的濃度、最大吸收波長(zhǎng)、吸光度三者的關(guān)系是：A．增加、增加、增加B．增加、減小、不變C．減小、增加、減小D．減小、不變、減小

第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介11．吸收曲線是在一定條件下以入射光波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)所描繪的曲線，又稱為：A．工作曲線B．A-λ曲線C．A-c曲線D．滴定曲線12．標(biāo)準(zhǔn)曲線是在一定條件下以吸光度為橫坐標(biāo)、濃度為縱坐標(biāo)所描繪的曲線，也可稱為：A．A-λ曲線B．A-c曲線C．滴定曲線D．E-V曲線

第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介13．紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的基本結(jié)構(gòu)可分為：A．二個(gè)部分B．三個(gè)部分C．四個(gè)部分D．五個(gè)部分14．722型分光光度計(jì)的比色皿的材料為：A．石英B．鹵族元素C．硬質(zhì)塑料D．光學(xué)玻璃

第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介15．紫外-可見(jiàn)分光光度法定量分析的理論依據(jù)是：A．吸收曲線B．吸光系數(shù)C．光的吸收定律D．能斯特方程16．下列說(shuō)法正確的是：A．吸收曲線與物質(zhì)的性質(zhì)無(wú)關(guān)B．吸收曲線的基本形狀與溶液濃度無(wú)關(guān)C．濃度越大，吸光系數(shù)越大D．吸收曲線是一條通過(guò)原點(diǎn)的直線第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介17．測(cè)定大批量試樣時(shí)，適宜的定量方法是：A．標(biāo)準(zhǔn)曲線法B．標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法C．解聯(lián)立方程組法D．差視分光光度法18.紫外-可見(jiàn)分光光度法是基于被測(cè)物質(zhì)對(duì)：A．光的發(fā)射B．光的散射C．光的衍射D．光的吸收

第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介19．下面有關(guān)顯色劑的正確敘述是：A．本身必須是無(wú)色試劑并且不與待測(cè)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)B．本身必須是有顏色的物質(zhì)并且能吸收測(cè)定波長(zhǎng)的輻射C．能夠與待測(cè)物質(zhì)發(fā)生氧化還原反應(yīng)并生成鹽D．在一定條件下能與待測(cè)物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)并生成穩(wěn)定的吸收性物質(zhì)20．某種溶液的吸光度：A．與比色杯厚度成正比B．與溶液的濃度成反比C．與溶液體積成正比D．與入射光的波長(zhǎng)成正比

第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介21．雙光束分光光度計(jì)與單光束分光光度計(jì)的主要區(qū)別是：A．能將一束光分為兩束光B．使用兩個(gè)單色器C．用兩個(gè)光源獲得兩束光D．使用兩個(gè)檢測(cè)器22．下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是：A．標(biāo)準(zhǔn)曲線與物質(zhì)的性質(zhì)無(wú)關(guān)B．吸收曲線的基本形狀與溶液濃度無(wú)關(guān)C．濃度越大，吸光系數(shù)越大D．從吸收曲線上可以找到最大吸收波長(zhǎng)第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介（二）多項(xiàng)選擇題1．在可見(jiàn)光區(qū)測(cè)定吸光度時(shí)，吸收池的材質(zhì)可用：A．彩色玻璃B．光學(xué)玻璃C．石英

D．溴化鉀E．以上均可2．在紫外-可見(jiàn)分光光度法中，影響吸光系數(shù)的因素是：A．溶劑的種類和性質(zhì)B．溶液的物質(zhì)的量濃度C．物質(zhì)的本性和光的波長(zhǎng)D．吸收池大小E．待測(cè)物的分子結(jié)構(gòu)

第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介3．影響摩爾吸光系數(shù)的因素是：A．溫度B．溶劑的種類C．物質(zhì)的結(jié)構(gòu)D．入射光的波長(zhǎng)E．溶液的濃度4．光的吸收定律通常適用于：A．散射光B．單色光C．平行光D．折射光E．稀溶液第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介5．紫外-可見(jiàn)分光光度法常用的定量分析方法有：A．間接滴定法B．標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比法C．標(biāo)準(zhǔn)曲線法D．直接電位法E．吸光系數(shù)法6．紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的主要部件是：A．光源B．單色器C．吸收池D．檢測(cè)器E．顯示器第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介7．分光光度計(jì)常用的色散元件是：A．鎢絲燈B．棱鏡C．飽和甘汞電極D．光柵E．光電管8．紫外-可見(jiàn)分光光度法可用于某些藥物的：A．定性鑒別B．純度檢查C．毒理實(shí)驗(yàn)

D．含量測(cè)定E．藥理檢查第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介二、填空題1．可見(jiàn)光的波長(zhǎng)范圍為

，近紫外分光的波長(zhǎng)范圍為

。2．光的吸收定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式（A=KcL）中，K稱為吸光系數(shù)，常用三種方法來(lái)描述，分別是

、

、

，物質(zhì)的吸光系數(shù)愈大，表示該吸光物質(zhì)的吸光性愈

。3．吸收光譜是以

為橫坐標(biāo)，以

為縱坐標(biāo)而繪制的曲線。吸收峰最高處所對(duì)應(yīng)的波長(zhǎng)為

，用

表示。4．紫外—可見(jiàn)分光光度法進(jìn)行定量分析時(shí)，常選用

作入射光，此時(shí)測(cè)定的

最高。

第六節(jié)紫外-可見(jiàn)吸收光譜在有機(jī)化合物結(jié)構(gòu)分析中的應(yīng)用簡(jiǎn)介5．在紫外光區(qū)測(cè)定吸光度時(shí)，應(yīng)使用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的

燈作光源，所用吸收池的材質(zhì)是——。6．測(cè)定吸光度時(shí)，當(dāng)空白溶液置入光路時(shí)，應(yīng)使T＝

，此時(shí)A＝

。7．為提高測(cè)定的準(zhǔn)確度，溶液的吸光度讀數(shù)范圍應(yīng)調(diào)節(jié)在0.2～0.7為宜，可通過(guò)調(diào)節(jié)溶液的

和

來(lái)實(shí)現(xiàn)。8．紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)單組分溶液進(jìn)行定量分析的常用方法有

，