臨床免疫學(xué)和免疫檢驗(yàn) 酶免疫技術(shù) 練習(xí)題

臨床免疫學(xué)和免疫檢驗(yàn)酶免疫技術(shù)練習(xí)題一、A11、HRP與TMB反應(yīng)后，加H2SO4終止反應(yīng)前呈A、藍(lán)色B、橙黃色C、棕黃色D、黃色E、紫色2、HRP與底物OPD反應(yīng)后的測(cè)定波長(zhǎng)為A、278nmB、450nmC、403nmD、495nmE、492nm3、HRP與底物TMB反應(yīng)后的測(cè)定波長(zhǎng)為A、278nmB、450nmC、403nmD、495nmE、492nm4、用于標(biāo)記的HRP的RZ值應(yīng)大于A、2.4B、3.0C、1.5D、3.5E、5.05、酶免疫技術(shù)中酶的要求A、酶的活性要強(qiáng)，催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高，純度高B、易與抗體或抗原偶聯(lián)，標(biāo)記后酶活性保持穩(wěn)定C、作用專一性強(qiáng)，酶活性不受樣品中其他成分的影響D、酶催化底物后產(chǎn)生的產(chǎn)物易于判斷或測(cè)量，方法簡(jiǎn)單易行、敏感和重復(fù)性好E、以上都是6、酶免疫測(cè)定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標(biāo)記物而分為下述哪幾種類型A、均相異相B、同相均相C、異相固相D、固相均相E、固相異相7、酶增強(qiáng)免疫測(cè)定技術(shù)（EMIT）是一種（）。A、非均相酶免疫測(cè)定技術(shù)B、均相酶免疫測(cè)定技術(shù)C、酶免疫組織化學(xué)技術(shù)D、酶免疫測(cè)定與電泳相結(jié)合的技術(shù)E、電泳技術(shù)8、均相酶免疫測(cè)定不具有的特點(diǎn)是（）。A、常用于半抗原和小分子的檢測(cè)B、操作簡(jiǎn)便，易于自動(dòng)化C、不易受樣品中的內(nèi)源性酶的干擾D、酶與抗原結(jié)合后仍保留酶和抗原的活性E、靈敏度不及異相酶免測(cè)定9、ELISA檢測(cè)中“鉤狀效應(yīng)”（hookeffect）是指（）。A、鉤狀效應(yīng)即HOOK效應(yīng),是指由于抗原抗體比例不合適而導(dǎo)致假陰性的現(xiàn)象，其中抗原過量叫做前帶效應(yīng)8、雙抗體夾心一步法檢測(cè)抗原時(shí)抗原過量&雙抗體夾心法檢測(cè)抗原時(shí)RF的干擾D、檢測(cè)的假陽(yáng)性反應(yīng)E、競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)抗體時(shí)特異性問題10、ELISA試驗(yàn)以HRP為標(biāo)記酶時(shí)，常用的供氫底物為。。A、OPDB、OTC、YMBD、ABTSE、PNP11、制備抗體酶結(jié)合物的方法通常采用（）。A、戊二醛交聯(lián)法B、糖原染色法C、免疫印跡法D、酶耦聯(lián)測(cè)定法E、捕獲競(jìng)爭(zhēng)法12、斑點(diǎn)免疫層析試驗(yàn)最常用的載體材料是（）。A、乙酸纖維素膜B、尼龍膜C、濾紙D、硝酸纖維素膜E、玻璃纖維膜13、有關(guān)化學(xué)發(fā)光錯(cuò)誤的說(shuō)法是A、化學(xué)發(fā)光是指伴隨著化學(xué)反應(yīng)過程所產(chǎn)生的光的發(fā)射現(xiàn)象B、化學(xué)發(fā)光與熒光形成激發(fā)態(tài)分子的激發(fā)能相同C、化學(xué)發(fā)光是吸收了化學(xué)能使分子激發(fā)而發(fā)射的光D、大多數(shù)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)為氧化還原反應(yīng)E、化學(xué)發(fā)光必須提供足夠的化學(xué)能14、鉤狀效應(yīng)是指用ELISA一步法測(cè)定標(biāo)本中待測(cè)抗原時(shí)，抗原濃度過（），實(shí)測(cè)值偏（）的現(xiàn)象，極易造成假陰性A、低，高B、高C、高，低D、低，低E、高，不變15、酶增強(qiáng)免疫測(cè)定技術(shù)是最早取得實(shí)際應(yīng)用的（）。A、均相酶免疫測(cè)定B、異相酶免疫測(cè)定C、固相酶免疫測(cè)定D、液相酶免疫測(cè)定E、固相-液相酶免疫測(cè)定16、利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體的方法，通常稱為（）。人、雙抗體夾心法8、雙位點(diǎn)一步法C、間接法D、競(jìng)爭(zhēng)法E、捕獲法17、可用免疫滲濾試驗(yàn)和免疫層析試驗(yàn)檢測(cè)的項(xiàng)目沒有（）。