第二章 細胞培養(yǎng)設施和基本條件

第二章

細胞培養(yǎng)設施和基本條件細胞培養(yǎng)設施和基本條件實驗室設計原則:防止微生物污染和有害因素影響要求:工作環(huán)境清潔、空氣清新、干燥和無煙塵劃分不同功能區(qū)并用鋁合金板隔開無菌操作區(qū)應在室內較少走動的內側清洗和消毒安置在另室一般包括：準備室、培養(yǎng)室和緩沖室準備室：用于進行培養(yǎng)器皿的清洗、包裝、培養(yǎng)物質的準備和消毒以及供應物品的保藏等。培養(yǎng)室：用于進行細胞培養(yǎng)和各種無菌操作的實驗室。其基本條件是：清潔、無菌、干燥、不通風，并具有適宜的光線。天花板不宜高過2.5M。緩沖室：（更衣室）41緩沖室專用培養(yǎng)實驗室布局示意圖普通細胞培養(yǎng)室內走廊寬敞的細胞培養(yǎng)區(qū)

實驗室設備

一、最常用的大型必備裝置和儀器

超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、離心機、冰箱、電熱干燥箱、超純水裝置、消毒鍋、超聲波清洗器、恒溫水浴箱、冷凍保存裝置、天平等二、最常用的培養(yǎng)器具

l.過濾除菌裝置：不銹鋼正壓過濾器、一次性濾器2.手術器械3.培養(yǎng)器皿：溶液瓶、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、多孔培養(yǎng)板、移液管和吸管、離心管

凈化工作臺（必備?。?/p>

根據(jù)氣流的方向分為垂直流超凈工作臺

水平流超凈工作臺

根據(jù)操作結構分為:單邊操作及雙邊操作

超凈工作臺的工作原理是利用鼓風機驅動空氣遁過高效濾器除去空氣中的塵埃顆粒，使空氣得到凈化。凈化空氣徐徐通過工作臺面，使工作臺內構成無菌環(huán)境。要注意檢查是否堵塞?。淳凭珶簦?/p>

超凈工作臺結構和模式圖超凈工作臺使用前應用紫外燈照射30分鐘。操作最好在操作區(qū)的中心位置進行，在設計上，這是一個較安全的區(qū)域。開啟超凈工作臺風機并打開工作燈。

操作中嚴格遵守無菌操作規(guī)程。操作結束后，要認真清理操作臺面，除必備的公共物品外，其余要帶離工作臺。清水擦拭后，再用75%酒精擦拭臺面。超凈工作臺的使用及注意事項:CO2培養(yǎng)箱：用于維持適當溫度、濕度與pH質量關鍵在控溫裝置，溫度變化一般不應超過0.5度;培養(yǎng)箱的溫度設在35～37℃，這是人和哺乳動物培養(yǎng)細胞的最適溫度。

培養(yǎng)容器需與外界保持通氣狀態(tài)箱內空氣應保持干凈，定期消毒（紫外燈、酒精）水槽:用于保持一定濕度二氧化碳培養(yǎng)箱

CO2培養(yǎng)箱設定的條件為37℃，5％CO2

。使用CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)細胞時應注意的問題：1.用螺旋口瓶培養(yǎng)細胞時，需將瓶蓋微松，以保證通氣2.保持培養(yǎng)箱內空氣干凈3.箱內用無菌蒸餾水保持箱內濕度4.不宜長時間將門打開5.器械和手的消毒用途:烘干和干熱消毒玻璃器皿和金屬器械等使用時注意:1.鼓風與升溫同時進行，100度時可停止鼓風2.禁止先升溫后鼓風3.100度以下時再打開箱門4.塑料制品、橡膠等不能在干燥箱內消毒電熱恒溫鼓風干燥箱高壓滅菌鍋倒置顯微鏡

倒置顯微鏡(InvertedMicroscope)的組成和普通顯微鏡一樣，只不過物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺之下，后者在載物臺之上，用于觀察培養(yǎng)的活細胞，具有相差物鏡。學生正在進行細胞觀察倒置顯微鏡

倒置顯微鏡水純化裝置很少使用離子交換裝置處理的水蒸餾水裝置分金屬和玻璃兩種洗刷裝置人工洗刷*超聲洗滌裝置玻璃吸管洗滌自動雙重純水蒸餾器

超純水儀超聲波清洗機正壓過濾器細胞冷凍貯存器離心機小型臺式離心機符合分離細胞要求加樣器不銹鋼正壓過濾器離心機

液氮罐

Operationof

Micropipette

1、selectsuitablepipetteandtipsaccordingtothedesiredvolume2、setthevolume3、extractingthesolutionthroughpushingbuttontoposition14、releasingthroughpushingtobottom磁力攪拌器精密pH計微孔板震蕩器

器械（取材用）解剖刀解剖剪虹膜剪鑷子注意保護刀鋒，鈍刀對組織有傷害，不利細胞生長培養(yǎng)器皿等玻璃器皿