A、抗HCVB、HIVC、HCGD、HBsAgE、HAV18、下列不屬于ELISA測(cè)定方法中所必需的試劑（）。A、固相的抗原或抗體B、酶標(biāo)記的抗原或抗體C、酶作用的底物D、戊二醛交聯(lián)劑E、稀釋的血清19、影響發(fā)光劑標(biāo)記的因素有A、被標(biāo)記蛋白的性質(zhì)B、原料比C、標(biāo)記率D、溫度E、以上都是20、ELISA試驗(yàn)中最常用的標(biāo)記酶是（）。A、ASTB、HRPC、ACPD、LDHE、ALT21、ELISA中最常用的固相載體是（）。A、聚氯乙烯B、聚苯乙烯C、三聚氧胺D、瓊脂糖E、尼龍膜22、ELISA板包被后，最常用的封閉物質(zhì)是（）。A、人白蛋白B、人球蛋白C、牛血清白蛋白D、牛血清球蛋白E、鼠白蛋白23、下圖所示的為哪一種ELISA技術(shù)的反應(yīng)原理示意圖（）。人、雙抗原夾心法8、雙位點(diǎn)一步法C、間接法測(cè)抗體D、競(jìng)爭(zhēng)法E、捕獲法24、用ELISA抗體夾心法檢測(cè)抗原A時(shí)，固相載體的包被物是（）。A、酶標(biāo)記A抗體B、未標(biāo)記的抗A抗體C、未標(biāo)記抗原AD、酶標(biāo)抗球蛋白抗體E、酶標(biāo)記的A抗原二、B1、A.免疫印跡法B.ELISA（雙抗體夾心法）C.自身紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)D.ELISA（間接法）E.免疫組織化學(xué)技術(shù)1>、可用于HIV抗體、HBsAg的檢測(cè)的方法是（）。ABCDE2>、測(cè)定HIV抗體確診HIV感染常用的方法是（）。ABCDE3>、對(duì)相應(yīng)的抗原進(jìn)行定性、定位和定量測(cè)定常用的方法是（）。ABCDE4>、檢測(cè)抗原最常用的方法是（）。ABCDE答案部分一、A1【正確答案】A【答案解析】TMB是一種優(yōu)于OPD的新型HRP色原底物。TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{(lán)色，加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色，最大吸收峰波長(zhǎng)為450nm?！敬鹨删幪?hào)100916712,點(diǎn)擊提問】【正確答案】E【答案解析】OPD被認(rèn)為是HRP最為敏感的色原底物之一。OPD在HRP的作用下顯橙黃色，加強(qiáng)酸如硫酸或鹽酸終止反應(yīng)后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長(zhǎng)。【答疑編號(hào)100916711,點(diǎn)擊提問】【正確答案】B【答案解析】TMB是一種優(yōu)于OPD的新型HRP色原底物。TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{(lán)色，加入硫酸終止反應(yīng)后變?yōu)辄S色，最大吸收峰波長(zhǎng)為450nm?！敬鹨删幪?hào)100916710,點(diǎn)擊提問】【正確答案】B【答案解析】用于酶免疫技術(shù)的HRP，其RZ值應(yīng)大于3.0?！敬鹨删幪?hào)100916709,點(diǎn)擊提問】【正確答案】E【答案解析】1.酶的活性要強(qiáng)，催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高，純度高。.易與抗體或抗原偶聯(lián)，標(biāo)記后酶活性保持穩(wěn)定，且不影響標(biāo)記抗原與抗體的免疫反應(yīng)性。.作用專一性強(qiáng)，酶活性不受樣品中其他成分的影響，受檢組織或體液中不存在與標(biāo)記酶相同的內(nèi)源性酶或抑制物。用于均相酶免疫測(cè)定的酶還要求當(dāng)抗體與酶標(biāo)抗原結(jié)合后，酶活性可出現(xiàn)抑制或激活。.酶催化底物后產(chǎn)生的產(chǎn)物易于判斷或測(cè)量，方法簡(jiǎn)單易行、敏感和重復(fù)性好?！敬鹨删幪?hào)100809891,點(diǎn)擊提問】【正確答案】A【答案解析】酶免疫測(cè)定根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需要分離結(jié)合的與游離的酶標(biāo)記物而分為均相和異相這兩類。【答疑編號(hào)100809890,點(diǎn)擊提問】【正確答案】B【答案解析】酶增強(qiáng)免疫測(cè)定技術(shù)（EMIT）是均相酶免疫測(cè)定技術(shù)。EMIT的基本原理：半抗原與酶結(jié)合成酶標(biāo)半抗原，保留半抗原和酶的活性，當(dāng)酶標(biāo)半抗原與抗體結(jié)合后，所標(biāo)的酶與抗體密切接觸，使酶的活性中心受到影響而活性被抑制，反應(yīng)后酶活力大小與標(biāo)本中的半抗原量呈一定的比例，從酶活力的測(cè)定結(jié)果可推算出標(biāo)本中半抗原的量?！敬鹨删幪?hào)100809889,點(diǎn)擊提問】【正確答案】C【答案解析】均相酶免疫測(cè)定是將半抗原或小分子抗原如藥物、激素、毒品、興奮劑等與酶結(jié)合制成酶標(biāo)記物，酶與抗原（半抗原）結(jié)合后仍保留酶和抗原（半抗原）的活性。均相酶免疫測(cè)定操作簡(jiǎn)便、快速、適合于自動(dòng)化，應(yīng)用廣泛，不僅可檢測(cè)藥物、激素、毒品、興奮劑等半抗原或小分子抗原，也可測(cè)定大分子蛋白質(zhì)、病毒及細(xì)胞性抗原成分。最大缺點(diǎn)是易受樣品中非特異的內(nèi)源性酶、酶抑制藥及交叉反應(yīng)物的干擾，而且由于采用競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合分析原理，靈敏度不及異相酶免測(cè)定。【答疑編號(hào)100809888,點(diǎn)擊提問】【正確答案】B【答案解析】在雙位點(diǎn)一步法測(cè)定中，應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)，類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí)，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合，而不再形成夾心復(fù)合物，所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果?！敬鹨删幪?hào)100809887,點(diǎn)擊提問】【正確答案】A【答案解析】許多化合物可作為HRP的供氧體，在ELISA中常用的供氫體底物為鄰苯二胺（OPD）、四甲基聯(lián)苯胺（FMB）和ABTS。OPD為在ELISA中應(yīng)用最多的底物，靈敏度高，比色方便?！敬鹨删幪?hào)100809886,點(diǎn)擊提問】【正確答案】A【答案解析】制備抗體酶結(jié)合物的方法通常有戊二醛交聯(lián)法、過碘酸鹽氧化法和標(biāo)記抗體鑒定法。【答疑編號(hào)100809885,點(diǎn)擊提問】【正確答案】D【答案解析】斑點(diǎn)免疫層析試驗(yàn)以硝酸纖維素為載體，利用微孔濾膜的毛細(xì)管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲移，猶如層析一般。【答疑編號(hào)100809884,點(diǎn)擊提問】【正確答案】B【答案解析】化學(xué)發(fā)光是吸收了化學(xué)能使分子激發(fā)而發(fā)射的光，而熒光是吸收了光能使分子激發(fā)而發(fā)射的光。【答疑編號(hào)100809883,點(diǎn)擊提問】【正確答案】C【答案解析】鉤狀效應(yīng)即HOOK效應(yīng)，是指由于抗原抗體比例不合適而導(dǎo)致假陰性的現(xiàn)象，其中抗體過量叫做前帶效應(yīng)；抗原過量叫做后帶效應(yīng)。在等價(jià)帶前后分別為抗體、抗原過剩則影響沉淀物的形成，這種現(xiàn)象稱為帶現(xiàn)象。帶現(xiàn)象在臨床檢驗(yàn)中經(jīng)常出現(xiàn)，特別是ELISA反應(yīng)中。出現(xiàn)在抗體過量時(shí)，稱為前帶，出現(xiàn)在抗原過剩時(shí)，稱為后帶。所以在臨床工作中一定要注意前帶和后帶現(xiàn)象，以免出現(xiàn)假陰性結(jié)果，尤其以前帶效應(yīng)明顯，這種情況可以通過進(jìn)一步稀釋樣本進(jìn)行解決?！敬鹨删幪?hào)100809877,點(diǎn)擊提問】【正確答案】A【答案解析】均相酶免疫測(cè)定方法有酶增強(qiáng)免疫測(cè)定技術(shù)（EMIT）和克隆酶供體免疫分析方法。其中，酶增強(qiáng)免疫測(cè)定技術(shù)是最早取得實(shí)際應(yīng)用的酶免疫測(cè)定方法?！敬鹨删幪?hào)100809876,點(diǎn)擊提問】【正確答案】C【答案解析】間接法是檢測(cè)抗體最常用的方法，其原理是利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體，只要更換不同的固相抗原，就可以用一種酶標(biāo)抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體?！敬鹨删幪?hào)100809875,點(diǎn)擊提問】【正確答案】E【答案解析】免疫滲濾試驗(yàn)和免疫層析試驗(yàn)具有簡(jiǎn)便、快速、單份測(cè)定、可立等結(jié)果等優(yōu)點(diǎn)，無(wú)需任何儀器設(shè)備，試劑穩(wěn)定，因此多用于急診檢驗(yàn)。這類試驗(yàn)不能準(zhǔn)確定量，所以主要限于檢測(cè)正常體液中不存在的物質(zhì)以及正常含量極低而在特殊情況下異常升高的物質(zhì)。目前臨床檢驗(yàn)中已開展的項(xiàng)目有HCG、抗HCV和抗HIV、HBsAg等，新項(xiàng)目正在不斷發(fā)展中?！敬鹨删幪?hào)100809874,點(diǎn)擊提問】【正確答案】D【答案解析】ELISA是在固相載體上包被抗原或抗體后，通過抗原抗體反應(yīng)使酶標(biāo)抗體（或酶標(biāo)抗原）結(jié)合到載體上，經(jīng)洗滌使結(jié)合的酶標(biāo)抗體和游離的酶標(biāo)抗體分離，洗去游離的酶標(biāo)抗體（或酶標(biāo)抗原）。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體。②酶標(biāo)記的抗原或抗體。③酶作用的底物。間接法和捕獲法還使用稀釋的血清標(biāo)本做試劑。戊二醛是一種雙功能團(tuán)試劑，可以使酶與蛋白質(zhì)或其他抗原的氨基通過它而耦聯(lián)。與ELISA的方法相反。【答疑編號(hào)100809873,點(diǎn)擊提問】【正確答案】E【答案解析】影響發(fā)光劑標(biāo)記的因素有被標(biāo)記蛋白的性質(zhì)、原料比、標(biāo)記率、溫度。【答疑編號(hào)100809872,點(diǎn)擊提問】【正確答案】B【答案解析】在ELISA中，常用的酶為辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP）。應(yīng)用AP系統(tǒng)，其敏感性一般高于應(yīng)用HRP系統(tǒng)，空白值也較低。但由于AP較難得到高純度制劑，穩(wěn)定性較HRP低，價(jià)格較HRP高，制備酶結(jié)合物時(shí)得率較HRP低等原因，國(guó)內(nèi)在ELISA中一般均采用HRP?！敬鹨删幪?hào)100809871,點(diǎn)擊提問】【正確答案】B【答案解析】酶免疫技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)的酶反應(yīng)底物。最常用的固相載體物質(zhì)是聚苯乙烯?！敬鹨删幪?hào)100809870,點(diǎn)擊提問】【正確答案】C【答案解析】將抗原或抗體固相化的過程稱為包被。由于載體的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯ELISA板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液（最常用的為pH9.6的碳酸緩沖液）中，加于ELISA板孔中在4℃過夜，經(jīng)清洗后即可應(yīng)用。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過低，固相載體表面有能被此蛋白質(zhì)完全覆蓋，其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會(huì)部分地吸附于固相載體表面，最后產(chǎn)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高。在這種情況下，如在包被后再用1%?5%牛血清白蛋白包被一次，可以消除這種干擾。這一過程稱為封閉。包被好的ELISA板在低溫可放置一段時(shí)間而不失去其免疫活性?！敬鹨删幪?hào)100809869,點(diǎn)擊提問】【正確答案】B【答案解析】酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的位點(diǎn)一步法是在雙抗體夾心法測(cè)定抗原時(shí)，如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體，則可如圖中所示，在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。此法不但簡(jiǎn)化了操作，縮短了反應(yīng)時(shí)間，如應(yīng)用高親和力的單克隆抗體，測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的ELISA提高到新水平?！敬鹨删幪?hào)100809868,點(diǎn)擊提問】【正確答案】B【答案解析】ELISA抗體夾心法檢測(cè)抗原A時(shí)，固相載體的包被物是未標(biāo)記的抗A抗體?！敬鹨删幪?hào)100809867,點(diǎn)擊提問】二、B1、【正確答案】C【答案解析】自身紅細(xì)